IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pewarnaan imunohistokimia terhadap Cu,Zn-SOD dilakukan untuk melihat kandungan enzim antioksidan Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus pada setiap
kelompok perlakuan. Enzim Cu,Zn-SOD merupakan enzim antioksidan endogen yang mempunyai peranan penting dalam melindungi sel dari serangan radikal
bebas dan secara tidak langsung dapat menjaga keseimbangan oksigen yang bersifat toksik Wresdiyati et al. 2002. Enzim Cu,Zn-SOD mengkatalis dismutasi
radikal bebas anion superoksida O
2 -
menjadi radikal yang lebih lemah yaitu hidrogen peroksida H
2
O
2
dan selanjutnya akan diubah menjadi oksigen O
2
yang lebih stabil dan air H
2
O oleh glutation peroksidase dan katalase Finkel dan Holbrook 2000.
Reaksi positif dari pewarnaan imunohistokimia terhadap enzim Cu,Zn-SOD divisualisasikan berupa produk reaksi warna coklat di jaringan hati. Intensitas dan
distribusi warna coklat menujukkan kandungan enzim antioksidan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati. Semakin tua dan merata warna coklat yang terbentuk berarti
kandungan enzim Cu,Zn-SOD semakin banyaktinggi. Sel yang bereaksi negatif atau tidak mengandung enzim Cu,Zn-SOD ditunjukkan dengan warna biru.
Pengamatan dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Pengamatan secara kualitatif dilakukan dengan melihat intensitas warna coklat pada seluruh bagian
jaringan hati. Sedangkan pengamatan secara kuantitatif dilakukan dengan menghitung inti sel hati yang dibedakan pada beberapa tingkatan warna coklat,
yakni positif kuat +++, coklat tua, positif sedang ++, coklat sedang, positif lemah +, coklat muda campur biru, dan reaksi negatif -, biru.
Pengamatan secara kualitatif terhadap jaringan hati pada terminasi hari ke-8 menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan kandungan enzim Cu,Zn-SOD antar
kelompok perlakuan Tabel 3. Kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus kelompok perlakuan bakteri asam laktat BAL L. plantarum, L. fermentum,
L. plantarum + EPEC, dan L. fermentum + EPEC relatif sama dengan kelompok kontrol negatif dan kontrol positif Gambar 7. Hal ini berarti L. plantarum dan
L. fermentum belum mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus pada minggu pertama pemberian kedua jenis bakteri asam
laktat tersebut. Selain itu, tidak adanya perbedaan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan lain dapat terjadi
karena kelompok kontrol positif belum dicekok EPEC pada minggu pertama.
Tabel 3 Kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus percobaan
Kelompok perlakuan Kandungan Cu,Zn-SOD
Terminasi hari ke-8, sebelum pemberian EPEC T1 T1A
++ T1B
++ T1C
++ T1D
++ T1E
++ T1F
++ Terminasi hari ke-15, satu minggu setelah pemberian EPEC T2
T2A ++
T2B ++
T2C +++
T2D ++
T2E ++++
T2F +-
Terminasi hari ke-22, satu minggu setelah pemberian EPEC dari luar dihentikan T3 T3A
++ T3B
++ T3C
+++ T3D
+ T3E
++++ T3F
+- Ket: Tanda + menunjukkan adanya kandungan enzim Cu,Zn-SOD. Semakin banyak
tanda + berarti semakin tinggi kandungan enzim tersebut. A = kelompok kontrol negatif perlakuan ransum standar; B = kelompok perlakuan L. plantarum;
C = kelompok perlakuan L. fermentum; D = kelompok perlakuan L. plantarum + EPEC; E = kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC; F = kelompok kontrol positif
perlakuan EPEC.
