Efek antiinflamasi Asetil Eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit jantan Galur Swiss - USD Repository

  

EFEK ANTIINFLAMASI ASETIL EUGENOL SECARA TOPIKAL

TERHADAP EDEMA KAKI YANG DIINDUKSI FORMALIN 0,5% PADA

MENCIT JANTAN GALUR SWISS

SKRIPSI

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

  Program Studi Farmasi Oleh:

  Devi Nathania NIM : 078114127

  FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2011

HALAMAN PERSEMBAHAN

  Karya ini kupersembahkan kepada: Tuhan Yesus Kristus Orang tuaku, Wadijono Joedi & Tjan Tek Fung Adik-adikku

  Teman-teman yang kusayangi Almamaterku tercinta Janganlah takut sebab DIA selalu beserta kita.

  Sebesar apapun rintangan yang kita hadapi, kita punya Tuhan yang lebih besar daripada rintangan itu.

  

PRAKATA

  Penulis mengucapkan puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa karena atas berkat, rahmat dan cinta-Nya yang diberikan, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Uji Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan Galur Swiss”.

  Dalam proses pelaksanaan dan penyusunan skripsi yang merupakan tugas akhir untuk memenuhi salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Strata satu Farmasi (S. Farm.), program Studi Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada pihak-pihak yang telah banyak mendukung. Dukungan baik langsung maupun tidak langsung, bimbingan moril maupun pengetahuan juga telah dirasakan oleh penulis. Maka ucapan terima kasih yang tulus khususnya penulis tujukan kepada : 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  2. Ipang Djunarko, M. Sc., Apt. selaku dosen pembimbing yang telah bersedia mengarahkan, mendampingi, dan meluangkan waktu untuk berdiskusi bersama penulis selama proses penelitian hingga selesainya skripsi ini.

  3. Phebe Hendra, M. Sc., Ph. D., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang telah memberikan waktu, saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.

  4. Jeffry Julianus, M. Si. selaku dosen penguji skripsi yang telah memberikan waktu, saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.

  5. Staf laboratorium, Bapak Kayatno dan Yohanes Ratijo yang telah banyak membantu selama penulis melakukan penelitian di Laboratorium Imono.

  6. Kedua orang tua, Wadijono Joedi dan Tjan Tek Fung, atas doa, kesabaran, nasehat dan dukungannya yang tidak pernah terlewatkan sehingga penulis dapat semangat dalam menyelesaikan skripsi ini.

  7. Adikku Devi Christina, Ayu Florencia, dan Stefanny Rahayu Joedi yang memberikan semangat dan doa.

  8. Temanku Maya, Yosephine, Dika, dan Yudi untuk kerjasama dan dukungannya selama melakukan dan menyelesaikan skripsi ini.

  9. Sahabatku Dita, Olive, dan Frissa yang telah memberikan semangat, doa, dan dukungan bagi penulis.

  10. Teman-teman kost Talenta: Mba Ocha, Cik Winny, Ussy, Iema, Amma, Tika, Soso, Mengty, Fanny, dan Inggrid.

  11. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

  Penulis menyadari masih banyak kekurangan dan ketidaksempurnaan yang ada dalam penyusunan skripsi ini. Maka penulis mengaharapkan kritik dan saran yang dapat membuat karya ini menjadi lebih baik. Akhir kata, semoga penelitian skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca terutama bagi perkembangan ilmu kefarmasian.

  Penulis

  

DAFTAR ISI

  HALAMAN JUDUL …………………………………………………………... i

  HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING.................................................. ii HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN ......................................................................... iv PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH

  ……….… v PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................. vi PRAKATA .......................................................................................................... vii DAFTAR ISI ....................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................................... xii DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiii DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xiv

  INTISARI ........................................................................................................... xvi

  

ABSTRACT .......................................................................................................... xvii

  BAB I. PENGANTAR ........................................................................................ 1 A. Latar Belakang ........................................................................................ 1 1. Permasalahan .............................................................................

  2 2. Keaslian penelitian .....................................................................

  3

  3. Manfaat penelitian ......................................................................... 4

  B. Tujuan Penelitian .................................................................................... 4

  BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................ 6 A. Inflamasi .................................................................................................. 6 B. Antiinflamasi ........................................................................................... 9

  C. Formalin .................................................................................................. 10

  ®

  D. Virgin Coconut Oil (VCO) HealthyCo .................................................. 10

  E. Eugenol ................................................................................................... 11

  F. Asetil Eugenol ......................................................................................... 12

  G. Metode Pengujian Antiinflamasi ............................................................ 12

  H. Landasan Teori ........................................................................................ 13

  I. Hipotesis .................................................................................................. 14

  BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................... 15 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................................. 15 B. Variabel Penelitian .................................................................................. 15 C. Def inisi Operasional ……....................................................................... 16 D. Bahan dan Alat Penelitian ....................................................................... 17

  1. Bahan ............................................................................................... 17

  2. Alat ................................................................................................... 18

  E. Tata Cara Penelitian .............................................................................. 18

  1. Orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki ………. 18

  2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif ..................... 19

