Uji Efek Antifertilitas Ekstrak Etanol Daun Pacing (Cheilocostus Speciosus (J. Koenig) C.D. Specht) Pada Mencit Betina

  Lampiran 1.

  Hasil persetujuan etik

  Lampiran 2.

  Hasil identifikasi tumbuhan

  Lampiran 3.

  Gambar tanaman pacing

  Lampiran 4.

  Gambar daun pacing tampak atas Gambar daun pacing tampak bawah

  Lampiran 5.

  Gambar simplisia kering daun pacing Gambar serbuk simplisia daun pacing

• Mikroskopis -

  Kadar sari yang larut dalam air c.

   simplisia

  Daun pacing Gambar bagan pembuatan, skrining fitokimia dan karakterisasi serbuk

  Serbuk simplisa daun pacing Dihaluskan

  Dilakukan pemeriksaan makroskopik Ditimbang berat kering = 930 g

  Kadar abu total e.

  Kadar sari yang larut dalam etanol d.

  Kadar air b.

  Lampiran 6.

  Penentuan: a.

  Saponin e. Tanin f. Steroida/triterpenoida

  Flavonoida c. Glikosida d.

  Alkaloida b.

  Karakterisasi Skrining fitokimia Pemeriksaan: a.

  ˚C Simplisia daun pacing

  Disortir, dicuci dan ditiriskan Ditimbang berat basah = 8,9 Kg Dikeringkan di dalam lemari pengering pada suhu ± 40

Kadar abu yang tidak larut dalam asam

  Lampiran 7. Gambar hasil mikroskopik serbuk simplisia daun pacing Keterangan gambar pada perbesaran 10x40: 1.

  1

  2

  3

  4

  5

Trikoma tipe multiseluler 2. Trikoma tipe uniseluler 3. Berkas pembuluh penebalan spiral 4. Stomata tipe parasitik 5. Hablur kalsium oksalat bentuk prisma

  Lampiran 8.

  350 g serbuk simlipisia daun pacing Dimaserasi dengan cairan penyari etanol 70%

  Ekstrak cair Dipekatkan dengan rotary evapator

  Ekstrak kental Skrining fitokimia

• Pemeriksaan: a.
• Penentuan kadar: a.

  Alkaloida b.

  Flavonoida c. Glikosida d.

  Saponin e. Tanin f. Steroida/triterpenoida

  Karakerisasi

  Air b.

  Sari yang larut dalam air c.

  Sari yang larut dalam etanol d.

  Abu total e. Abu yang tidak larut dalam asam

  Gambar bagan pembuatan, skrining fitokimia, dan karakterisasi EEDP

Lampiran 9. Perhitungan hasil karakterisasi simplisia daun pacing 1. Perhitungan kadar air simplisia

  Volum ak hir −Volum awal

  % Kadar air = x 100%

  Berat sampel

  No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml) 1. 5,0004 2,00 2,20 2. 5,0002 2,20 2,50 3. 5,0004 2,50 2,75

  2,20 −2,00

  1. x 100% = 3,99% Kadar air =

  5,0004 2,50 −2,20

  2. x 100% = 5,97% Kadar air =

  5,0002 2,75 −2,50

  3. x 100% = 4,98% Kadar air =

  5,0004 3,99% + 5,97% + 4,98%

  % Rata-rata kadar air = = 4,98%

  3 2.

Perhitungan kadar sari simplisia larut air

  Berat sari 100 ml

  % Kadar sari larut air = x x 100%

  Berat simplisia 20 ml

  No. Berat sampel (g) Berat sari (g) 1. 5,0135 0,0611 2. 5,0098 0,0680 3. 5,0148 0,0670

  

0,0611 g 100 ml

x

1.

  100% = 6,09%

  x

  Kadar sari larut air =

  5,0135 g 20 ml

0,0680 g 100 ml

  2.

  100% = 6,79%

  x x

  Kadar sari larut air =

  5,0098 g 20 ml

0,0671 g 100 ml

  3. x x 100% = 6,69% Kadar sari larut air =

  5,0148 g 20 ml 6,09% + 6,79% + 6,69%

  = 6,52% % Rata-rata kadar sari larut air

  

=

  3

Lampiran 9. (Lanjutan) 3. Perhitungan kadar sari simplisia larut etanol

  Berat sari 100 ml

  % Kadar sari larut etanol = 100%

  x x Berat simplisia 20 ml

  No. Berat sampel (g) Berat sari (g) 1. 5,0125 0,1813 2. 5,0113 0,1802 3. 5,0130 0,1752

  0,1813 g 100 ml

  1. x x 100% = 18,09% Kadar sari larut etanol =

  5,0125 g 20 ml 0,1802 g 100 ml

  2.