Kemudian pada terminasi hari ke-15, terdapat perbedaan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada setiap kelompok perlakuan Gambar 8. Secara kualitatif
kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC memiliki kandungan enzim Cu,Zn- SOD paling tinggi, terlihat dari intensitas warna coklat yang terbentuk pada
kelompok perlakuan ini lebih kuat dibandingkan kelompok lain. Hal ini berarti
L. fermentum mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok yang diberi paparan EPEC pada hari ke-8 sampai hari ke-14. Kelompok
perlakuan L. fermentum memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD tertinggi kedua setelah kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC. Ini berarti bahwa perlakuan
L. fermentum selama 2 minggu dapat meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn- SOD di jaringan hati tikus.
Selanjutnya, dari pengamatan secara kualitatif terlihat bahwa kelompok perlakuan L. plantarum kandungan enzim Cu,Zn-SOD-nya sama dengan
kelompok kontrol negatif. Hal ini berarti perlakuan L. plantarum selama 2 minggu hanya mampu mempertahankan dan tidak meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-
SOD di jaringan hati tikus. Kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus kelompok perlakuan L. plantarum + EPEC juga sama dengan kelompok kontrol
negatif, berarti pemberian L. plantarum pada tikus yang memperoleh paparan EPEC pada hari ke-8 sampai hari ke-14 dapat mempertahankan kandungan enzim
antioksidan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus. Kelompok yang memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD paling rendah adalah kelompok dengan perlakuan
EPEC atau kontrol positif. Hal ini dapat terjadi karena enzim antioksidan yang ada di jaringan hati telah digunakan untuk menetralkan radikal bebas yang terbentuk,
selain itu juga karena kelompok kontrol positif tidak diberi BAL. Pada terminasi hari ke-22, pengamatan secara kualitatif menunjukkan
bahwa kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD paling tinggi dibandingkan kelompok lain Gambar 9. Hal ini berarti
pemberian L. fermentum masih mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn- SOD setelah paparan EPEC sebelumnya pada hari ke-8 sampai hari ke-14.
Kelompok perlakuan L. fermentum memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD tertinggi kedua. Hal ini menunjukkan bahwa L. fermentum memiliki kemampuan
meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD. Kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok perlakuan L. plantarum
sama dengan kelompok kontrol negatif, berarti pemberian L. plantarum mampu mempertahankan dan belum mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD
di jaringan hati hingga minggu ketiga pemberian L. plantarum. Sedangkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok L. plantarum yang dalam
Keterangan: +++
= positif kuat inti sel hati berwarna coklat tua
++ = positif sedang inti sel hari berwarna coklat sedang
+ = positif lemah inti sel hati berwarna coklat bercampur biru
- = negatif inti sel hati berwarna biru
sejarahnya pernah dipapar EPEC pada hari ke-8 sampai hari ke-14 lebih rendah dari pada kelompok kontrol negatif, namun kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada
kelompok ini tetap lebih baik dari pada pada kelompok yang hanya dipapar EPEC. Kelompok kontrol positif memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD paling rendah
dibandingkan kelompok lain. Hal ini terjadi karena enzim antioksidan Cu,Zn- SOD di jaringan hati hampir habis terpakai untuk melawan radikal bebas yang
terbentuk. Selain itu, rendahnya kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati juga disebabkan karena kelompok tersebut tidak diberi BAL.
Untuk memperjelas pengamatan kualitatif di atas, dilakukan pengamatan secara kuantitatif terhadap inti sel hati. Pengamatan secara kuantitatif dilakukan
dengan menghitung jumlah inti sel hati pada setiap tingkatan warna coklat yang terbentuk. Perbedaan tingkatan warna coklat pada jaringan hati dapat dilihat pada
Gambar 6. Hasil perhitungan terhadap inti sel hati setiap tingkatan warna coklat yang terbentuk disajikan pada Tabel 4. Hasil perhitungan tersebut dianalisis
dengan uji statistik ANOVA dan uji lanjut Duncan yang dapat dilihat pada Lampiran 3-14.
Gambar 6 Fotomikrograf jaringan hati tikus dengan pewarnaan imunohistokimia terhadap Cu,Zn-SOD yang menunjukkan perbedaan tingkatan warna
coklat yang terbentuk pada inti sel hati. Skala 50 µm.
