Aktivitas Antioksidan Dan Antibakteri Ekstrak Nipah (Nypa Fruticans) Terhadap Vibrio Sp Isolat Kepiting Bakau (Scylla Sp)

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI EKSTRAK

NIPAH (Nypa fruticans) TERHADAP Vibrio sp. ISOLAT

KEPITING BAKAU (Scylla sp.)

IMRA

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR 2016

PERNYATAAN MENGENAI TESIS DAN

SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA

Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis berjudul “Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah (Nypa fruticans) terhadap Vibrio sp. Isolat Kepiting Bakau (Scylla sp.)” adalah benar karya saya dengan arahan dari komisi pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini.

Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut Pertanian Bogor.

Bogor, Desember 2016

Imra

RINGKASAN

IMRA. Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah (Nypa fruticans) terhadap Vibrio sp. Isolat Kepiting Bakau (Scylla sp.). Dibimbing oleh KUSTIARIYAH TARMAN dan DESNIAR.

Nipah (Nypa fruticans) merupakan tanaman berbentuk palem yang banyak tumbuh di pesisir pantai daerah pasang surut sekitar kawasan hutan bakau. Tanaman ini banyak tersebar di pesisir pulau Sumatera, Kalimantan, Sulawesi, Maluku dan Papua. Nipah potensial sebagai sumber senyawa aktif antioksidan dan antibakteri alami. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antioksidan dan antibakteri dari buah dan daun nipah yang diekstraksi dengan metanol serta toksisitas dan komponen aktif yang terkandung di dalamnya. Penelitian ini dilakukan dalam dua tahap percobaan. Tahap pertama adalah preparasi dan ekstraksi, pengujian aktivitas antioksidan dan antibakteri beserta pengujian fitokimia dan toksisitas dari ekstrak terpilih. Tahap kedua adalah fraksinasi senyawa aktif ekstrak terpilih.

Aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun nipah memiliki aktivitas antioksidan kuat dengan nilai IC50 22.06 ppm dan tergolong antioksidan sangat kuat dibandingkan ekstrak kasar buah nipah dengan nilai IC50 450.00 ppm. Aktivitas antibakteri memperlihatkan bahwa ekstrak daun nipah (2 mg) juga memiliki aktivitas antibakteri terbaik dengan zona penghambatan 8.75 mm terhadap Vibrio sp. isolat kepiting bakau (Scylla sp.) dibandingkan ekstrak kasar buah nipah dengan zona penghambatan 5.50 mm.

Komponen aktif yang terdeteksi pada ekstrak terpilih daun nipah berasal dari golongan flavonoid, steroid, tanin, fenol hidroquinon dan saponin. Nilai LC50 ekstrak daun nipah yakni 663.60 ppm termasuk toksik. Fraksinasi dengan KLT menunjukkan keberadaan senyawa flavonoid dan steroid setelah disemprot dengan penampak warna FeCl3 dan anisaldehid asam sulfat. Fraksi hasil kromatografi kolom didapatkan 3 fraksi gabungan dimana fraksi II menunjukkan aktivitas antioksidan terbaik dengan nilai IC50 8.42 ppm.

SUMMARY

IMRA. Antioxidant and Antibacterial Activities of Nipah (Nypa fruticans) against Vibrio sp. Isolated From Mud Crab (Scylla sp.). Supervised by KUSTIARIYAH TARMAN and DESNIAR.

Nipah (Nypa fruticans) is a palm plant that grows in coastal areas around the tidal zone of mangrove forest. Nipah is widely distributed in the coasts of Sumatra, Kalimantan, Sulawesi, Maluku and Papua. Nipah potencially contains bioactive compounds as antioxidant and antibacterial. The aims of study was to determine the antioxidant and antibacterial activities, toxicity and the active components of fruits and palm leaves extracted by methanol. This study was conducted in two phases. The first phase was preparation and extraction, analysis antioxidant and antibacterial analysis, phytochemicals and toxicity testing of selected extracts. The second phase was fractionation activiti compound the chosen extracts.

The results showed that the antioxidant activity of the leaf extract was stronger (IC50 22.06 ppm) in comparison with fruit extract (IC50 450.00 ppm). The antibacterial activity of the leaf extract against Vibrio sp isolated from mud crab (Scylla sp.). was also stronger in compared to fruit extract with respective diameter of inhibition zone was 8.75 mm and 5.50 mm.

The active components detected in the selected extract of palm leaves were flavonoids, steroids, tanins, saponins and fenolhydroquinon. The LC50 value of palm leaf extract was 663.60 ppm which is categorized as toxic. Fractionation by TLC showed the presence of flavonoids and steroids after sprayed with color spray reagents FeCl3 and anysaldehyde sulfuric acid. Three fractions were obtained after coloumn chromatography. Fraction II showed the strongest antioxidant activity with IC50 value was 8.42 ppm.

© Hak Cipta Milik IPB, Tahun 2016

Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang

Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik, atau tinjauan suatu masalah; dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan IPB

Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh karya tulis ini dalam bentuk apa pun tanpa izin IPB

Tesis

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains

pada

Program Studi Teknologi Hasil Perairan

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI EKSTRAK

NIPAH (Nypa fruticans) TERHADAP Vibrio sp. ISOLAT

KEPITING BAKAU (Scylla sp.)

IMRA

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR 2016

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa ta’ala atas segala karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis ini. Tema yang dipilih dalam penelitian ini berjudul Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah (Nypa fruticans) Terhadap Vibrio sp. Isolat Kepiting Bakau (Scylla sp.) Tesis ini merupakan salah satu syarat untuk mendapatkan gelar master di Program Pascasarjana Teknologi Hasil Perairan.

Terima kasih penulis ucapkan kepada Dr Kustiariyah Tarman, MSi dan Dr Desniar, MSi selaku pembimbing, Prof Dr Ir Sri Purwaningsih MSi selaku penguji luar komisi, Dr Asadatun Abdullah MSi MSM selaku perwakilan gugus kendali mutu, serta Dr Ir Wini Trilaksani, MSc selaku Ketua Program Studi Teknologi Hasil Perairan, yang telah banyak memberi saran dan motivasi. Penulis mengucapkan terimakasih kepada Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi yang telah memberikan bantuan dana beasiswa. Disamping itu, penghargaan penulis sampaikan kepada Bapak Encik Weliyadi MSc sebagai kepala Laboratorium Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Borneo Tarakan yang telah memberikan ijin penelitian dan banyak memberi motivasi. Ungkapan terima kasih juga disampaikan kepada kedua orangtuaku, kakak, keluarga serta teman-teman Pascasarjana THP IPB angkatan 2014 dan Pra-magister IPB 2013 atas segala doa dan kasih sayangnya.

Kesempurnaan tesis ini tidak terlepas dari segala kritik dan saran yang membangun dari semua pihak. Semoga tesis ini dapat bermanfaat bagi pihak-pihak yang membutuhkannya.

Bogor, Desember 2016

DAFTAR ISI

DAFTAR TABEL xi

DAFTAR GAMBAR xi

DAFTAR LAMPIRAN xi

1 PENDAHULUAN 1

Latar Belakang 1

Tujuan Penelitian 2

Manfaat Penelitian 2

2 METODE PENELITIAN 2

Waktu dan Tempat 2

Bahan dan Alat 3

Prosedur Penelitian 3

Prosedur Analisis 5

3 HASIL DAN PEMBAHASAN 9

Ekstrak Kasar Daun dan Buah Nipah 11

Ekstrak Terpilih Daun Nipah 14

Fraksi Aktif Ekstrak Terpilih Daun Nipah 17

4 SIMPULAN DAN SARAN 23

Simpulan 23

Saran 23

DAFTAR PUSTAKA 24

LAMPIRAN 28

DAFTAR TABEL

1 Kandungan kadar air dan abu daun dan buah nipah. 11 2 Nilai IC50 ekstrak nipah dan standar asam askorbat dengan metode

DPPH. 12

3 Diameter hambat ekstrak daun dan buah nipah terhadap Vibrio sp.. 13

4 Komponen aktif daun nipah. 15

5 Nilai Rf KLT eluen heksana : diklorometana : etil asetat (3:1:3). 17

6 Aktivitas antioksidan fraksi gabungan. 20

DAFTAR GAMBAR

1 Diagram alir penelitian. 4

2 karekteristik daun dan buah nipah 10

3 Uji antibakteri ekstrak (a) daun dan (b) buah nipah terhadap bakteri

Vibrio sp. 14

4 Kromatogram KLT ekstrak kasar daun nipah 18

5 Kromatogram ekstrak daun nipah dengan reagen Anisaldehid (a), FeCl3

(b), DPPH (c) 19

6 Profiling nilai Rf fraksi 20

7 Hasil uji DPPH fraksi dari ungu menjadi kuning pucat: (kanan-kiri: blanko, 1 000 ppm, 750 ppm, 500 ppm, 250 ppm). 21

8 Kromatogram LCMS fraksi II 21

9 Spektrum massa senyawa pada Rt 5.73 22

DAFTAR LAMPIRAN

1 Hasil identifikasi nipah lokal 29

2 Grafik persamaan antioksidan 30

3 Isolasi Vibrio sp. dari kepiting bakau (Scylla sp.) 33

4 Pengujian komponen aktif 34

1.