  100% = 17,98%

  x x

  Kadar sari larut etanol =

  5,0130 g 20 ml 0,1752 g 100 ml

  3.

  100% 17,48%

  x x =

  Kadar sari larut etanol =

  5,0130 g 20 ml 18,09%+17,98%+17,48%

  = 17,85 % % Rata-rata kadar sari larut etanol =

  3 4.

Perhitungan kadar abu total simplisia

  

Berat abu

  % Kadar abu total = x 100%

  Berat sampel

  No. Berat sampel (g) Berat abu (g) 1. 2,0004 0,4970 2. 2,0008 0,5161 3. 2,0005 0,4899

  0,499 %

  1. x 100% = 24,85 Kadar abu total =

  2,004 0,518

  2. x 100% = 25,79% Kadar abu total =

  2,008 0,491

  3. x 100% = 24,48% Kadar abu total =

  2,005 24,85%+25,79%+24,48%

  % Rata-rata kadar abu total = = 25,04%

  3

Lampiran 9. (Lanjutan) 5. Perhitungan kadar abu simplisia tidak larut asam

  Total abu

  % Kadar abu tidak larut asam = x 100%

  Berat sampel

  No. Berat sampel (g) Berat abu (g) 1. 2,0004 0,0179 2. 2,0008 0,0179 3. 2,0005 0,0039

  

0,0179

  1. x 100% = 0,89% Kadar abu tidak larut asam =

  2,0004

0,0179

  2. x 100% = 0,89% Kadar abu tidak larut asam =

  2,0008

0,0159

  3. x 100% = 0,79% Kadar abu tidak larut asam =

  2,0005 0,89% + 0,897% + 0,79%

  % Rata-rata kadar abu tidak larut asam = = 0,85%

  3 Lampiran 10.

Perhitungan hasil pemeriksaan karakteristik EEDP 1. Perhitungan kadar air EEDP

  Volum akhir −Volum awal

  % Kadar air simplisia = x 100%

  Berat sampel

  No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml) 1. 5,0003 2,00 2,40 2. 5,0004 2,40 2,85 3. 5,0003 2,85 3,25

  2,40 −2,00

  1. x 100% = 8,29% Kadar air =

  5,0003 2,85 −2,40

  2. x 100% 8,99%

  

=

  Kadar air =

  5,0004 3,25 −2,85

  3. x 100% = 7,99% Kadar air =

  5,0003 8,29% + 8,99% + 7,99%

  % Rata-rata kadar air = = 8,42%

  3

Lampiran 10. (Lanjutan) 2. Perhitungan kadar abu total EEDP

  Berat abu

  % Kadar abu total = x 100%

  Berat sampel

  No. Berat sampel (g) Berat abu (g) 1. 2,0005 0,4120 2. 2,0001 0,4048 3. 20004 0,4094

  0,4120

  1. x 100% = 20,59% Kadar abu total =

  2,0005 0,4048

  2. x 100% = 20,23% Kadar abu total =

  2,0001 0,4098

  3. x 100% = 20,46% Kadar abu total =

  2,0004 20,59% + 20,23% + 20,46%

  % Rata-rata kadar abu total = = 20,42%

  3 3.

Perhitungan kadar abu EEDP tidak larut asam

  Berat abu

  % Kadar abu tidak larut asam = x 100%

  Berat sampel

  No. Berat sampel (g) Berat abu (g) 1. 2,0005 0,0109 2. 2,0001 0,0129 3. 2,0004 0,0129

  0,0109 a.

  x 100% = 0,54% Kadar abu tidak larut asam =

  2,0005 0,0129

  b. x 100% = 0,64%

  Kadar abu tidak larut asam =

  2,0001 0,0129

  c. x 100% = 0,64%

  Kadar abu tidak larut asam =

  2,0004 0,54%+0,64%+0,64%

  % Rata-rata kadar abu tidak larut asam = = 0,60%

  3

  Lampiran 11.

  Diberi suspensi Na CMC 0.5% dengan dosis 1% BB

  Mencit SK-SSK SK

  Kontrol Dibagi ke dalam tiga kelompok dosis. Masing- masing diberikan EEDP dengan dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg BB selama satu minggu Diaklimatisasi Diperiksa siklus estrus dari masing-masing mencit

  Dibagi kelompok uji Dibagi kedalam tiga kelompo dosis, masing- masing diberikan EEDP dengan dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg BB selama satu minggu Dikawinkan Dilanjutkan pemberian selama satu minggu

  Diamati keadaan mencit Hasil Dikawinkan

  Hasil Diamati keadaan mencit

  Gambar bagan kerja pengujian ekstrak etanol daun pacing

  Lampiran 12.

