44
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
7.4.7.2. Pengamatan Berat badan Hewan Uji
Hewan uji yang dikelompokkan dan diberi perlakuan, juga dilakukan pengamatan berat badan dengan cara
menimbang semua hewan uji pada setiap kelompok perlakuan setiap hari selama 42 hari. Pengamatan
peningkatan berat badan dilakukan perminggu atau pada hari ke-7, ke-14, ke-21, ke-28, ke-35, dan ke-42.
7.4.7.3. Pengambilan Darah
Pengambilan darah dilakukan pada hari ke 43 pada vena ekor dengan cara disayat menggunakan silet. Darah
kemudian ditampung pada tabung EDTA, selanjutnya disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 7000 rpm.
Plasma yang diperoleh kemudian dipisahkan dengan menggunakan mikropipet lalu disimpan dalam lemari
pendingin hingga dilakukan pengukuran kadar kolesterol Purwanti, 2012. Sebelum diambil darahnya hewan uji
dipuasakan selama 14 jam Jeong et al,2010.
7.4.7.4. Pengukuran sampel ELITech Clinical System. 2014
a. Prosedur Pengukuran Kadar Kolesterol Total Kadar koleterol total ditetapkan dengan metode
kolorimetri enzimatik dengan kolesterol esterase, kolesterol oksidase, dan peroksidase sebagai katalis
indikator reaksi. Prinsip dari metode ini adalah sebagai berikut:
Kolesterol ester + H
2
O
kolesterol esterse
Kolesterol + O
2
kolesterol oksidase
2 H
2
O
2
+ 4-aminoantipirin + fenol
Peroksidase
kolest-4-en-3- on + H
2
O
2
Kuinonimin + 4 H
2
O Kolesterol +
asam lemak
45
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Komposisi Reagen: 4-Aminoantipirin
0,5 mmolL Fenol
24 mmolL Sodium Cholate
5 mmolL Peroksidase
≥1000 UL Kolesterol esterase
≥180 UL Kolesterol oksidase
≥β00 UL Buffer
50 mmolL; pH 6,7 Komposisi Standar:
Standar Kolesterol 200 mgdL
Jumlah aquades, sampel, standar, dan reagen kit kolesterol yang dibutuhkan dapat dilihat pada tabel 3.2.
Tabel 3.2. Pengukuran kadar kolesterol total Ke dalam kuvet diteteskan
Blangko µl
Standard µl
Sampel µl
Akuabides 10
- -
Sampel plasma
- -
10
Standar -
10 -
Larutan reagen Kit kolesterol
1000 1000
1000 Campuran sampel plasma dengan reagen kit
kolesterol dan campuran standar dan reagen kit kolesterol diinkubasi selama 325 detik pada suhu 37
o
C. Serapan sampel A sampel dan serapan standar A
standar diukur terhadap blangko pada panjang gelombang 500 nm.
46
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Perhitungan : Kadar
kolesterol total
dapat diperoleh
dengan menggunakan rumus:
� �
� =
� � � � � ��
� �
b. Penetapan kadar Trigliserida dalam plasma Darah ELITech Clinical System, 2014
Kadar trigliserida ditetapkan dengan metode kolorimetri enzimatik menggunakan gliserol-3-fosfat
oksidase GPO. Prinsip dari metode ini adalah sebagai berikut:
Trigliserida
Lipase
gliserol + asam lemak Gliserol + ATP
Gliserol kinase
Gliserol-3-fosfat + O
2
GPO
2 H
2
O
2
+Amino-4-antipirin + 4-klorofenol
peroksidase
kuinonimin + HCl + 4H
2
O Komposisi Reagen:
Buffer 50 mmolL, pH 7
Mg
2+
14,8 mmolL p-klorofenol
2,7 mmolL ATP
3,15 mmolL Potasium ferosianida
10 µmolL Amino-4-antipirin
0,31mmolL Lipoprotein Lipase
≥β000 UL Gliserol Kinase
≥500 UL Gliserol-3-fosfat oksidase
≥4000 UL Peroksidase
≥ 500 UL Gliserol-3-
fosfat + ADP
Dihidroksiaseton + fosfat + H
2
O
2
47
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Komposisi Standar: Standar TrigliseridaGliserol 200 mgdL
Jumlah Aquades, sampel, standar, dan reagen kit trigliserida yang dibutuhkan dapat dilihat pada tabel 3.3.
Tabel 3.3. Pengukuran kadar trigliserida Kedalam kuvet dipipetkan :
Blangko µl
Standard µl
Sampel µl
Aquades 10
- -
Sampel plasma
- -
10
Standar
- 10
-
Larutan reagen Kit trigliserida
1000 1000
1000
Campuran sampel plasma dengan larutan reagen kit trigliserida dan campuran standar dan reagen kit
trigliserida akan diinkubasi selama 425 detik pada suhu 37
o
C. Serapan sampel A sampel dan serapan standar A standar diukur terhadap blangko pada panjang
gelombang 500 nm. Perhitungan :
Kadar trigliserida dapat diperoleh dengan menggunakan rumus:
� �
� =
� � � � � ��
� �
48
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
c. Penetapan kadar kolesterol LDL dalam Plasma Darah Penetapan kadar kolesterol VLDL ditetapkan
dengan secara tidak langsung dengan menggunakan rumus Dipiro, 2005 :
Kolesterol VLDL mgdl = Trigliserida : 5
3.4.8. Analisa Data
Kategori