  3. Orientasi pelarut asetil eugenol ........................................................ 19

  4. Penentuan peringkat konsentrasi asetil eugenol .............................. 19

  5. Pengelompokan hewan uji ............................................................... 20

  6. Pengamatan ...................................................................................... 21

  F. Tata Cara Analisis Hasil ......................................................................... 21

  BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 22

  A. Orientasi Rentang Waktu Pengolesan Senyawa pada Edema Kaki Mencit, Orientasi Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol Positif, serta Orientasi Pelarut dan Peringkat Konsentrasi Asetil Eugenol.................. 22

  1. Orientasi rentang waktu pengolesan senyawa pada edema kaki mencit ……………………………………….................................... 23

  2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif …………… 26

  3. Orientasi pelarut dan peringkat konsentrasi asetil eugenol……… 28 B. Hasil Uji Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal terhadap

  Edema Kaki Mencit yang Diinduksi oleh Formalin 0,5%....................... 29

  C. Hasil Uji Hubungan Linieritas Konsentrasi Asetil Eugenol terhadap Daya Antiinflamasi yang Ditimbulkan…………................................... 40

  BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 42 A. Kesimpulan ............................................................................................. 42 B. Saran ........................................................................................................ 42 DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 44 LAMPIRAN ........................................................................................................ 48 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 83

  

DAFTAR TABEL

  Tabel I. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan setiap jam selama 5 jam pengamatan ............................................... 24 Tabel II. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan setiap 10 menit selama 1 jam pengamatan ....................................... 25 Tabel III. Hasil analisis AUC total ketiga konsentrasi eugenol menggunakan

  

One-Way ANOVA taraf kepercayaan 95% dengan uji Scheffe

  ……. 27 Tabel IV. Hasil analisis rata-rata nilai AUC total tebal edema kaki mencit yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan menggunakan one way ANOVA taraf kepercayaan 95% dengan uji Scheffe.............................................................................................. 32

  Tabel V. Nilai hasil uji Scheffe % penghambatan inflamasi yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan......................................... 35 Tabel VI. Nilai hasil uji Scheffe % daya antiinflamasi yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan......................................... 36

  

DAFTAR GAMBAR

  Gambar 1. Skema mediator-mediator inflamasi yang berasal dari fosfolipid beserta aksinya................................................................................ 7 Gambar 2. Struktur eugenol ............................................................................ 11 Gambar 3. Struktur asetil eugenol ................................................................... 12 Gambar 4. Skema jalannya penelitian ............................................................. 20 Gambar 5. Grafik rata-rata tebal edema kaki mencit yang diinduksi formalin

  0,5% selama 6 jam pengamatan..................................................... 30 Gambar 6. Diagram batang nilai AUC total masing-masing perlakuan........... 33 Gambar 7. Turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan

• –tioeter...................... 37 Gambar 8. Struktur Asetil Eugenol ….............................................................. 37

  Gambar 9. Interaksi antara asetil eugenol dengan valin................................... 38 Gambar 10. Bentuk radikal dari asetil eugenol

  …….......................................... 38 Gambar 11. Grafik hubungan linieritas log konsentrasi asetil eugenol 100% v/v, 50% v/v, dan 25% v/v dengan % penghambatan inflamasi dari masing-masing perlakuan tersebut.......................................... 41

  

DAFTAR LAMPIRAN

  Lampiran 1. Elusidasi Struktur Asetil Eugenol................................................... 48 Lampiran 2.

  a. Sertifikat Kalibrasi Jangka Sorong merk Mitutoyo........................ 53

  b. Tabel hasil pengukuran presisi jangka sorong merk Mitutoyo....... 55 Lampiran 3. Skema orientasi peringkat konsentrasi kontrol positif eugenol

  …. 55 Lampiran 4. Surat Keterangan Pembelian Mencit di LPPT-Universitas Gajah

  Mada (UGM) …………………………………………………… 56 Lampiran 5.

  a. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% dengan pengukuran setiap jam selama 5 jam pengamatan .................................................................................... 57

  b. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% dengan pengukuran setiap 10 menit selama 1 jam pengamatan .................................................................................... 60 Lampiran 6.

  a. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol Positif ............................................................................................. 63

  b. Hasil Analisa Rata-rata AUC total Eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v untuk Kontrol Positif menggunakan Metode Analisis One-Way ANOVA Tingkat Kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ..................................... 64

  Lampiran 7. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Asetil Eugenol Menggunakan Pelarut VCO……………………………………………………... 67

  Lampiran 8. Hasil Analisa Tebal Edema Kaki Mencit yang diinduksi Formalin 0,5% menggunakan General Linear Model tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe

  ……. 67 Lampiran 9. Hasil Analisa Nilai AUC total masing-masing perlakuan menggunakan One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe .............................