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Nipah (Nypa fruticans) merupakan salah satu jenis mangrove berbentuk palem yang umumnya tumbuh di lingkungan hutan bakau di perairan payau daerah pasang surut. Luas hutan nipah alami di Indonesia mencapai seluas 4.237 juta ha (Dinas kehutanan 2012). Hutan nipah tersebut tersebar di pesisir pulau Sumatera, Kalimantan, Sulawesi, Maluku dan Papua. Nipah telah banyak dimanfaatkan oleh masyarakat diantaranya untuk membuat atap rumah, berbagai kerajinan, kayu bakar dan sapu lidi, serta beberapa produk misalnya gula nira, tepung dan makanan olahan. Bagian tanaman nipah juga telah dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional diantaranya obat sakit perut, diabetes dan obat penurun panas dalam oleh masyarakat pesisir Perairan Banyuasin Sumatera Selatan. Masyarakat pesisir Aceh mempercayai air rebusan daun nipah berkhasiat sebagai obat sariawan dan sakit gigi. Air rebusan arang akar dan daun nipah di Kalimantan digunakan sebagai obat sakit gigi dan sakit kepala (MIC 2009).

Penelitian sebelumnya diketahui tanaman nipah memiliki kandungan senyawa bahan aktif antioksidan dan antibakteri. Putri et al. (2013) menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun nipah dengan pelarut metanol 1:5 (b/v) memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 17.72 ppm. Effendi dan Suhardi (1998) menyebutkan bahwa nipah memiliki aktivitas antibakteri terhadap

Vibrio harveyi pada udang windu (Penaeus monodon). Lestari et al. (2016) mendapatkan adanya zona penghambatan fraksi etil asetat ekstrak daun nipah terhadap bakteri Escherichia coli (9.39 mm) dan Bacillus cereus (9.01 mm) pada konsentrasi 1000 ppm. Senyawa-senyawa aktif yang umumnya berperan dalam aktivitas antioksidan yaitu tanin, flavonoid, fenolik, saponin dan terpenoid. Margaretta et al. (2011) menyatakan senyawa fenolik memiliki gugus hidroksil pada struktur molekulnya yang mempunyai aktivitas penangkap radikal bebas dan apabila gugus hidroksilnya lebih dari satu maka aktivitas antioksidannya semakin kuat. Ajizat (2004) menyatakan senyawa flavonoid, saponin, terpenoid, fenolik dan tanin juga merupakan senyawa aktif yang berfungsi sebagai bahan antibakteri. Sehingga diperkirakan nipah mengandung komponen yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri. Melihat manfaatnya, nipah seharusnya dapat dimanfaatkan sebagai salah satu sumber alami antioksidan dan antibakteri secara luas, mengingat pemanfaatan hingga saat ini masih sekitar pesisir dan dimanfaatkan secara tradisional. Komponen-komponen yang terkandung dalam nipah dapat diidentifikasi dengan fraksinasi dan pemurnian lebih lanjut. Fraksinasi sangat diperlukan guna mengetahui komponen-komponen aktif yang berperan dalam antioksidan dan antibakteri nipah.

Kepiting bakau (Scylla sp.) merupakan salah satu komoditas perikanan yang hidup di perairan pantai khususnya di hutan bakau. Scylla sp. memiliki nilai ekonomis tinggi dan banyak diminati di pasaran baik di dalam maupun luar negeri. Permintaan kepiting bakau dari pengusaha restoran di Amerika Serikat mencapai 450 ton setiap bulan, sedangkan tujuan eksportir kepiting bakau tidak hanya sebatas di Amerika Serikat. Sebuah perusahaan di Tarakan selaku pengumpul dan eksportir kepiting bakau mengekspor 20 ton per bulan ke korea (KKP 2011).

2

Selama ini kebutuhan konsumen akan kepiting bakau sebagian besar masih dipenuhi dari hasil penangkapan di alam dimana habitat kepiting bakau berupa kawasan mangrove dengan substrat berlumpur, yang memungkinkan terjadinya kontaminasi mikroorganisme dari lingkungan habitatnya tersebut. Irianto (2005) menjelaskan salah satu bakteri yang merupakan patogen primer pada budidaya air laut dan dapat menyebabkan kematian pada organisme budidaya yakni Vibrio sp. Ashofa et al. (2014) menyatakan Vibrio merupakan patogen yang mengakibatkan kematian kepiting bakau pada lingkungan yang baik. Aftabuddin et al. (2014) mengemukakan spesies mikroorganisme yang disolasi dari kepiting Scylla sp. yakni dari jenis Vibrio diantaranya V. cholerae, V. harveyi, V. Fluvialis, V. parahaemolyticus dan V. mimicus. V. harveyi adalah spesies yang dominan terisolasi.

Nipah menghasilkan senyawa yang berpotensi sebagai sumber antioksidan alami sehingga potensial untuk mencegah dan mengobati berbagai penyakit degeneratif yang disebabkan oleh radikal bebas. Penelitian yang telah dilakukan masih pada tahap identifikasi, belum sampai fraksinasi dan pemurnian. Nipah juga memiliki senyawa antimikroba yang turut berperan mengendalikan populasi mikroorganisme. Nipah diharapkan dapat menjadi alternatif untuk mengatasi kontaminan kepiting bakau oleh Vibrio sp. dan dapat mempertahankan kelangsungan hidup kepiting bakau tersebut. Oleh karena itu, kajian tentang senyawa antibakteri masih sangat diperlukan untuk menanggulangi penyakit vibriosis pada kepiting bakau.

Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan :

1. Menentukan aktivitas antioksidan dan antibakteri buah dan daun N. fruticans

2. Menentukan komponen aktif dan toksisitas ekstrak N. fruticans terpilih 3. Menentukan fraksi aktif ekstrak N. fruticans terpilih

Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan memberi informasi kepada masyarakat tentang potensi antioksidan dan antibakteri Vibrio sp. dari ekstrak yang dihasilkan tumbuhan N. fruticans.

2.

METODE PENELITIAN

Waktu dan Tempat

Penelitian dilaksanakan pada bulan Juni 2015 sampai Desember 2015. Sampel buah dan daun Nypa fruticans diambil dari komunitas mangrove di kawasan konservasi mangrove Kota Tarakan. Penelitian ini dilakukan di beberapa laboratorium, yaitu Laboratorium Nutrisi Hasil Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Borneo Tarakan, Laboratorium Mikrobiologi Hasil

Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB dan Karantina Ikan Kelas II Kota Tarakan.

Bahan dan Alat

Bahan utama yang digunakan adalah buah dan daun Nypa fruticans serta bakteri Vibrio sp. isolat kepiting bakau (Scylla sp.). Bahan-bahan lain yang digunakan meliputi bahan kimia untuk ekstraksi dan fraksinasi senyawa aktif dari buah dan daun nipah, analisa kimia (kadar air dan kadar abu), pengujian antioksidan, fitokimia, dan toksisitas. Peralatan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah, shaker, vaccum rotary evaporator RV IKA 05 basic, Spektrofotometer UV-Vis mini 1240 (Shimadzu), kromatografi lapis tipis (KLT) silika gel 60 GF254 (Merck), kolom kromatografi (Merck) dan UPLC- QToF-MS/MS System (Waters).

Prosedur Penelitian

Penelitian ini dilakukan dalam dua tahap percobaan. Tahap pertama adalah determinasi tanaman, preparasi dan ekstraksi meliputi analisis kimia (kadar air dan kadar abu), pengujian aktivitas antioksidan dan daya hambat beserta pengujian fitokimia dan toksisitas dari ekstrak terpilih. Tahap dua adalah fraksinasi senyawa aktif ekstrak terpilih. Diagram alir penelitian dapat dilihat pada Gambar 1.

Determinasi N. fruticans

Determinasi bertujuan untuk menetapkan kebenaran yang berkaitan dengan ciri-ciri morfologi secara makroskopis tumbuhan nipah (Nypa fruticans) berdasarkan kepustakaan. Identifikasi/determinasi dilakukan di Herbarium Balai Penelitian, Pengembangan dan Inovasi Pusat Penelitian dan Pengembangan Hutan Kota Bogor.

Preparasi Sampel N. fruticans

Preparasi sampel daun nipah dilakukan dengan membuang tulang daun, kemudian memotong kecil-kecil lalu diblender. Sampel buah nipah dipreparasi dengan mengupas kulit buah, kemudian daging buah yang didapatkan dihaluskan dengan menggunakan blender. Daun dan buah yang telah halus kemudian ditentukan komposisi kimianya, antara lain: kadar air dan abu dengan mengunakan metode AOAC (2005).

Ekstraksi N. fruticans (Harbone 1987)

Daun dan buah yang telah halus masing-masing diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol (1:5, b/v) selama 24 jam, kemudian difiltrasi. Maserasi dilakukan berulang hingga ampas berwarna pucat. Filtrat yang terkumpul dipisahkan antara pelarut dan ekstraknya menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 40 – 50 oC hingga diperoleh ekstrak kasar berbentuk pasta. Ekstrak kemudian ditimbang untuk mendapatkan rendemen ekstraknya. Ekstrak kasar selanjutnya diuji aktivitas antioksidan dan antibakteri sehingga diperoleh ekstrak terpilih yang menunjukan aktivitas antioksidan dan antibakteri tertinggi.

4

Uji aktivitas antioksidan menggunakan metode 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil

(DPPH). Ekstrak kasar terpilih selanjutnya dianalisis fitokimia untuk mengetahui komponen senyawa aktif pada ekstrak tersebut dan diuji toksisitas.