Tabel 4 Rataan jumlah sel hati pada berbagai tingkatan kandungan enzim Cu,Zn- SOD pada jaringan hati tikus pada terminasi hari ke-8, hari ke-15, dan
hari ke-22
Kelompok perlakuan
Rataan jumlah inti sel hati tikus pada berbagai tingkatan kandungan Cu,Zn-SOD per lapang pandang pada perbesaran 20x
+++ ++
+ -
Terminasi hari ke-8, sebelum pemberian EPEC T1 T1A
43.83 ± 2.14
a
61.17 ± 2.86
a
2.67 ± 0.82
b
1.50 ± 0.84
a.b
T1B 44.67 ± 1.03
a
62.50 ±1.52
a
2.50 ± 1.64
b
1.50 ± 0.84
a.b
T1C 43.33 ± 1.75
a
61.00 ±1.55
a
2.67 ± 1.21
b
2.17 ± 0.75
b
T1D 43.17 ± 1.33
a
61.33 ±1.63
a
1.50 ± 0.55
a.b
0.67 ± 0.52
a
T1E 43.33 ± 1.75
a
60.33 ±1.37
a
1.00 ± 1.09
a
1.17 ± 0.75
a
T1F 43.17 ± 2.48
a
60.83 ±1.72
a
0.83 ± 0.41
a
0.67 ± 0.52
a
Terminasi hari ke-15, satu minggu setelah pemberian EPEC T2 T2A
39.83 ± 1.83
b
66.33 ± 1.86
c
0.33 ± 0.52
a
0.50 ± 0.55
a
T2B 38.00 ± 2.10
b
66.83 ± 1.47
c
2.83 ± 2.23
b.c
0.67 ± 0.52
a
T2C 75.50 ± 3.33
c
35.67 ± 2.25
b
1.50 ± 0.84
a.b
0.83 ± 0.75
a
T2D 37.17 ± 1.47
b
73.83 ± 2.79
d
1.33 ± 1.21
a.b
1.33 ± 1.37
a
T2E 97.33 ± 2.16
d
15.00 ± 2.60
a
0.67 ± 0.82
a
0.83 ± 0.98
a
T2F 12.83 ± 1.72
a
94.83± 1.47
e
3.50 ± 1.64
c
3.00 ± 0.63
b
Terminasi hari ke-22, satu minggu setelah pemberian EPEC dari luar dihentikan T3 T3A
41.33 ± 2.87
c
66.50 ± 4.50
c
2.83 ± 0.75
b
1.33 ± 1.21
a
T3B 38.00 ± 2.76
c
74.83 ± 1.60
d
2.17 ± 0.75
a.b
1.50 ± 1.38
a
T3C 54.50 ± 2.74
d
51.17 ± 2.48
b
2.83 ± 0.98
b
1.50 ± 1.05
a
T3D 26.00 ± 1.67
b
81.67 ± 2.25
e
5.00 ± 1.09
c
2.00 ± 0.63
a
T3E 93.67 ± 5.71
e
18.67 ± 1.37
a
1.33 ± 0.82
a
1.67 ± 1.97
a
T3F 7.17 ± 0.75
a
88.83 ± 1.17
f
10.67 ± 1.21
d
7.00 ± 2.19
b
Keterangan: Uji statistika Anova dan Duncan dilakukan pada setiap tingkatan warna setiap waktu terminasi yang sama. Notasi yang berbeda pada kolom yang sama
menunjukkan nilai yang berbeda nyata. +++ = positif kuat; ++ = positif sedang; + = positif lemah; - = negatif. A=kelompok kontrol negatif perlakuan ransum
standar; B = kelompok perlakuan L. plantarum; C = kelompok perlakuan L. fermentum; D = kelompok perlakuan L. plantarum + EPEC; E = kelompok
perlakuan L. fermentum + EPEC; F = kelompok kontrol positif perlakuan EPEC.