  1 Gambar fase proestrus siklus estrus Keterangan: 1 = Sel epitel berinti

  1 Gambar fase estrus siklus estrus Keterangan: 1 = Sel epitel bertanduk

  Lampiran 12.(Lanjutan)

  1

  2 Gambar fase matestrus siklus estrus Keterangan: 1 = Sel epitel berinti 2 = Sel leokosit

  1

  2 Gambar fase diestrus siklus estrus Keterangan: 1 = Sel leukosit 2 = Sel epitel berinti

  Lampiran 13.

  Gambar oral sonde Gambar Mencit

  Lampiran 14.

  Contoh perhitungan dosis

  Tabel. Konversi perhitungan dosis antar jenis hewan Mencit 20 g

  Tikus 200 g Marmut 400 g

  Kelinci 1,5 kg

  Kera 4 kg Anjing 12 kg

  Manusia 70 kg Mencit 20 g

  10 7,0 12,25 27,8 64,1 124,3 387,9 Tikus 200 g

  0,14 1,0 1,74 3,0 9,2 17,8 56,0 Marmut 400 g

  0,008 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5 Kelinci

  1,5 g 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2

  Kera 4 g 0,016 0,11 0,19 0,42 10 1,9 6,1

  Anjing 12 kg 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1

  Manusia 70 kg 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,16 0,32 1,0 a.

Perhitungan dosis CMC Na 1% BB

  Berat mencit = 20 mg = 1/100 x 20 mg = 0,2 ml = 0,2 ml x 100 skala/1ml = 20 skala

  Lampiran 14. (Lanjutan) b.

  Contoh perhitungan dosis suspensi EEDP 1% yang akan diberikan pada mencit secara per oral

  1. Dosis EEDP yang diberikan adalah 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB.

  2. Cara pembuatan suspensi EEDP 1% Ditimbang 1 gram EEDP, digerus dalam lumpang. Kemudian ditambahkan sedikit larutan Na CMC 0,5% digerus sampai homogen.

  Dituang ke dalam labu tentukur 100 ml, kemudian dicukupkan volume nya dengan larutan Na CMC 0,5% sampai garis tanda.

  3. Berapa volume suspensi ekstrak etanol daun pacing 1% yang akan diberikan pada mencit? (misal berat mencit 25 g)

  25 Jumlah EEDP dosis 50 mg/Kg BB = x 50 mg = 1,5 mg 1000 1,25 mg

  Volume larutan yang diberi = = 0,125 ml

  10 mg /ml

  25 Jumlah EEDP dosis 100 mg/Kg BB = x 100 mg = 2,5 mg 1000 2,5 mg

  Volume larutan yang diberi = = 0,25 ml

  10 mg /ml

  25 Jumlah EEDP dosis 200 mg/kg BB = x 200 mg = 5 mg 1000 5 mg

  Volume larutan yang diberi = = 0,5 ml

  10 mg /ml

  Lampiran 15.

  Hasil perhitungan statistik Rumus Uji Fisher Exact Prabability Test

  JUMLAH

  I A B A+B

  II C D C+D A+C B+D N

  Keterangan: : Sampel I : Sampel II

  (

• )!( + )!( + )!( + )!

  p =

  ! ! ! ! !

  α = 0.,05 p ≤ α = ditolak p ≥ α = diterima 1.

  Perbandingan kelompok kontrol dengan kelompok uji a.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 50 mg/kg BB seminggu sebelum kopulasi dibandingkan dengan kontrol:

  KONTROL SK 50 JUMLAH HAMIL

  6

  4

  10 TIDAK HAMIL

  2

  2

  6

  6

  12

  10! 2! 6! 6!

  P =

  12! 6! 4! 0! 2!

  = 0,227 > 0,05

  Lampiran 15. (Lanjutan) b.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 100 mg/kg BB seminggu sebelum kopulasi dibandingkan dengan kontrol:

  KONTROL SK 100 JUMLAH HAMIL

  6

  2

  8 TIDAK HAMIL

  4

  4

  6

  6

  12

  8! 4! 6! 6!

  p =

  12! 6! 2! 0! 4!