  72 Lampiran 10. Perhitungan nilai % penghambatan inflamasi pada kelompok kontrol eugenol 50% v/v; asetil eugenol 100% v/v; 50% v/v; dan 25% v/v .......................................................................................... 76

  Lampiran11. Hasil analisa % penghambatan inflamasi menggunakan One-

  Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan

  dengan uji Scheffe ......................................................................... 77 Lampiran 12. Hasil analisa % daya antiinflamasi menggunakan One-Way

  ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ...................................................................................... 79 Lampiran 13. Perhitungan nilai EC .................................................................. 82

  50

  

INTISARI

  Inflamasi sering terjadi di masyarakat. Salah satu cara pengatasannya dengan pemberian agen antiinflamasi topikal, karena OAINS dapat menimbulkan gastritis bila digunakan secara oral. Eugenol merupakan komponen utama dalam minyak cengkeh yang terbukti memiliki efek antiinflamasi. Asetil eugenol merupakan turunan eugenol yang juga berkhasiat sebagai antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk menguji secara in vivo efek antiinflamasi asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit jantan galur Swiss sehingga didapatkan nilai EC

  50 -nya.

  Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola satu arah. Model pengukurannya dengan menggunakan jangka sorong. Mencit dibagi dalam 6 kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif formalin 0,5%; kelompok kontrol negatif VCO; kontrol positif eugenol 50% v/v; kelompok perlakuan asetil eugenol 25% v/v; 50% v/v; dan 100% v/v. Pengolesan senyawa uji dilakukan pada menit ke-60 setelah injeksi formalin dan pengukuran tebal edema dilakukan tiap jam selama 6 jam pengamatan. Data tebal edema diolah menjadi nilai AUC total kemudian dianalisis dengan uji Kolmorogorof-Smirnov, dilanjutkan dengan analisis ANOVA satu arah dengan taraf kepercayaan 95% dan uji Scheffe serta Post Hoc.

  Hasil persentase penghambatan inflamasi asetil eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v berturut-turut adalah 41,52%; 16,96%; dan 9,04%; sedangkan persen daya antiinflamasinya berturut-turut sebesar 8,23%; -30,32%; dan - 42,74%. Berdasarkan uji regresi linier, semakin meningkatnya konsentrasi asetil eugenol, persen penghambatan dan persen daya antiinflamasinya semakin menurun. Dari persamaan regresi linier tersebut didapatkan nilai EC

  50 sebesar 15,45%.

  Kata kunci: asetil eugenol, antiinflamasi, topikal, formalin.

  

ABSTRACT

  Inflammation often happens in our life. The most easiest way to overcome this inflammation is given topical anti-inflammatory agent because oral anti- inflammatory agent, especially NSAIDs can make side effect on gastrointestinal tract. Eugenol is the main compound of clove oil that proven its anti-inflammatory effect. Acetyl eugenol is eugenol’s derivate that also have anti-inflammatory effect. It had proven in in vitro study. This study aims to prove that acetyl eugenol really has in vivo anti-inflammatory effect.

  This research includes pure experimental studies of completely randomized one-way pattern design. Measurement of paw-edema induced formalin of mice using the vernier caliper Mitutoyo. Mice were divided into 6 groups, ie. negative control group of formalin 0.5% and VCO; positive control group of eugenol 50%; and acetyl eugenol 25%, 50%, and 100% v/v. Application

  

th

  of test compound is given in the 60 minute after formaldehyde injection and edema is measure every hour for 6 hours. Edema thickness data is processed into the value of total AUC and was analyzed with Kolmorogorof-Smirnov test, followed by a one-way ANOVA analysis with a 95% level of confidence and then Scheffe test and Post Hoc. Then proceed again with Linear Regression to know EC .

50 The percentage of inflammatory inhibition of acetyl eugenol 25% v/v,

  50% v/v, and 100% v/v are 41.52%; 16.96%; and 9.04%; and the potency of acetyl eugenol are 8.23%; -30.32%; and -42.74%. According to the linier regression’s result, the increasement of concentration acetyl eugenol will cause the decreasement of inflammatory inhibition and potency of acetyl eugenol. The effective concentration of acetyl eugenol is 15.45%.

  Key words: acetyl eugenol, anti-inflammatory, topical, formaldehyde.

BAB I PENGANTAR Latar Belakang Inflamasi atau yang biasa kita kenal dengan istilah peradangan

  merupakan mekanisme pertahanan tubuh terhadap infeksi maupun iritasi. Gejala- gejala inflamasi antara lain kalor, dolor, rubor, tumor, dan functiolaesa. Inflamasi ini sering kita alami dalam kehidupan sehari-hari dan tidak jarang menimbulkan rasa yang tidak nyaman bagi penderitanya. Rasa tidak nyaman yang timbul mendorong penderita untuk bergegas mengatasi peradangan yang terjadi.