Gambar 1 Diagram alir penelitian Maserasi dengan pelarut metanol (1:5 b/v)

setiap 1 hari sekali hingga ampas pucat Evaporasi

KLT dengan eluen heksana, etil asetat,

diklorometana Eluen terbaik Ekstrak terpilih

Kromatografi Kolom

Serbuk daun Serbuk buah Preparasi

uji kadar air uji kadar abu

Rendemen IC50

Daya hambat uji fitokimia uji toksisitas Sampel nipah lokal

Profiling senyawa Pengukuran Rf

- Profiling senyawa - Pengukuran Rf - Uji antioksidan Mendapatkan spot-spot pemisahan senyawa terbaik Ekstrak kasar

Fraksi aktif gabungan

Identifikasi

senyawa Fraksi terbaik

Determinasi/ identifikasi

Fraksinasi Senyawa Aktif N. fructicans (Harbone 1987)

Fraksinasi senyawa aktif ekstrak N. fruticans terpilih dilakukan dalam tiga tahapan. Tahap pertama adalah pemisahan dengan kromatografi lapis tipis menggunakan eluen heksana, diklorometana dan etil asetat, yang bertujuan untuk mengetahui rasio eluen terbaik yang dapat memisahkan senyawa aktif pada ekstrak kasar terpilih. Tahap kedua adalah pemisahan dengan kolom kromatografi untuk memperoleh fraksi-fraksi senyawa aktif yang kemudian dianalisa aktivitas antioksidan dan antibakterinya. Tahap ketiga adalah analisis menggunakan LC/MS untuk mengetahui senyawa aktif yang terdapat pada fraksi gabungan dengan aktivitas antioksidan dan antibakteri terbaik.

Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) (Sarker et al. 2006)

Pemisahan dengan KLT bertujuan untuk mendapatkan eluen yang dapat memisahkan senyawa aktif pada ekstrak kasar dengan baik. Eluen ini berfungsi sebagai fase gerak pada pemisahan menggunakan kromatografi kolom. Pemisahan dengan KLT dilakukan dengan melarutkan ekstrak terpilih sebanyak 0.02 g ke dalam 0.5 mL pelarutnya. Larutan ekstrak tersebut ditotolkan pada plat silika gel 60 F254 dengan panjang 10 cm, kemudian dikembangkan dengan eluen. Eluen pengembang yang digunakan adalah n-heksana, etil asetat, dan diklorometana. Eluen dengan pemisahan terbaik kemudian dikombinasikan satu dengan yang lain dengan berbagai perbandingan, dilakukan dengan mencoba beberapa kombinasi untuk mengembangkan spot ekstrak terpilih pada KLT.

Pemisahan dengan Kromatografi Kolom (Sarker et al. 2006)

Persiapan kromatografi kolom dilakukan dimana kolom diberi glasswool

pada bagian bawahnya. Sebanyak 40 g serbuk silika gel dilarutkan pada eluen terpilih sehingga diperoleh larutan silika gel. Larutan tersebut dimasukan kedalam kolom kemudian dilanjutkan dengan penjenuhan silika gel dalam kolom. Pada proses penjenuhan, bagian atas kolom ditutup dengan alumunium foil untuk mencegah penguapan eluen yang terdapat dalam kolom sehingga gel tetap dalam kondisi basah. Silika gel dijenuhkan selama 24 jam.

Ekstrak yang difraksinasi adalah ekstrak terpilih. Sebanyak 2 g ekstrak terpilih dilarutkan pada pelarut asal sebanyak 3 mL kemudian dimasukan kedalam kolom yang berisikan silika gel yang telah jenuh. Ekstrak dibiarkan mengalir kebagian penjerap kolom dan kolom terus dialiri dengan eluen (silika gel tidak boleh kering). Fraksi yang keluar dari kolom ditampung pada tabung reaksi dengan masing-masing tabung reaksi berisi 5 mL. Fraksi hasil kromatografi kolom dilakukan penggabungan fraksi dengan mengacu pada kesamaaan pola kromatogram. Fraksi gabungan kemudian dikeringkan untuk menghasilkan residu ekstrak, dan diuji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH.

Prosedur Analisis

Prosedur analisis dalam penelitian ini meliputi pengujian kadar air dan abu (AOAC 2005), aktivitas antioksidan metode DPPH (Hanani et al. 2005), daya hambat terhadap Vibrio sp., fitokimia (Harbone 1987) dan uji toksisitas (Mc Laughlin et al. 1998 dan Carballo et al. 2002).

6

Analisis Kadar Air (AOAC 2005)

Prosedur penentuan kadar air adalah sebagai berikut; sampel yang sudah homogen ditimbang 1 g (W1) dan diletakkan di dalam cawan kosong yang sudah ditimbang beratnya, dimana cawan dan tutupnya sudah dikeringkan di dalam oven serta didinginkan di dalam desikator. Cawan yang berisi sampel kemudian ditutup dan dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 105 ºC selama 4 jam atau sampai beratnya konstan. Selanjutnya cawan didinginkan di dalam desikator dan setelah dingin cawan ditimbang (W2).

Kadar air dapat dihitung dengan rumus:

Keterangan : W1 = Berat sampel awal

W2 = Berat sampel setelah dikeringkan

Analisis Kadar Abu (AOAC 2005)

Penentuan kadar abu dilakukan dengan metode pengabuan kering (dry ashing). Prinsip analisis ini adalah mengoksidasi semua zat organik pada suhu tinggi (sekitar 650 ºC), kemudian dilakukan penimbangan zat yang tertinggal setelah proses pembakaran tersebut. Kadar abu ditentukan dengan prosedur sebagai berikut; sampel sebanyak 2 g dimasukkan ke dalam cawan pengabuan yang telah ditimbang dan dibakar di dalam tanur serta didinginkan dalam desikator. Cawan yang berisi sampel dimasukkan ke dalam tanur pengabuan dan dibakar sampai didapat abu yang berwarna keabu-abuan. Suhu pemanasan dinaikkan secara bertahap sampai suhu mencapai 650 ºC dan dibiarkan selama 1 jam. Setelah suhu tungku pengabuan turun sekitar 200 °C, cawan yang berisi abu tersebut didinginkan di dalam desikator selama 30 menit dan kemudian ditimbang.

Pengujian Aktivitas Antioksidan (Blois 1958)

Aktivitas antioksidan ekstrak kasar daun dan buah nipah ditentukan menggunakan metode 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH) berdasarkan metode Blois (1958) yang dimodifikasi. Metode uji DPPH merupakan salah satu metode yang paling banyak digunakan untuk memperkirakan efesiensi kinerja dari substansi yang berperan sebagai antioksidan (Molyneux 2004). Metode uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan radikal bebas DPPH dipilih karena metode ini sederhana, mudah, cepat, peka dan hanya memerlukan sedikit sampel, akan tetapi jumlah pelarut pengencer yang diperlukan cukup banyak (Hardyningtyas 2012). Metode pengujian DPPH berdasarkan pada kemampuan substansi antioksidan tersebut dalam menetralisir radikal bebas. Radikal bebas yang digunakan adalah 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH). Radikal bebas DPPH merupakan radikal sintetik yang stabil pada suhu kamar dan larut dalam pelarut polar seperti metanol dan etanol (Molyneux 2004). Metanol dipilih sebagai pelarut karena metanol dapat melarutkan Kristal DPPH (Molyneux 2004) dan juga memiliki sifat yang dapat melarutkan komponen non polar di dalamnya.

Kadar air (wet basis) = � −�

� � %

Kadar abu total = ��

Awal pengujian aktivitas antioksidan adalah mempersiapkan larutan sampel. Sampel ekstrak kasar dari daun dan buah nipah dilarutkan dalam metanol dengan kosentrasi 250, 500, 750, dan 1000 ppm. Asam askorbat digunakan sebagai kontrol positif dengan masing-masing konsentrasi yang digunakan yakni 2, 4, 6, 8, dan 10 ppm. Larutan pereaksi DPPH yang digunakan dibuat dengan melarutkan DPPH dalam metanol p.a dengan kosentrasi 1mM, yang dibuat segar dan dijaga pada suhu rendah serta terlindung dari cahaya. Sebanyak 4.5 mL larutan uji atau larutan pembanding dimasukkan dalam tabung reaksi kemudian direaksikan dengan 0.5 mL larutan DPPH. Tabung reaksi tersebut ditutup dengan alumunium foil dan diinkubasi pada suhu 37 oC selama 1 jam kemudian diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

Absorbansi dari larutan blanko juga diukur untuk melakukan perhitungan persen inhibisi. Suatu senyawa dapat dikatakan memiliki aktivitas antioksidan apabila senyawa tersebut mampu mendonorkan atom hidrogennya yang ditandai oleh perubahan warna ungu menjadi kuning (Molyneux 2004). Aktivitas antioksidan masing-masing sampel dinyatakan dengan persentase penghambatan radikal bebas yang dihitung dengan rumus:

% %

Nilai konsentrasi dan hambatan ekstrak diplot masing-masing pada sumbu x dan y. Persamaan garis yang diperoleh dalam bentuk y=b Ln(x) + a digunakan untuk mencari nilai IC (Inhibitory concentration) dengan menyatakan nilai y sebesar 50 dan nilai x sebagai IC50. Nilai IC50 menyatakan konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk mereduksi DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC50 berarti aktivitas antioksidannya semakin tinggi. Suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50 kurang dari 50 ppm, kuat apabila nilai IC50 antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC50 berkisar 100-150 ppm, dan lemah apabila nilai IC50 berkisar antara 150-200 ppm (Blois 1958).