  = 0,0303 < 0,05 c.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP 200 mg/kg BB seminggu sebelum kopulasi dibandingkan dengan kontrol:

  KONTROL SK 200 JUMLAH HAMIL

  6

  6 TIDAK HAMIL

  6

  6

  6

  6

  12

  6! 6! 6! 6!

  p =

  12! 6! 0! 0! 6!

• 3

  = 1,0822.10 < 0,05

  Lampiran 15. (Lanjutan) d.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 50 mg/kg BB seminggu sebelum kopulasi sampai seminggu setelah kopulasi dibandingkan dengan

  kontrol: KONTROL SK-SSK 50 JUMLAH

  HAMIL

  6

  3

  9 TIDAK HAMIL

  3

  3

  6

  6

  12

  9! 3! 6! 6!

  p =

  12! 6! 3! 0! 3!

  = 0,2412 < 0,05 e.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 100 mg/kg BB seminggu sebelum kopulasi sampai seminggu setelah kopulasi dibandingkan dengan

  kontrol: KONTROL SK-SSK 100 JUMLAH

  HAMIL

  6

  1

  7 TIDAK HAMIL

  5

  5

  6

  6

  12

  7! 5! 6! 6!

  p =

  12! 6! 1! 0! 5!

• 3

  = 7,5757.10 < 0,05

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg BB seminggu sebelum kopulasi sampai seminggu setelah kopulasi dibandingkan dengan

  kontrol: KONTROL SK-SSK 200 JUMLAH

  HAMIL

  6

  6 TIDAK HAMIL

  6

  6

  6

  6

  12 p =

  6! 6! 6! 6! 12! 6! 0! 0! 6!

• 3

  = 1,0822.10

  < 0,05 2. Perbandingan masing-masing kelompok uji a.

  Lampiran 15. (Lanjutan) f.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 50 mg/kg BB dibandingkan dengan kelompok yang diberi EEDP dosis 100 mg/kg BB pada pemberian

  2

  6 TIDAK HAMIL

  2

  4

  6

  6

  6

  12 p =

  6! 6! 6! 6! 12! 4! 2! 2! 4!

  = 0,2435 > 0,05

  4

  seminggu sebelum kopulasi SK 50 SK 100 JUMLAH HAMIL

  Lampiran 15. (Lanjutan) b.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 50 mg/kg BB dibandingkan dengan kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg BB pada pemberian

  seminggu sebelum kopulasi kawin SK 50 SK 200 JUMLAH HAMIL

  4

  4 TIDAK HAMIL

  2

  6

  8

  6

  6

  12

  4! 8! 6! 6!

  p =

  12! 4! 0! 2! 6!

  = 0,0303 < 0,05 c.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 100 mg/kg BB dibandingkan dengan kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg BB pada pemberian

  seminggu sebelum kopulasi SK 100 SK 200 JUMLAH HAMIL

  2

  2 TIDAK HAMIL

  4

  6

  10

  6

  6

  12

  2! 10! 6! 6!

  p =

  12! 2! 0! 4! 6!

  = 0,2272 > 0,05

  Lampiran 15. (Lanjutan) d.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 50 mg/kg BB dibandingkan dengan kelompok yang diberi EEDP dosis 100 mg/kg BB pada pemberian

  seminggu sebelum kopulasi sampai seminggu setelah kopulasi.

  SK-SSK 50 SK-SSK 100 JUMLAH HAMIL

  3

  1

  4 TIDAK HAMIL

  3

  5

  8

  6

  6

  12

  4! 8! 6! 6!

  p =

  12! 3! 1! 3! 5!

  = 0,2424 > 0,05 e.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 50 mg/kg BB dibandingkan dengan kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg BB pada pemberian

  seminggu sebelum kopulasi sampai seminggu setelah kopulasi SK-SSK 50 SK-SSK 200 JUMLAH

  HAMIL

  3

  3 TIDAK HAMIL

  3

  6

  9

  6

  6

  12

  3! 9! 6! 6!

  p =

  12! 3! 0! 3! 6!

  = 0,0909 > 0,05

  Lampiran 15. (Lanjutan) f.

Harga p dari kelompok yang diberi EEDP dosis 100 mg/kg BB dibandingkan dengan kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg BB pada pemberian

  seminggu sebelum kopulasi sampai seminggu setelah kopulasi SK-SSK 100 SK-SSK 200 JUMLAH

  HAMIL

  1

  1 TIDAK HAMIL

  5

  6

  11

  6

  6

  12

  1! 11! 6! 6!

  p =

  12! 1! 0! 5! 6!

  = 0,5 > 0,05

  Lampiran 16.

  Gambar tabel nilai faktorial