  Salah satu upaya pertama yang dapat dilakukan untuk mengurangi rasa tidak nyaman yang timbul akibat inflamasi adalah dengan pemberian obat antiinflamasi lokal yang dapat dioleskan pada daerah yang terkena inflamasi. Hal ini dirasa lebih mudah, cepat dan praktis sebagai pertolongan pertama daripada pemberian secara oral terutama untuk obat-obat golongan Antiinflamasi Non Steroid (AINS) yang dapat menimbulkan efek samping berupa iritasi pada lambung. Efek samping ini timbul karena sebagian besar obat-obat golongan AINS tidak selektif terhadap enzim siklooksigenase-2 (COX-2) (Schror dan Meyer-Kirchrath, 2000).

  Agen antiinflamasi lokal yang berasal dari bahan alam dan sering dipakai di pasaran adalah eugenol. Dalam penelitian yang dilakukan oleh Ozturk dan Ozbek (2005), menyebutkan bahwa minyak esensial yang terkandung dalam tanaman cengkeh memiliki efek antiinflamasi dengan menghambat COX-2. Adapun isi dari minyak esensial tersebut antara lain

  β-caryophyllen dan eugenol

  sebagai komponen utama,

  α-humulen, eugenyl acetat, dan α-copaen. Tiap-tiap

  komponen dalam minyak esensial tersebut saling mempengaruhi satu sama lain dalam menimbulkan efek antiinflamasi. Oleh karena itu perlu dilakukan uji aktivitas antiinflamasi dari masing-masing komponen tersebut.

  Hidalgo, Rosa, Carrasco, Cardona, Gallardo, dan Espinoza (2009) juga menyebutkan bahwa eugenol dan turunannya memiliki kemampuan sebagai antioksidan yang dapat menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi oleh reaktif oksigen spesies, dimana reaktif oksigen spesies ini juga berpengaruh pada proses terjadinya inflamasi. Srivastava dan Maholtra (1991) juga melakukan penelitian tentang derivat eugenol, yaitu asetil eugenol. Dalam penelitian ini disebutkan bahwa asetil eugenol dapat menghambat agregasi dan metabolisme asam arakhidonat pada platelet manusia secara in vitro.

  Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik dan ingin mengetahui apakah asetil eugenol memiliki efek antiinflamasi apabila digunakan secara topikal dan berapakah % penghambatan inflamasi dan % daya antiinflamasinya serta konsentrasi efektif (EC

  50 ) dari asetil eugenol bila digunakan secara topikal.

1. Permasalahan

  Berdasarkan uraian yang dikemukakan di atas, maka permasalahan yang diteliti adalah: a. Apakah asetil eugenol memiliki efek antiinflamasi secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss?

  b. Berapakah % penghambatan inflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss?

  c. Berapakah % daya antiinflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss?

  d. Berapakah konsentrasi efektif (EC

  50

  ) asetil eugenol sebagai agen antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss?

2. Keaslian penelitian

  Sepanjang penelusuran pustaka yang dilakukan penulis, ada penelitian tentang asetil eugenol yang pernah dilakukan, yaitu Acetyl eugenol, a component

  

of oil of cloves (Syzygium aromaticum L.) inhibits aggregation and alters

arachidonic acid metabolism in human blood platelets (Srivastava dan Maholtra,

  1991). Dalam penelitian itu disebutkan bahwa asetil eugenol berpotensi sebagai agen penghambat platelet dan dapat menghambat agregasi asam arakhidonat pada konsentrasi 12 µM.

  Penelitian lain yang berkorelasi dengan penelitian yang akan dilakukan penulis adalah Uji Efek Antiinflamasi Krim Tipe A/M Ekstrak Etanolik Jahe 10%

  (Zingiber officinale Roscoe) yang Diberikan Topikal terhadap Udem Kaki Tikus yang Diinduksi Karagenin (Gunani, 2009). Hasil penelitian tersebut menunjukkan krim tipe A/M ekstrak etanolik jahe 10% memiliki daya antiinflamasi dengan persentase penghambatan (45,10 + 11,18)% lebih kecil dari Na diklofenak emulgel yang memiliki persentase penghambatan (76.47+13,16)% (p=0,002).

  Namun penelitian tentang Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi oleh Formalin 0,5 % pada Mencit Jantan Galur Swiss belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian

  a. Manfaat teoritis. Penelitian ini dapat menambah informasi dan pengetahuan tentang efek antiinflamasi asetil eugenol secara topikal terhadap edema yang diinduksi oleh formalin 0,5%.

  b. Manfaat praktis. Penelitian ini dapat dijadikan sebagai acuan, yaitu berupa nilai EC , untuk penggunaan asetil eugenol sebagai antiinflamasi topikal.

  50 Tujuan Penelitian

  1. Tujuan umum

  Penelitian ini bertujuan untuk memberikan informasi tambahan tentang khasiat asetil eugenol sebagai antiinflamasi topikal.

2. Tujuan khusus

  a. Mengetahui ada tidaknya efek antiinflamasi secara topikal dari asetil eugenol terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit jantan galur swiss.

  b. Mengetahui % penghambatan inflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss.

  c. Mengetahui % daya antiinflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss.

  d. Mengetahui konsentrasi efektif (EC

  50 ) asetil eugenol sebagai agen

  antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss.