Uji Fitokimia (Harbone 1987)

Pengujian fitokimia dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya komponen-komponen bioaktif yang terdapat pada ekstrak kasar daun dan buah nipah terpilih. Uji fitokimia meliputi uji alkaloid, uji steroid/triterpenoid, flavonoid, tanin, saponin dan fenol hidrokuinon.

a. Alkaloid

Sebanyak 0.01 g sampel dilarutkan dalam beberapa tetes asam sulfat 2N. Pengujian menggunakan tiga pereaksi alkaloid yaitu pereaksi Dragendorff, pereaksi Meyer dan Pereaksi Wagner. Pereaksi Dragendorff dibuat dengan cara 0.8 g bismutsubnitrat ditambahkan dengan 10 mL asam asetat dan 40 mL air. Larutan ini dicampur dengan larutan yang dibuat dari 8 gram kalium iodide dalam 20 mL air. Sebanyak 1 volume campuran ini diencerkan dengan 2.3 volume asam asetat glacial dan 100 mL air. Pereaksi ini berwarna jingga. Pereaksi Meyer dibuat dengan cara menambahkan 1.36 g HgCl2 dengan 0.5 g KI lalu dilarutkan dan diencerkan dengan aquades menjadi 100 mL dengan

8

labu takar. Pereaksi ini tidak berwarna. Pereaksi Wagner dibuat dengan cara 10 mL akuades ditambahkan 2.5 g iodine dan 2 g KI lalu dilarutkan dan diencerkan dengan akuades menjadi 100 mL dengan labu takar. Pereaksi ini berwarna coklat. Hasil uji dinyatakan positif bila dengan pereaksi Dragendorff terbentuk endapan merah hingga jingga, endapan putih kekuningan dengan pereaksi Meyer dan endapan coklat dengan pereaksi Wagner.

b. Steroid /Triterpenoid

Sebanyak 0.01 g sampel dilarutkan dalam 2 mL kloroform dalam tabung reaksi yang kering, setelah itu ditambahkan 10 tetes anhidra asetat dan 3 tetes asam sulfat pekat. Reaksi positif ditunjukan dengan terbentuknya larutan berwarna merah untuk pertama kali kemudian berubah menjadi biru dan hijau. c. Flavonoid

Sebanyak 0.01 g sampel ditambahkan 0.1 mg serbuk magnesium dan 0.4 mL amil alkohol (campuran asam klorida 37% dan etanol 95% dengan volume yang sama) dan 4 mL alkohol kemudian campuran dikocok. Adanya flavonoid ditunjukan dengan terbentuknya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol.

d. Saponin (uji busa)

Saponin dapat dideteksi dengan uji busa dalam air panas. Busa yang stabil selama 30 menit dan tidak hilang pada penambahan 1 tetes HCl 2N menunjukan adanya saponin.

e. Fenol Hidrokuinon (Pereaksi FeCl3)

Sampel sebanyak 0.01 g diekstrak dengan 20 mL etanol 70%. Larutan yang dihasilkan diambil sebanyak 1 mL kemudian ditambahkan 2 tetes larutan FeCl3 5%. Adanya senyawa fenol dalam bahan ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau atau hijau biru.

Uji Toksisitas dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) (Mc Laughlin et al. 1998 dan Carballo et al. 2002)

Menurut Carballo et al. (2002), metode Brine Shrimp Lethality Test

(BSLT) biasanya digunakan dalam uji pendahuluan untuk penapisan aktivitas farmakologis pada produk alam. Pada uji ini digunakan larva Artemia salina

sebagai hewan uji. Mula-mula telur A. salina ditetaskan di dalam air laut dibawah lampu TL 40 watt selama 48 jam. Sebanyak 10 ekor larva A. salina dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian dimasukkan larutan ekstrak sampel dengan konsentrasi masing-masing 50 ppm, 100 ppm, 500 ppm dan 1000 ppm dan ditambahkan air laut sampai volume 5 mL. Air laut tanpa pemberian ekstrak (0 ppm) digunakan sebagai kontrol. Semua tabung reaksi diinkubasi pada suhu kamar selama 24 jam di bawah penerangan lampu TL 40 watt. Pengamatan dilakukan setelah 24 jam dengan menghitung jumlah A. salina yang mati pada tiap konsentrasi penetuan harga LC50 (ppm) dilakukan menggunakan analisis probit dan persamaan regresi. Mc Laughlin et al. (1998) menyatakan bila masing-masing ekstrak yang diuji kurang dari 1000 µg/mL maka dianggap menunjukkan aktivitas biologis.

Pengujian Aktivitas Antibakteri Terhadap Vibrio sp. dengan Penentuan Diameter Hambat.

Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi sumur agar yang modifikasi dari metode Holo et al. (1991). Sebanyak 20 μL bakteri

Vibrio sp. dimasukkan ke dalam 20 mL agar steril MHA, kemudian dibuat sumur. Sumur diisi ekstrak kasar 20 μL dengan konsentrasi 0.5, 1 dan 2 mg. Perlakuan kontrol positif menggunakan antibiotik kloramfenikol 300 μg/sumur, dan kontrol negatif menggunakan pelarut metanol. Lalu diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37 oC. Aktivitas antibakteri ditentukan dengan mengukur zona bening disekitar sumuran, kemudian dikurangkan dengan diameter sumur.

Penentuan Berat Molekul dengan LC/MS (Chen et al. 2007)

Kromatografi cair digabungkan dengan spektrometri massa (LC/MS) adalah teknik yang kuat untuk analisis ekstrak kompleks tanaman. HPLC efisien dalam memisahkan senyawa kimia dalam campuran, dan MS menyediakan informasi untuk penjelasan struktural senyawa. Analisis LC/MS memberikan informasi berat molekul untuk komponen ekstrak (Chen et al. 2007).

Tahapan ini dilakukan pada fraksi gabungan yang memiliki aktivitas antioksidan paling baik. Fraksi gabungan terpilih tersebut selanjutnya dianalisis dengan LC/MS untuk mengetahui berat molekulnya. Sebanyak 1 mg sampel fraksi gabungan dilarutkan dalam metanol. Sampel diambil 10 mL dan disuntikan pada LC/MS melalui kolom C-18 1.7 µm (2.1 x 50 mm) dengan kecepatan laju alir 0.3 mL/menit. Identifikasi berat molekul fraksi gabungan terbaik menggunakan LC/MS dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Pusat Pengembangan dan Teknologi (PUSPITEK) Serpong Tangerang.

Analisis Data

Data hasil penelitian merupakan hasil rata-rata dari dua kali ulangan beserta nilai standar deviasinya. Data tersebut dianalisis secara deskriptif, disajikan dalam tabel dan gambar. Data IC50 pada uji antioksidan diperoleh berdasarkan hasil analisis regresi pada program Microsoft Excel.

3.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Karakteristik Daun dan Buah Nipah

Sampel nipah yang digunakan dalam penelitian ini dideterminasi di Balai Penelitian, Pengembangan dan Inovasi Pusat Penelitian dan Pengembangan Hutan Kota Bogor menggunakan koleksi herbarium. Hasil determinasi menunjukkan tanaman nipah yang digunakan adalah spesies Nypa fruticans (Lampiran 1).

Nipah (Nypa fruticans) merupakan tanaman sejenis Palmae dari famili

Arecaceae yang tumbuh di lingkungan hutan bakau atau daerah pasang surut. Nipah mempunyai akar serabut yang menjalar, batangnya sangat pendek dan berupa rimpang yang terbenam di dalam tanah yang tidak kelihatan. Kulit tangkai mengkilap dan keras, sedangkan dibagian dalamnya berupa empular atau gabus.

Tabel 1 Kandungan kadar air (%) dan abu (%) daun dan buah nipah.

Komposisi Buah Daun

Kadar air _{58.02±2.60 57.85±1.34}

Kadar abu _{3.72±1.34 0.08±0.00}

Keterangan ± standar deviasi

Hasil analisis menunjukkan bahwa kadar air daun dan buah nipah sama besar (Tabel 1). Ristiana et al. (2012) menyatakan buah nipah yang sudah tua memiliki kadar air yang cukup tinggi yaitu 89.05%. Herman et al. (2011) buah nipah tua dan muda yang berasal dari Kaliwanggu Teluk Kendari Sulawesi Tenggara memiliki kadar air masing-masing yakni 41.86% dan 33.49%. Rahman (1991) menyatakan kadar air pada nira nipah berkisar 60-70%. Peranan air dalam bahan pangan dapat mempengaruhi aktivitas metabolisme misalnya aktivitas enzim, aktivitas mikroba, dan kimiawi yaitu terjadinya ketengikan dan reaksi-reaksi non enzimatis.

Penetapan kadar abu total dilakukan dengan pengabuan dalam tanur pada suhu 650 oC. Proses ini terjadi pemanasan bahan pada temperatur dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap, sehingga yang tertinggal hanya unsur mineral dan anorganik. Hasil penetapan yang diperoleh diketahui bahwa kadar abu daun nipah lebih kecil dibandingkan buah nipah (Tabel 1). Buah memiliki kadar abu yang cukup tinggi dimungkinkan karena kandungan mineral yang terkandung pada buah nipah. Hasil penelitian Herman et al. (2011) mendapatkan kandungan mineral Fe, Mg, K dan Na pada buah nipah cukup tinggi yakni masing-masing 1.38, 7.92, 3.79, dan 9.24 ppm. Ristiana et al. (2012) mendapatkan kadar abu buah nipah yaitu 0.57%. Herman et al. (2011) kadar abu buah nipah muda dan buah tua masing-masing 0.88% dan 1.01%. Heriyanto et al. (2011) tepung buah nipah kering memiliki kadar abu 1.14%.

Ekstrak Kasar Daun dan Buah Nipah Rendemen Ekstrak Kasar Buah dan Daun Nipah

Rendemen ekstrak merupakan perbandingan berat hasil akhir ekstrak dengan berat bahan awal sebelum diekstraksi. Ekstraksi dilakukan untuk memisahkan komponen senyawa aktif dari suatu bahan campuran dan dapat dilakukan menggunakan pelarut. Tujuan proses ekstraksi adalah untuk mendapatkan senyawa aktif dari bagian tertentu suatu bahan (Harborne 1987). Penelitian ini, proses ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi dan evaporasi. Proses maserasi menggunakan pelarut metanol. Pelarut metanol digunakan berdasarkan hasil penelitian Putri et al. (2013) dimana metanol memiliki rendemen ekstrak yakni 6.6 % terbaik dibandingkan pelarut lain. Hasil maserasi kemudian disaring mengunakan Whatman 42 dipisahkan filtrat dan residu. Residu kemudian dimaserasi lagi dengan pelarut metanol hingga residu berwarna pucat. Filtrat kemudian dievaporasi pada suhu 40-50 oC untuk mendapatkan ekstrak kasar.

Hasil ekstraksi daun dan buah nipah didapatkan rendemen ekstrak pada buah dan daun masing-masing yaitu 2.65% dan 7.62%. Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak daun nipah memiliki rendemen ekstrak yang lebih banyak dibandingkan ekstrak buah nipah. Hasil yang diperoleh hampir sama dengan yang

12

didapatkan Putri et al. (2013) dimana mendapatkan rendemen ekstrak sebanyak 6.60% pada ekstrak daun dengan pelarut metanol. Penelitian lain melaporkan beberapa vegetasi mangrove yang diekstrak dengan metanol menghasil rendemen yang hampir sama dengan daun nipah, dimana; Danata dan Yamindago (2014) melaporkan daun mangrove Avicennia marina yang diekstrak dengan pelarut metanol mendapatkan rendemen ekstrak yaitu 5.38%. Trianto et al. (2004) menyebutkan daun mangrove Aegiceras corniculatum yang di ekstrak dengan metanol didapat rendemen ekstrak yakni 13.25%.

Hasil ekstrak yang diperoleh akan sangat bergantung pada beberapa faktor, yaitu jenis pelarut, metode ekstraksi yang digunakan, ukuran partikel sampel, lama waktu ekstraksi, serta perbandingan jumlah pelarut terhadap jumlah sampel. Metanol merupakan pelarut dari golongan alkohol yang baik digunakan untuk ekstraksi karena dapat mengekstraksi habis komponen aktif Harbone (1987). Menurut Lapornik et al. (2005) pelarut metanol mampu mengekstrak komponen yang berasal dari golongan alkaloid, fenolik, karotenoid, tanin, asam amino dan glikosida, selain itu pelarut metanol juga memiliki sifat kurang polar dibandingkan dengan air, dengan demikian pelarut metanol mampu untuk menghancurkan dinding sel dan menyebabkan komponen-komponen dalam sel hancur dan larut dalam pelarut metanol.

Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Buah dan Daun Nipah

Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode 1,1-diphenyl-2

picrylhydrazil (DPPH). 1,1-diphenyl-2 picrylhydrazil (DPPH) merupakan senyawa radikal bebas yang paling stabil dibandingkan dengan contoh-contoh radikal bebas yang lainnya. Senyawa ini jika disimpan dalam keadaan kering dan kondisi penyimpanan yang baik akan tetap stabil selama bertahun-tahun. Antioksidan asam askorbat digunakan sebagai pembanding dan kontrol positif. Parameter yang umum digunakan untuk menginterpretasikan hasil pengujian DPPH adalah nilai IC50. Semakin kecil nilai IC50 berarti aktivitas antioksidannya semakin tinggi (Molyneux 2004). Hasil analisis nilai aktivitas antioksidan asam askorbat, ekstrak kasar daun dan buah nipah dapat dilihat pada Tabel 2 dan Lampiran 2.

Tabel 2 Nilai IC50 ekstrak nipah dan standar asam askorbat dengan metode DPPH.

Sampel % inhibisi

IC50 (ppm)

2 ppm 4 ppm 6 ppm 8 ppm

Asam askorbat 39.93 50.51 61.77 69.28 3.92

250 ppm 500 ppm 750 ppm 1000 ppm

Daun nipah 57.48 71.67 80.88 87.54 22.06

Buah nipah 49.80 50.40 51.15 51.65 415.00

Tabel 2 menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 22.06 ppm, sedangkan ekstrak buah memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dengan nilai IC50 415 ppm. Molyneux (2004) menyatakan Nilai IC50 merupakan konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk mereduksi DPPH 50%. Blois (1958) menyatakan suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50 kurang dari

50 ppm, kuat apabila nilai IC50 antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC50 berkisar 100-150 ppm, dan lemah apabila nilai IC50 berkisar antara 150-200 ppm. Hasil yang tertera pada Tabel 2 menunjukkan ekstrak daun nipah dan asam askorbat memiliki nilai IC50<50. Daun dan asam askorbat memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Putri et al. (2013) yang mendapat aktivitas antioksidan yang kuat pada ekstrak daun nipah menggunakan pelarut metanol dengan nilai IC50 17.72 ppm. Asam askorbat merupakan vitamin C yang dapat menghambat radikal bebas sehingga mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Molyneux (2004) menyatakan asam askorbat dapat mereduksi radikal bebas dari senyawa DPPH. Beberapa vegetasi mangrove juga diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Sudirman et al. (2014) melaporkan ekstrak kasar buah bakau berdaun besar (Bruguiera gymnorrhiza) memiliki IC50 pada buah tua dan muda masing-masing 13.46 ppm dan 81.60 ppm. Nurjanah et al. (2015) mendapatkan IC50 yakni 56.93 ppm pada ekstrak metanol kulit batang (B. gymnorrhiza). Haq et al. (2014) melaporkan ekstrak metanol kulit batang Sonneratia alba memiliki IC50 38 ppm.

Persen inhibisi pada peredaman radikal bebas merupakan kemampuan suatu bahan dalam menghambat radikal bebas yang berhubungan dengan konsentrasi bahan yang diuji. Persen inhibisi tertinggi selalu dihasilkan oleh larutan yang mengandung konsentrasi ekstrak kasar yang terbanyak, yaitu larutan dengan konsentrasi 1000 ppm pada masing-masing ekstrak. Persen inhibisi terendah selalu dihasilkan oleh larutan yang mengandung konsentrasi ekstrak kasar terkecil yaitu larutan dengan konsentrasi 250 ppm (pada masing-masing ekstrak kasar), hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak buah dan daun nipah yang ditambahkan, maka semakin tinggi pula persen inhibisi yang dihasilkan. Hanani et al. (2005) menyatakan bahwa persentase penghambatan ekstrak terhadap aktivitas radikal bebas meningkat dengan meningkatnya konsentrasi ekstrak.

Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Daun dan Buah Nipah

Vibrio sp. yang digunakan sebagai bakteri uji merupakan koleksi dari Stasiun Karantina Ikan Kelas II Kota Tarakan. Bakteri ini diisolasi dari kepiting bakau (Scylla sp.). Karakterisasi mengacu pada SNI 01-2332.5-2006 dan Cowan and Steel (1993) menggunakan media spesifik TCBS agar dan secara kimiawi menunjukkan bahwa bakteri tersebut adalah Vibrio sp. (Lampiran 3).

Hasil pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi sumur agar menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun dan buah nipah memiliki penghambatan terhadap Vibrio sp. yang diisolasi dari kepiting bakau (Scylla sp.) pada Gambar 3 dan Tabel 3.

Tabel 3 Diameter hambat ekstrak daun dan buah nipah terhadap Vibrio sp..

Ekstrak kasar Diameter zona hambat (mm)

2 mg 1 mg 0,5 mg (+) (-)

Daun nipah 8.75 7.50 6.50 25.00 0.00

Buah nipah 5.50 1.63 1.00 22.50 0.00

Keterangan : (+) kontrol positif kloramfenikol 0.015 mg/mL (-) kontrol negatif metanol

Ekstrak Terpilih Daun Nipah Komponen Aktif Ekstrak Terpilih Daun Nipah

Uji fitokimia dilakukan terhadap sampel yang menunjukan hasil terbaik pada uji antioksidan dan antibakteri. Berdasarkan kedua pengujian tersebut, ekstrak daun nipah merupakan ekstrak terbaik yang memiliki aktivitas terbaik sebagai antioksidan dan antibakteri dibandingkan dengan ekstrak buah nipah. Penentuan komponen aktif pada ekstrak daun nipah dilakukan melalui uji fitokimia. Uji fitokimia yang dilakukan meliputi uji alkaloid, triterpenoid (steroid), flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan tanin (Lampiran 4). Hasil screening

fitokimia ekstrak daun nipah dapat dilihat pada Tabel 4.