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Inflamasi Rhen dan Cidlowski (2005) mendefinisikan inflamasi sebagai respon

  reflektif tubuh terhadap infeksi, ikatan antibodi terhadap antigen di dalam tubuh, iritasi mekanik atau luka, dan kerusakan jaringan. Pengamatan yang lebih dekat pada daerah inflamasi menunjukkan terjadinya dilatasi pada pembuluh darah sehingga darah pada daerah tersebut lebih banyak, serta terjadi bendungan cairan lainnya yang menyebabkan daerah tersebut membengkak (Maffetone, 2002).

  Gejala-gejala yang dapat dikenali dalam proses inflamasi adalah adanya

  

rubor (kemerahan), edema (pembengkakan), kalor (panas), dolor (nyeri), dan

functiolaesa (hilangnya fungsi) (Kee dan Hayes, 1996).

  Rubor atau kemerahan biasanya merupakan hal pertama yang terlihat di

  daerah yang megalami peradangan (Kee dan Hayes, 1996). Warna kemerahan ini akibat adanya dilatasi pembuluh darah kecil dalam daerah yang mengalami kerusakan (cit Setyarini, 2009). Dengan vasodilatasi maka aliran darah yang menuju ke daerah tersebut akan semakin banyak sehingga terlihat warna kemerahan dan panas yang dirasakan (Karch, 2003).

  Gejala paling nyata dari peradangan akut yang mungkin terjadi adalah edema lokal. Gejala ini timbul karena adanya migrasi cairan dan sel-sel dari sirkulasi darah ke jaringan-jaringan interstial. Campuran dari cairan dan sel yang tertimbun di daerah peradangan disebut eksudat. Pada awal peradangan, sebagian besar isi dari eksudat adalah cairan plasma, tetapi kemudian sel-sel darah putih akan meninggalkan aliran darah kemudian tertimbun sebagai bagian dari eksudat (Price dan Wilson, 1995).

  Dolor atau rasa sakit dari reaksi peradangan dapat disebabkan oleh

  adanya perubahan pH lokal atau konsentrasi lokal ion-ion tertentu dapat merangsang ujung-ujung nosiseptor. Pengeluaran zat kimia tertentu seperti histamin (Price dan Wilson, 1995), prostaglandin, dan serotonin atau zat kimia bioaktif lainnya dapat merangsang nosiseptor. Selain itu, edema yang terjadi mengakibatkan peningkatan tekanan lokal yang menimbulkan rasa sakit (cit Setyarini, 2009).

  Gangguan fungsi (functiolaesa), merupakan konsekuensi dari suatu proses radang. Gerakan yang terjadi pada daerah radang, baik dilakukan secara langsung atau reflek akan mengalami hambatan rasa sakit. Pembengkakan yang hebat secara fisik mengakibatkan kurangnya gerak jaringan (cit Setyarini, 2009).

  Gambar 1. Skema mediator-mediator inflamasi yang berasal dari fosfolipid

  Peristiwa utama yang terjadi pada proses inflamasi adalah adanya perubahan aliran vasa darah dan peningkatan permeabilitas sekuler. Pada perubahan aliran vasa darah terjadi vasokonstriksi sementara yang kemudian menjadi vasodilatasi yang berlebihan sehingga banyak aliran darah yang mengalir ke daerah tersebut. Proses ini membuat daerah yang mengalami inflamasi menjadi merah dan hangat. Vasodilatasi ini membuat sirkulasi darah menjadi melambat dan terjadi peningkatan permeabilitas vaskular sehingga terjadi stasis. Kemudian terjadi marginasi leukosit dan keluarnya cairan yang menyebabkan terjadinya edema. Peristiwa penting yang kedua adalah terjadinya peningkatan permeabilitas vaskular sehingga menyebabkan kebocoran endotel. Peristiwa ini akan meningkatkan tekanan hidrostatik dan penurunan tekanan koloid osmotik protein (Harijadi, 2009).

  Fosfolipid yang terdapat di dalam membran dipecah oleh fosfolipase A

  2 ketika dipicu oleh adanya neurotransmiter, neuromodulator, dan neurohormon.

  Salah satu hasil pemecahan tersebut adalah asam arakidonat. Asam arakidonat ini masuk ke dalam siklooksigenase melewati knob hidrofobik yang merupakan penghubung antara protein ke membran. Asam arakidonat masuk ke dalam sisi aktif siklooksigenase, dimana terjadi penambahan dua molekul oksigen sehingga terbentuk prostaglandin endoperoksida (PGG

  2 ). Prostaglandin endoperoksida

  masuk ke dalam sisi aktif peroksidase dimana gugus heme membantu menghilangkan satu atom oksigen dari bentuk peroksida sehingga menjadi prostaglandin H

  2 (PGH 2 ) yang meninggalkan enzim siklooksigenase dan berperan dalam penggumpalan darah, sensitivitas nyeri, dan reaksi alergi (Amasino, Deng, Huang, Lee, Lesi, Pu, et al., 1996).