Tabel 4 Komponen aktif daun nipah.

Komponen aktif Hasil

Alkaloid - Wagner - Meyer - Dragendorf - - +

Fenol hidroquinon +

Tanin +

Flavonoid +

Saponin +

Triterpenoid/steroid +

Keterangan + : terdeteksi - : tidak terdeteksi

Berdasarkan uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak daun nipah mengandung komponen aktif antara lain; flavonoid, tanin, fenol hidroquinon, triterpenoid (steroid dan saponin). Senyawa-senyawa aktif yang umumnya berperan dalam antioksidan dan antibakteri yakni tanin, flavonoid, saponin dan steroid (Harbone 1987). Margaretta et al. (2011) mengatakan bahwa antioksidan alami yang berasal dari tumbuhan, seperti senyawa fenolik memiliki gugus hidroksil pada struktur molekulnya yang mempunyai aktivitas penangkap radikal bebas dan apabila gugus hidroksilnya lebih dari satu maka aktivitas antioksidannya semakin kuat. Meskin et al. (2002) menyebutkan aktivitas antioksidan dari senyawa fenol berhubungan dengan struktur senyawa fenol. Keberadaan dua grup hidroksil pada posisi orto atau para dari turunan asam benzoat, fenil propanoid, flavonoid diketahui dapat meningkatkan aktivitas antioksidan dari senyawa fenol. Parubak (2013) menyatakan senyawa fenolik yang positif artinya berpotensi sebagai bahan dasar obat-obatan.

Senyawa fenol merupakan senyawa yang dapat larut dalam senyawa polar dan sedikit polar. Fenol meliputi senyawa yang berasal dari tumbuhan dan mempunyai ciri yang sama, yaitu cincin aromatik yang mengandung satu atau dua gugus hidroksil. Fenol monosiklik sederhana, fenol propanoid dan kuinon fenolik. Kuinon adalah senyawa berwarna dan mempunyai kromofor dasar, yaitu kromofor pada benzokuinon (Harborne 1987).

Ekstrak daun teridentifikasi positif flavonoid. Flavonoid merupakan golongan fenol terbesar. Percival (1998) menyatakan bahwa flavonoid memiliki aktivitas antiinflamasi, antialergenik, antiviral, anti penuaan dini, antikanker dan antioksidan. Darsana et al. (2012) menyatakan komponen aktif yang berperan

16

dalam menghambat aktivitas bakteri umumnya berasal dari golongan saponin, steroid dan flavonoid dengan mekanisme kerjanya merusak membran sel bakteri. Aktivitas antibakteri masing-masing golongan senyawa tersebut berbeda-beda.

Tanin juga termasuk senyawa yang teridentifikasi positif pada ekstrak daun nipah. Senyawa yang tergolong tanin adalah senyawa polifenol yang mengandung gugus hidroksil dan gugus lainnya, sehingga mampu membentuk kompleks kuat dengan protein. Tanin terkondensi dihasilkan melalui polimerasi flavonoid dan banyak terdapat pada tanaman kayu yaitu pada lapisan biji. Zeeuthen et al. (2003) menyatakan tanin dapat bersifat sebagai antioksidan karena kemampuannya dalam menstabilkan fraksi lipid dan keaktifannya dalam penghambatan lipoksigenase. Tanin terkondesasi mempunyai aktivitas antibakteri karena dapat mengikat dinding sel bakteri, menghambat pertumbuhan dan aktivitas protease.

Ekstrak daun nipah memiliki kandungan triterpenoid. Triterpenoid merupakan senyawa tak berwarna berbentuk kristal mudah menguap dan memiliki bau. Steroid dan saponin merupakan golongan utama dari triterpenoid. Steroid terdapat dalam lapisan malam daun dan diperkirakan berfungsi sebagai pelindung untuk menolak serangga dan serangan mikroba. Saponin merupakan glikosida triterpenoid yang juga umum banyak di temukan pada tanaman. Saponin senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun, serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya membentuk busa (Harbone 1987). Menurut Naidu (2000), senyawa saponin dan steroid dilaporkan memiliki daya antibakteri terhadap beberapa spesies bakteri. Istiana (2005) mengemukakan saponin memiliki molekul yang dapat menarik air atau hidrofilik dan molekul yang dapat melarutkan lemak sehingga dapat menurunkan tegangan permukaan sel yang akhirnya menyebabkan hancurnya bakteri.

Toksisitas Ekstrak Terpilih Daun Nipah

Brine shrimp lethality test (BSLT) adalah suatu metode yang digunakan untuk menentukan toksisitas suatu senyawa. Metode ini juga biasa digunakan untuk penapisan awal terhadap senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak tanaman. Metode ini bersifat sederhana, mudah dilakukan, murah, cepat, dan membutuhkan ekstrak dalam jumlah sedikit (Pisutthanan et al. 2004). Metode BSLT dilakukan dengan menggunakan larva udang Artemia salina. Kemudian diberikan ekstrak tanaman dan diinkubasi selama 24 jam, lalu dilakukan penghitungan LC50 berdasarkan kematian 50% larva udang. Hasil LC50 yang didapat dimasukkan ke dalam kategorinya, LC50 yang lebih dari 1000 ppm termasuk dalam kategori tidak toksik, LC50 30–1000 ppm termasuk dalam kategori toksik dan LC50 yang kurang dari 30 ppm termasuk dalam kategori sangat toksik. Analisis toksisitas merupakan uji pendahuluan untuk mengamati sifat farmakologi suatu senyawa dari tumbuhan (Carballo et al. 2002).

Uji toksisitas menggunakan ekstrak terpilih yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri terbaik. Uji toksisitas ekstrak kasar terpilih daun nipah dengan metode BSLT termasuk dalam kategori toksisitas aktif dengan nilai LC50 663.60 ppm. Suatu zat dikatakan aktif atau toksik bila nilai LC50 <1000 ppm untuk ekstrak. Meyer (1982) menyatakan ekstrak tumbuhan jika dalam uji toksisitas dengan BSLT memiliki sifat toksik maka dapat dikembangkan sebagai antikanker. Ekstrak tumbuhan hasil BSLT jika tidak bersifat toksik maka dapat

dikembangkan ke penelitian lebih lanjut untuk meneliti khasiat-khasiat lain dari ekstrak tersebut. Toksisitas tanaman berkaitan erat dengan senyawa-senyawa metabolit sekunder yang ada didalamnya. Hasil uji fitokimia sebelumnya menunjukkan bahwa pada ekstrak daun nipah positif mengandung senyawa aktif flavonoid, steroid, tanin, saponin dan terpenoid, sehingga diduga sifat toksik dari ekstrak daun nipah berasal dari beberapa komponen aktif yang terkandung di dalamnya. Senyawa-senyawa aktif tersebut diduga toksik pada kadar-kadar tertentu. Senyawa saponin merupakan salah satu senyawa yang bersifat toksik dapat menyebabkan iritasi pada selaput lendir, bersifat toksis pada binatang berdarah dingin termasuk A. salina yang digunakan sebagai hewan percobaan pada uji toksisitas (Harbone 1987). Tomayahu et al. (2014) menyatakan bagi manusia, kandungan metabolit sekunder dari tumbuhan dapat digunakan untuk mengobati berbagai macam penyakit dan senyawa aktif umumnya hampir selalu toksik pada dosis tinggi. Ekstrak daun nipah dapat dimanfaatkan sebagai bahan obat-obatan pada kadar tertentu.

Fraksi Aktif Ekstrak Daun Nipah Komponen Fraksi Aktif Ekstrak Daun Nipah

Kromatografi digunakan untuk memisahkan substansi campuran menjadi komponen-komponen senyawa murni. Pemisahan senyawa biasanya menggunakan beberapa teknik kromatografi. Pemisahan ekstrak kasar terpilih daun nipah meliputi fraksinasi ekstrak kasar dengan pelarut metanol menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kolom. Kromatografi lapis tipis merupakan metode kromatografi yang sederhana, cepat, dan umum digunakan untuk mengidentifikasi zat farmasi. Pemisahan senyawa dilakukan dengan beberapa perbandingan pelarut. Semua kromatografi memiliki fase diam dapat berupa padatan atau kombinasi cair-padat dan fase gerak berupa cairan atau gas. Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen yang terdapat dalam campuran. Komponen-komponen yang berbeda bergerak dengan laju yang berbeda.

Fraksinasi senyawa menggunakan teknik kromatografi lapis tipis dilakukan untuk memisahkan senyawa yang ada pada ekstrak kasar terpilih daun nipah. Kromatografi ini digunakan untuk mencari eluen yang sesuai dalam memisahkan komponen yang terdapat dalam ekstrak. Eluen dapat berupa pelarut murni dan campuran dari dua atau lebih pelarut murni dengan perbandingan yang bervariasi. Ekstrak kasar yang digunakan yaitu ekstrak daun nipah yang memiliki aktivitas antioksidan terbaik. Eluen yang diperoleh, yaitu n-heksana : diklorometana : etil asetat (3:1:3). Pemisahan dengan kombinasi eluen terbaik tersebut pada plat KLT menghasilkan 3 spot fraksi dengan nilai Rf yang berbeda (Gambar 4). Nilai Rf ekstrakdaun nipah tersebut disajikan pada Tabel 5.