B. Antiinflamasi

  Obat Anti-Inflamasi Non Steroid (OAINS) populer dengan menghambat baik sistem enzim siklooksigenase maupun lipooksigenase intraseluler, yang nantinya akan berpengaruh pada respon inflamasi yang terjadi dan menurunkan produksi berbagai komponen prostaglandin (Babb, 1992). Dannhardt dan Laufer (2000) menyatakan bahwa senyawa yang termasuk dalam penghambat enzim COX-2 adalah senyawa yang bersifat lipofil dan asam. Berdasarkan strukturnya ada beberapa golongan inhibitor selektif COX-2, yaitu: (1) turunan karbosiklik dan heterosiklik yang terikat visinal dengan moieties aril, (2) turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan

• –tioeter, (3) turunan cis-stilben, serta (4) keton diaril dan aril/heteroaril, (5) senyawa dengan gugus antioksidan.

  Untuk mampu bekerja dengan efektif, OAINS topikal harus mampu melakukan penetrasi ke dalam kulit serta memasuki sirkulasi atau diabsorbsi ke dalam jaringan yang lebih dalam untuk menghambat siklooksigenase. Hal tersebut dipengaruhi oleh keseimbangan solubilitas lipid dan aqueous agar permeasi optimal. Sekalipun kadar plasma dari pemberian OAINS topikal relatif lebih rendah daripada pemberian OAINS secara oral, akan tetapi studi komparatif yang dilakukan dengan zat aktif diklofenak menunjukkan tidak terjadi perbedaan yang signifikan dengan rute pemberian oral maupun topikal dalam terapi osteoartritis (Moore, 2004).

C. Formalin Formalin adalah larutan formaldehid sekitar 37% yang larut dalam air.

  Formaldehid seketika menghasilkan gugus hidroksimetil yang reaktif pada asam amino seperti lysine (K), arginine (R), tyrosine (Y), asparagine (N), histidine (H),

  

glutamine (Q), and serine (S) (Sompuram, Vani, Messana, dan Bogen, 2004).

  Asam-asam amino tersebut berikatan dengan protein dan molekul besar. Formaldehid memiliki nilai koefisien difusi sebesar 0,79. Kecepatan penetrasi jaringan oleh formaldehid relatif cepat, kurang lebih 1 mm/jam (Goldstein, Ferkowicz, Odish, Mani, dan Hastah, 2003). Kandungan unsur aldehida yang terdapat di dalam formalin akan mudah bereaksi dengan protein sehingga menyebabkan kematian sel ( Hasyim, Hamam, dan Akil , 2006). Formalin ini menghasilkan inflamasi lokal dan nyeri (Banerjee, Sur, Mandal, Das, dan Sikdar, 2000). Menurut Tanko, Kamba, Saleh, Musa, dan Mohammed (2008), formalin menimbulkan fase nosiseptif sebagai fase awal dan fase inflamasi sebagai fase kedua. Selama fase kedua, formalin memicu terjadinya pelepasan serotonin, histamin, bradikinin, dan prostaglandin.

  D.

   Virgin Coconut Oil (VCO) HealthyCo® Virgin Coconut Oil (VCO) adalah minyak yang diekstraksi dari daging

  kelapa segar (bukan kopra) dengan cara mekanis atau alami, dengan atau tanpa pemanasan. Untuk melindungi kandungan dari minyak tersebut, produksi minyak kelapa murni tidak mengalami penyulingan kimia, pemutihan, atau penghilangan bau. Karakteristik dari minyak kelapa murni ini adalah: minyak berwarna bening hingga kuning pucat dengan aroma dan rasa yang khas. Kandungan dalam VCO ini antara lain: asam kaproat, asam kaprilat, asam kaprat, asam laurat, asam miristat, asam palmitat, asam palmitoleat, asam stearat, asam oleat, asam linoleat, dan asam linolenat (The virgin coconut oil, 2010).

E. Eugenol

  Eugenol memiliki titik didih 253 C dan titik lebur sebesar -9

  C. Senyawa yang berbau cengkeh ini mudah terbakar, memiliki kestabilan yang cukup tinggi tetapi akan mudah teroksidasi dengan adanya agen pengoksidasi yang kuat. Senyawa ini berbahaya bila ditelan dan memiliki LD

  50 sebesar 2680 mg/kg BB

  tikus. (MSDS, 2007). Gambar struktur eugenol: Gambar 2. Struktur Eugenol (Bulan, 2004)

  Eugenol (C H O ) merupakan isomer dari posisi betelfenol yang

  10

  12

  2

  ditemukan di tanaman Myrtaceae dan Lauraceae. Eugenol berwarna kekuningan dan berbentuk cair. Senyawa ini sering digunakan sebagai wangi-wangian di bidang farmasi dan digunakan dalam pembuatan vanilin. Di dalam tumbuhan, eugenol terkadang ditemukan dalam bentuk glukosida yang dihasilkan dari proses hidrolisis, yaitu hasil fermentasi (Gildemeister, 2009).

  Menurut Sadeghian, Seyedi, Saberi, Arghiani, dan Riazi (2008), eugenol (4-allyl-2-methoxyphenol) merupakan senyawa alam yang menunjukkan aktivitas sebagai antispasmodik, antipiretik, antibakteri (Ayoola, Lawore, Adelowotan, Aibinu, Adenipekun, Coker, et al., 2008), dan antiinflamasi dengan menghambat pembentukan prostaglandin pada jalur COX-2 (Ozturk dan Ozbek, 2005).

F. Asetil Eugenol

  Asetil eugenol (C

  12 H

  14 O 3 ) merupakan senyawa turunan eugenol yang berwarna bening hingga kuning pucat dan memiliki konsistensi seperti minyak.

  Senyawa ini bersifat mudah terbakar dan dapat mengiritasi kulit serta toksik bila tertelan. Sinonim dari asetil eugenol adalah eugenol asetat, 1-asetoksi-2-metoksi- 4-alilbenzena, 4-alil-2-metoksifenil asetat. Senyawa ini memiliki titik didih 281°C dan kerapatan 1,08 (Rdchemicals, 2006). Secara in vitro, asetil eugenol dapat menghambat agregasi dan metabolisme asam arakhidonat pada platelet manusia (Srivastava dan Maholtra, 1991). Menurut Hidalgo, et al. (2009), senyawa eugenol dan turunannya (termasuk di dalamnya adalah asetil eugenol) dapat menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi oleh reaktif oksigen spesies serta dapat menghambat jalur COX-2 sehingga prostaglandin tidak terbentuk (Ozturk dan Ozbek, 2005).

  Gambar 3. Struktur Asetil Eugenol (Rdchemicals, 2006) G.

   Metode Pengujian Antiinflamasi

  Metode yang dapat digunakan untuk menguji aktivitas antiinflamasi suatu senyawa antara lain mengukur eritema dan udem pada telinga hewan pengerat, uji edema pada kaki hewan pengerat, dan uji induksi artritis pada hewan pengerat (Evans dan Williamson, 1996).

  Metode lain pengujian efek antiinflamasi dengan mengukur diameter edema pada kaki tikus yang diinduksi formalin 50µL 2,5% v/v setiap satu jam selama lima jam. Pengukuran diameter edema tersebut dilakukan menggunakan

  

vernier caliper. Pengukuran dilakukan hingga jam ke-5 karena pada jam ke-5

  tersebut terjadi penghambatan inflamasi yang signifikan setelah 5 jam dari pemberian ekstrak Newbouldia laevis (Tanko et al., 2008).

H. Landasan Teori

  Inflamasi merupakan respon perlindungan tubuh terhadap kerusakan jaringan yang terjadi. Walaupun begitu, inflamasi sering menimbulkan rasa tidak nyaman bagi penderitanya. Formalin 0,5% sebanyak 0,025ml dilaporkan memiliki aktivitas inflamasi pada kaki mencit (Vogel, 2002), yang terbagi dalam dua fase, yaitu fase awal (0-5 menit) merupakan fase nosiseptif sedangkan fase kedua (20- 30 menit) merupakan fase inflamasi (Lu et al., 2009). Penggunaan formalin lebih dipilih sebagai agen penginflamasi karena gejala-gejala inflamasi yang timbul lebih nyata bila dibandingkan dengan karagenin (Joseph, George, dan Nair, 2005).

  Hal ini dilihat dari edema yang timbul lebih besar dan lebih merah, sehingga akan lebih mempermudah dalam pengamatan.

  Dalam penelitian Ozturk dan Ozbek (2005), disebutkan bahwa minyak esensial yang terkandung dalam tanaman cengkeh memiliki efek antiinflamasi dengan menghambat COX-2. Adapun isi dari minyak esensial tersebut antara lain

  

β-caryophyllen dan eugenol sebagai komponen utama, α-humulen, eugenyl acetat,

  dan

  α-copaen. Tiap-tiap komponen dalam minyak esensial tersebut saling

  mempengaruhi satu sama lain dalam menimbulkan efek antiinflamasi. Hidalgo et

  

al . (2009) juga menyebutkan bahwa eugenol dan turunannya memiliki

  kemampuan sebagai antioksidan yang dapat menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi oleh reaktif oksigen spesies, sedangkan penelitian secara in vitro dari asetil eugenol terbukti dapat menghambat agregasi dan metabolisme asam arakhidonat dan mengganggu biosintesis prostaglandin yang merupakan senyawa penting dalam proses terjadinya inflamasi (Srivastava dan Maholtra, 1991).

  Selain itu, bila dilihat dari strukturnya, asetil eugenol termasuk dalam kategori senyawa turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan

• –tioeter yang bersifat lipofil dan asam serta memiliki struktur yang lebih besar dari induknya, sehingga berpotensi selektif COX-2 (Dannhardt dan Laufer, 2000). Dapat dikatakan bahwa asetil eugenol yang merupakan senyawa turunan dari eugenol ini berpotensi sebagai agen antiinflamasi topikal terhadap edema kaki mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5 %.