Tabel 5 Nilai Rf KLT dengan eluen hexana : diklorometana : etil asetat (3:1:3). Bercak pada KLT Jarak tempuh

pelarut (cm)

Jarak tempuh

komponen (cm) Nilai Rf

I 8 3.8 0.475

II 8 7.5 0.938

22

Puncak utama pada waktu retensi 5.73 yang diidentifikasi senyawanya berdasarkan spektrum massanya. Analisis data LCMS ini menggunakan MassLynx software (Version 4.1) dan identifikasi struktur senyawa kimia yang terdeteksi pada LCMS dengan database Massbank dan Chemspider (Royal Society of Chemistry UK) secara daring. Hasil spektrum massa senyawa pada puncak utama dapat di lihat pada Gambar 9.

Gambar 9 Spektrum massa senyawa pada Rt 5.73

Puncak utama dari spektrum massa fraksi II pada waktu retensi 5.73 menit menghasilkan m/z 607.3552 [M+H] (Gambar 9) dan diduga memiliki rumus struktur 2-((4-(3-ethyl-4,5- dihydroxyphenyl) yang merupakan golongan hidroksil fenolik. Hal ini sesuai dengan hasil uji fitokimia dan pewarnaan sebelumnya dimana ekstrak dan fraksi aktif daun nipah teridentifikasi senyawa golongan fenolik. Sachin et al. (2014) mendapatkan berat molekul senyawa yang diisolasi dari tanaman mangrove Acanthus ilicifolius memiliki m/z 684.24 [M+H] dengan rumus struktur 2-((4-(3-ethyl-4,5- dihydroxyphenyl) pada waktu retensi 4.12 menit. Kampkottera et al. (2008) menyatakan senyawa fenolik menunjukkan berbagai aktivitas biologis penting, termasuk antioksidan.

4.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Ekstrak kasar daun nipah memiliki aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan ekstrak kasar buah nipah. Ekstrak kasar daun nipah juga memiliki aktivitas antibakteri lebih kuat dibandingkan ekstrak kasar buah. Akan tetapi, keduanya termasuk dalam aktivitas sedang. Ekstrak kasar terpilih daun nipah mengandung senyawa flavonoid, steroid, tanin, saponin, fenol hidroquinon dan terpenoid serta memiliki toksisitas kuat. Ketiga fraksi hasil pemisahan memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Fraksi II memiliki aktivitas antioksidan paling kuat (IC50 8.42 ppm) dibandingkan fraksi I (IC50 23.75 ppm) dan III (IC50 18.18 ppm).

Saran

Perlu dilakukan pemurnian senyawa lebih lanjut terkait potensi antioksidan yang dimiliki oleh ekstrak daun nipah.

24

DAFTAR PUSTAKA

Aftabuddin S, Sikder MNA, Rahman MA, Zafar M. 2014. Antibiotic resistance of

Vibrio bacteria isolated from mud crab Scylla serrata of Chakoria Coast, Bangladesh. Journal Pharmaceutical, Biological and Chemical Scineces

4(3): 325.

Ajizat A. 2004. Sensitivitas Salmonella typhimurium terhadap ekstrak daun

Psidium guajava. Journal Bioscientive 1:31-38.

Association of Official Analytical Chemist [AOAC]. 2005. Official Method of The Association Official Agriculture Chemist. Washington DC: AOAC.

Ashofa EA, Sarjito, Prayitno SB. 2014. Identifikasi bakteri Vibrio yang berasosiasi dengan penyakit bakterial pada kepiting bakau (Scylla serrata) yang berasal dari Rembang. Journal of Aquaculture Management and Technology 3(2): 118-125.

Blois. 1958. Antioxidant determinations by the use of a stable free radical. Nature Journal 181: 1199-1200.

Brunetti C, Ferdinando M, Fini A, Polasstri S, Tattini M. 2013. Flavonoids as antioxidants and developmental regulators: relative significance in plants and humans. International Journal of Molecular Sciences 14: 3540-3555 Carballo JL, Hernandez-Inda ZL, Perez P, Garcia GMD. 2002. A comparison

between two brine shrimp assay to detect in vitro cytotoxicity in marine natural product . Bioorganic and Medicinal Chemistry Biotechnology 2: 17. Chen G, Pramanik BN, Liu YH, Mirza UA. 2007. Applications of LC/MS in

structure identifications of small molecules and proteins in drug discovery.

Journal Mass Spectrom 42: 279–287.

Cowan, Steel. 1993. Manual for Identification of Medical Bacteria. United Kingdom (UK): Cambridge University Press.

Danata RH, Yamindago A. 2014. Analisis aktivitas antibakteri ekstrak daun mangrove Avicennia marina dari Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten

Pasuruan terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan

Vibrio alginolyticus. Jurnal Kelautan 7(1).

Darsana IGO, Besung INK, Mahatmi H. 2012. Potensi daun binahong (Anredera cordifolia) dalam menghambat pertumbuhan bakteri

Escherichia coli secara In Vitro. Indonesia Medicus Veterinus 1(3):337-351. Davis WW, Stout TR. 1971. Disc plate method of microbiologial antibiotic assay.

Applied Microbiology 18(3): 403-414.

Dinas Kehutanan [DISHUT]. 1992. Potensi Hutan Nipah Indonesia. Jakarta (ID) :Dinas Kehutanan.

Effendi I, Suhardi. 1998. Studi pendahuluan tumbuhan mangrove sebagai antibakteri terhadap bakteri penyakit udang V. parahaemolyticus dan

V. harveyi. Prosiding, Seminar VI Ekosistem Mangrove, Pekanbaru 15-18 September 1998.

Haq I, Hosain ABMS, Khandaker MM, Merican AF, Faruq G, Boyce N, Azirun MS. 2014. Antioxidant and antibacterial activities of different extracts and fractions of mangrove plant Sonneratia alba. Journal International of Agriculture and Biology 16(4): 707-714.

Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Edisi kedua. Padmawinata K, Soediro I, penerjemah. Bandung (ID): ITB. Terjemahan dari : Phytochemical Methods. Hardiningtyas SD. 2012. Aktivitas antioksidan dan efek hepatoprotektif daun

api-api putih (Avicennia marina). [Tesis]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.

Heriyanto NM, Subiandono E, Karlina E. 2011. Potensi dan sebaran Nipah (Nypa fructicans Wurmb) sebagai sumberdaya pangan. Jurnal Penelitian dan Konservasi Alam 8 (4): 327-337.

Herman, Rusli R, Ilimu E, Hamid R, Haeruddin. 2011. Analisis kadar mineral dalam abu buah nipa (Nypa fruticans) Kaliwanggu Teluk Kendari Sulawesi Tenggara. Jurnal Tropical Pharmacy and Chemistry 1(2) : 107-113.

Holo H, Nilssen, Ness IF. 1991. Lactococcin A, a new bacteriocin from Lactococcus lactis spp. cremoris: isolation and characterization of the protein and its gene. Journal of Bacteriology 38: 79-87.

Istiana S. 2005. Perbandingan daya antibakteri perasan rimpang kunci (Boesenbergia pandurata Roxb) dengan bawang putih (Allium sativum L) terhadap Staphylococus aureus. Jurnal Kedokteran Hewan.

Irianto A. 2005. Patologi ikan Telestoi. Yogyakarta (ID): Gadjah Mada University Press.

Kampkotter A, Chovolou Y, Kulawik A, Rohrdanz E, Weber N, Proksch P, and Watjen W. 2008. The isoflavone daidzein possesses no antioxidant activities in cell-free assays but induces the antioxidant enzyme catalase. Nutrition Research 28: 620-628.

Kementrian Kelautan Perikanan. 2011. Statistik ekspor perikanan. Berbagai tahun. Jakarta (ID). KKP.

Lapornik B, Prosek, Wondra AG. 2005. Comparison of extract prepared from plant by – product using different solvents and extraction time. Journal of Food Engineering 71(2):214-222.

Lestari Y, Ardiningsih P, Nurlina. 2016. Aktivitas antibakteri Gram positif dan negatif dari ekstrak dan fraksi daun nipah (Nypa fruticans Wurmb.) asal pesisir sungai Kakap Kalimantan Barat. Jurnal Kimia Khatulistiwa 5(4): 1-8 Mangrove Information Center (MIC). 2009. Nypa fruticans. Bali (ID). Denpasar.

www.mangrovecenter.or.id.

Margaretta S dan Handayani SD. 2011. Ekstraksi senyawa phenolik Pandanus amaryllifolius ROXB sebagai antioksidan alami. Journal Widya Teknik 10: 21-30.

Mariswamy Y, Gnaraj WE, Antonisamy JM. 2012. Chromatographic fingerprint analysis on flavonoids constituents of the medicinally important plant

Aerva lanata by HPTLC technique. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine: S8-S12.

Matanjun P, Mohamed S, Mustapha NM, Muhammad K, and Ming CH. 2008. Antioxidant activities and phenolics content of eight species of seaweed from north Borneo. Journal of Applied Phycology 20:367-373.

Mc Laughlin JL, Rogers LL, Anderson JE. 1998. The use of biological assays to evaluate botanicals. Drugs Information Journal 32: 513-524.