I. Hipotesis

  Pemberian asetil eugenol secara topikal memiliki efek antiinflamasi terhadap edema kaki mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5 % dengan penghambatan inflamasi dan daya antiinflamasi yang meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi asetil eugenol.

  

BAB III

METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian berjudul Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal

terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan

Galur Swiss ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan

acak lengkap pola satu arah.

B. Variabel Penelitian 1. Variabel utama

  Variabel utama dalam penelitian ini yaitu:

  a. Variabel bebas : peringkat konsentrasi asetil eugenol

  b. Variabel tergantung : tebal edema pada kaki mencit

2. Variabel pengacau

  a. Variabel pengacau terkendali: 1) Subyek uji : mencit jantan 2) Galur : Swiss 3) Umur subyek uji : 2-3 bulan 4) Berat badan subyek : 30-40 gram 5) Keadaan subyek : sehat

  b. Variabel pengacau tak terkendali : variabilitas individu tiap mencit, seperti kekebalan dan status patologi tiap mencit.

C. Definisi Operasional

  1. Inflamasi adalah respon reflektif tubuh terhadap infeksi, ikatan antibodi terhadap antigen di dalam tubuh, iritasi mekanik, dan kerusakan jaringan.

  Gejala inflamasi ditandai dengan rubor, kalor, dolor, tumor, dan functiolaesa. Dalam hal ini yang diukur adalah edema (bengkak).

  2. Asetil eugenol adalah senyawa hasil sintesis dari anhidrida asam asetat dengan eugenol (Riswanto, 2011).

  3. Waktu pemberian senyawa antiinflamasi dilakukan secara topikal 1 jam setelah pemberian agen inflamasi (lampiran 5b).

  4. Pengolesan secara topikal yaitu pengolesan senyawa secara merata ke seluruh permukaan udema kaki mencit selama ± 10 detik.

  5. Tebal edema merupakan tebal telapak kaki mencit yang diukur menggunakan jangka sorong merk Mitutoyo.

  6. Daya antiinflamasi adalah kemampuan dalam menurunkan tebal edema yang terbentuk selama proses inflamasi. Rumus perhitungan % penghambatan inflamasi dan % daya antiinflamasi:

  (Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007) Keterangan: (AUC 0-6 ) positif : AUC 0-6 rata-rata kelompok kontrol positif (cm.jam) (AUC ) : AUC rata-rata kelompok kontrol negatif (cm.jam)

  0-6 negatif 0-6

  (AUC 0-6 ) perlakuan : AUC 0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang diberi senyawa uji (cm.jam)

D. Bahan atau Materi Penelitian

1. Bahan penelitian

  a. Hewan uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit jantan galur Swiss berumur 2-3 bulan dengan berat 30-40 gram yang diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT), Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta dengan pembelian atas nama Paulina Maya Octasari (terlampir).

  b. Formalin 0,5%

  ®

  Formalin 0,5% produksi Bratachem yang didapatkan dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta dan digunakan sebagai agen penginflamasi. c. Eugenol

  ®

  Eugenol murni merk Sigma Aldrich didapatkan dari Laboratorium Kimia Organik Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta dan digunakan sebagai kontrol positif.

  d. Asetil eugenol Asetil eugenol yang digunakan sebagai senyawa uji didapatkan dari hasil sintesis Riswanto (2011) di Laboratorium Kimia Organik Universitas

  Sanata Dharma, Yogyakarta.

  e. VCO

  ®

  VCO merk HealtyCo dibeli di Apotek Sanata Dharma Yogyakarta dan digunakan sebagai pelarut eugenol dan asetil eugenol.

2. Alat penelitian

  Alat penelitian yang digunakan dalam penelitian ini antara lain kotak kaca tempat pengamatan mencit, stopwatch merk Baby-G, timbangan merk

  Ohaus, alat-alat gelas, jangka sorong merk Mitutoyo.

E. Tata Cara Penelitian 1. Orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki mencit.

  Hewan uji dibagi dua kelompok (masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor mencit) dimana kelompok I tidak diinjeksi formalin dan kelompok II diinjeksi formalin 0,5% sebanyak 0,025 mL/20 g BB mencit secara subplantar. Setiap jam diukur tebal kaki mencit dan dihitung selisihnya kemudian dianalisis menggunakan paired T-test. Waktu yang menunjukkan nilai p<0,05 merupakan waktu optimum pengolesan.

  2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif

  Hewan uji dibagi menjadi 4 kelompok (masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor). Kelompok I sebagai kontrol edema (hanya diinjeksi formalin), kelompok II, III, dan IV masing-masing diinjeksi formalin 0,5% kemudian diolesi dengan eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v. Hasil selisih edema diolah menjadi nilai AUC (Area Under Curve) total yang dihitung dari jam ke-0 sampai jam ke-6 dan kemudian dianalisis menggunakan One-Way ANOVA. Kelompok yang memiliki nilai p<0,05 akan digunakan sebagai kontrol positif.

  3. Orientasi pelarut asetil eugenol