Meskin MS, Bidlack WR, Davies AJ, Omaye ST. 2002. Phytochemicals in Nutrition and Health. London-New York (US): CRC Press.

26

Meyer BN, Ferrighi NR, Putnam JE, Jacobsen LB, Nichols DE, McLaughlin JL. 1982. Brine shrimp: A convenient general bioassay for active plant constituents. Planta Medica 45: 31-34.

Molyneux P. 2004. The use of stable free radical diphenylpicrylhydrazil (DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin Journal Science Technology 26(2): 211-219.

Moorthy K, Srinivasan K, Subramanian C, Palaniswamy M. 2007. Phytochemical screening and antibacterial evaluation of stem bark of Mallotus philippinensis var. Tomentosus. African Journal of Biotechnology 6(3): 1521-1523.

Naidu AS. 2000. Natural Food Antimicrobial Systems. USA (US): CRC Press. Nurjanah N, Jacoeb AM, Hidayat T, Shylina A. 2015. Bioactive compuonds and

antioxidant activities of Lindur Stem Bark (Bruguiera gymnorrhiza). Journal International of Plant Science and Ecology 1(5): 182-189.

Parubak AS. 2013. Senyawa flavonoid yang bersifat antibakteri dari akway (Drimys becariana. Gibbs). Journal Chemical Program 6(1).

Percival M. 1998. Antioxidants. Clinical Nutrition Insights 31(10):1-4.

Pisutthanan S, Plianbangchang, Ruanruay S, Muanrit O. 2004. Brine shrimp lethality activity of Thai Medicinal plants in the family Meliaceae.

Naresuan University Journal 12(2): 13-8.

Pokorny J, Yanishlieva, Gordon MH. 2001. Antioxidants in Food Practical Applications. New York (US) : CRC Press.

Putri IJ, Fauziyah, Elfita. 2013. Aktivitas antioksidan daun dan biji buah nipah (Nypa fructicans) asal Pesisir Banyuasin Sumatera Selatan dengan metode DPPH. Maspari Journal 5(1): 16-21.

Rahimah, Sayekti E, Jayuska A. (2013). Karakterisasi senyawa flavonoid hasil isolate dari fraksi etil asetat daun matoa (Pometia pinnata). Jurnal Kimia Khatulistiwa 2(2): 84-89.

Rahman AK, Sudarto Y. 1991. Nipah Sumber Pemanis Baru. Yogyakarta (ID): Kanisius.

Ristiana L, Wijana S, Putri WI. 2012. Studi proses pengolahan koktail dari tanaman nipah (Nypa fruticans). Jurnal Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya.

Sarker SD, Latif Z, Gray AI. 2006. Natural product isolation: an overview. Di dalam: Sarker SD, Latif Z, Gray AI., editor. Natural Product Isolation. Ed.Ke-2. New Jersey (US): Humana Press Inc.

Sachin R, Shahana K, Rupali G. 2014. Isolation and characterization of major phytoconstituents from the leaves of Rhizopora mucronata Lamk and

Acanthus ilicifolius Linn. Journal of Science and Engineering 2(2): 51-59. Saptiani G, Prayitno SB. Anggoro S. 2012. Aktivitas antibakteri ekstrak Jeruju

(Acanthus ilicifolius) terhadap pertumbuhan Vibrio harveyi secara in vitro.

Jurnal Vetriner 13(3): 257-262.

Standar Nasional Indonesia (SNI). 2006. SNI 01-2332.5-2006 Cara Uji Mikrobiologi V tentang Penentuan Vibrio parahaemolyticus pada Produk Perikanan. Jakarta (ID): SNI.

Sudirman S, Nurjanah, Jacoeb. AM. 2014. Proximate compositions, bioactive compounds and antioxidant activity from large-leafed mangrove

(Bruguiera gymnorrhiza) fruit. Journal International Food Research 21(6): 2387-2391.

Tomayahu R, Bialang N. Salimi YK. 2014. Identifikasi senyawa aktif dan uji toksisitas ekstrak daun binahong (Anredera cordifilia) dengan metode BSLT. Jurnal Fakultas MIPA. Universitas Negeri Gorontalo.

Trianto A, Wibowo E, Suryono, Sapta RS. 2004. Ekstrak daun mangrove

Aegiceras corniculatum sebagai antibakteri Vibrio harveyi dan

Vibrio parahaemolyticus. Jurnal Ilmu Kelautan 9(4): 186-189.

Wagner H, Bland S. 1996. Plant Drug Analysis. A Thin Layer Chromatografy Atlas 2nd. Berlin (DE): Springer.

Yadav S, Kumar P. 2012. Production, isolation and identification of flavonoids from aerial parts of Hiptage benghalensis. International Journal of Life Science and Pharma Research 2(3).

Zeuthen P, Surensen LB. 2003. Food Preservation Techniques. Cambridge England (US): CRC Press.

28

- Grafik persamaan linear ekstrak kasar buah nipah

ulangan konsetrasi Metanol

Abs inhibisi (%) IC50 B1 250 0.502 49.9001996

415 500 0.494 50.69860279

750 0.491 50.99800399 1000 0.486 51.49700599 B2 250 0.504 49.7005988

500 0.500 50.0998004 750 0,488 51.29740519 1000 0.483 51.79640719 Persen Inhibisi −

= −

= 49.9001996 %

Perhitungan nilai IC50 ekstrak kasar daun nipah Persamaan regresi : y = 0.0495x + 6.78 Nilai IC50 : y = 50

x = (50-6.78)/0.0495 = 415

y = 0.0495x - 6.78 R² = 0.9467

0 10 20 30 40 50

0 200 400 600 800 1000 1200

Ppm P erse n inhi bisi

32

y = 4.9655x + 30.545 R² = 0.9933

0 20 40 60 80

0 2 4 6 8 10

- Grafik persamaan linear asam askorbat

Sampel konsetrasi (ppm)

Metanol

Abs inhibisi (%) IC50 Asam

askorbat

2 0.176 39.93

3.92

4 0.145 50.51

6 0.112 61.77

8 0.090 69.28

Persen Inhibisi −

= −

= 39.93 %

Perhitungan nilai IC50 ekstrak kasar daun nipah Persamaan regresi : y = 4.9965x + 30.545 Nilai IC50 : y = 50

x = (50-30.545)/4.9965 = 3.92 P erse n inhi bisi ppm

36

RIWAYAT HIDUP

Imra dilahirkan di Tarakan, 22 Juni 1986, sebagai anak ke 11 dari pasangan Cide (Alm) dan Fatima. Pendidikan sarjana ditempuh di Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universutas Borneo Tarakan, lulus pada tahun 2010. Pada Tahun 2014 penulis diterima di Program Studi Teknologi Hasil Perairan pada Sekolah Pascasarjana IPB dengan bantuan dari Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi melalui program beasiswa BPPDN.

Penulis melakukan penelitian dengan judul “Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah (Nypa fruticans) Terhadap Vibrio sp. Isolat Kepiting Bakau (Scylla sp. ” sebagai syarat untuk menyelesaikan studi program Magister pada Program Studi Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.

31 - Grafik persamaan linear ekstrak kasar buah nipah

ulangan konsetrasi Metanol

Abs inhibisi (%) IC50 B1 250 0.502 49.9001996

415 500 0.494 50.69860279

750 0.491 50.99800399 1000 0.486 51.49700599 B2 250 0.504 49.7005988

500 0.500 50.0998004 750 0,488 51.29740519 1000 0.483 51.79640719 Persen Inhibisi −

= − = 49.9001996 %

Perhitungan nilai IC50 ekstrak kasar daun nipah Persamaan regresi : y = 0.0495x + 6.78 Nilai IC50 : y = 50

x = (50-6.78)/0.0495 = 415

y = 0.0495x - 6.78 R² = 0.9467

0 10 20 30 40 50

0 200 400 600 800 1000 1200

Ppm P erse n inhi bisi

32

y = 4.9655x + 30.545 R² = 0.9933

0 20 40 60 80

0 2 4 6 8 10

- Grafik persamaan linear asam askorbat

Sampel konsetrasi (ppm)

Metanol

Abs inhibisi (%) IC50 Asam

askorbat

2 0.176 39.93

3.92

4 0.145 50.51

6 0.112 61.77

8 0.090 69.28

Persen Inhibisi −

= − = 39.93 %

Perhitungan nilai IC50 ekstrak kasar daun nipah Persamaan regresi : y = 4.9965x + 30.545 Nilai IC50 : y = 50

x = (50-30.545)/4.9965 = 3.92 P erse n inhi bisi ppm

36

RIWAYAT HIDUP

Imra dilahirkan di Tarakan, 22 Juni 1986, sebagai anak ke 11 dari pasangan Cide (Alm) dan Fatima. Pendidikan sarjana ditempuh di Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universutas Borneo Tarakan, lulus pada tahun 2010. Pada Tahun 2014 penulis diterima di Program Studi Teknologi Hasil Perairan pada Sekolah Pascasarjana IPB dengan bantuan dari Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi melalui program beasiswa BPPDN.

Penulis melakukan penelitian dengan judul “Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah (Nypa fruticans) Terhadap Vibrio sp. Isolat Kepiting Bakau (Scylla sp. ” sebagai syarat untuk menyelesaikan studi program Magister pada Program Studi Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.