Pada terminasi hari ke-8, secara statistika kelompok kontrol negatif, L. plantarum, L. fermentum, L. plantarum + EPEC, L. fermentum + EPEC, dan kontrol positif
menunjukkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang tidak berbeda nyata p0.05 antar kelompok perlakuan Gambar 7. Hal ini terlihat dari jumlah inti sel hati
yang bereaksi positif kuat +++ dan positif sedang ++ pada setiap kelompok
Gambar 7 Fotomikrograf jaringan hati tikus dengan pewarnaan imunohistokimia terhadap Cu,Zn-SOD pada terminasi hari ke-8. Skala = 50 µ m. T1A =
kontrol negatif; T1B = perlakuan L. plantarum; T1C = perlakuan L. fermentum; T1D = perlakuan L. plantarum + EPEC; T1E =
perlakuan L. fermentum + EPEC; T1F = kontrol positif. Terlihat kandungan Cu,Zn-SOD relatif sama antar kelompok perlakuan.
perlakuan tidak berbeda nyata secara statistika. Tikus kelompok perlakuan bakteri asam laktat BAL L. plantarum, L. fermentum, L. plantarum + EPEC, dan
L. fermentum + EPEC menunjukkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang tidak berbeda nyata p0.05 dibandingkan tikus kelompok kontrol negatif dan kontrol
positif. Hal ini berarti kedua Lactobacillus tersebut belum mampu meningkatkan
kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus selama 1 minggu pemberian probiotik. Selain itu, kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok perlakuan
kontrol positif tidak berbeda nyata p0.05 dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini karena kelompok kontrol positif tersebut belum diberi EPEC sebelum
terminasi hari ke-8, sehingga kelompok kontrol negatif dan kontrol positif mendapat perlakuan yang sama pada hari ke-1 sampai hari ke-7, yakni ransum
standar. Terminasi hari ke-15 menunjukkan perbedaan kandungan enzim Cu,Zn-
SOD yang sangat nyata p0.01 di jaringan hati tikus antar kelompok perlakuan Gambar 8. Uji lanjut Duncan menunjukkan kelompok perlakuan L. fermentum +
EPEC memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang paling tinggi secara sangat nyata p0.01 di jaringan hati tikus dibandingkan kelompok perlakuan lain. Hal
ini berarti, pemberian L. fermentum selama 2 minggu mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati pada kelompok yang diberi paparan
EPEC. Mikelsaar et al. 2008 pernah menguji kemampuan L. fermentum ME-3
dalam meningkatkan aktivitas antioksidatif tubuh yang diinfeksi Helycobacter pylori dan menunjukkan aktivitas antioksidatif yang tinggi. Mikelsaar dan Zilmer
2009 juga melaporkan bahwa L. fermentum memiliki kemampuan ganda, yakni sebagai antimikrobial dan antioksidatif. Inilah yang membuat L. fermentum unik
diantara strain Lactobacillus lainnya. Kemampuan antimikrobial yang dimiliki L. fermentum dapat melawan patogen di saluran pencernaan, dan kemampuan
antioksidatif-nya bermanfaat mempertahankan dan meningkatkan status antioksidan tubuh bagi organisme yang mengonsumsinya. Hasil penelitian ini juga
menunjukkan tingginya kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati pada tikus yang diberi L. fermentum dan diinfeksi EPEC.
Kehadiran EPEC dalam usus halus akan memicu proses fagositosis oleh sel radang. Salah satu sel radang yang berperan dalam fagositosis di jaringan adalah
makrofag Nishikawa et al. 2000; Forman dan Martine 2001. Makrofag mengeluarkan radikal bebas dalam peristiwa fagositosis Roitt 2002. Radikal
bebas yang terbentuk ini terakumulasi dan saat antioksidan tidak mampu menetralisir, maka terjadilah kondisi stres oksidatif. Paparan mikroorganisme
yang menyebabkan stres oksidatif dapat menyebabkan peningkatan produksi sistem pertahanan antioksidan untuk menetralisir radikal bebas yang terbentuk
Halliwell dan Gutteridge 1999. Dengan adanya paparan EPEC pada hari ke-8 sampai hari ke-14 pada kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC akan
menggertak pertahanan antioksidan tubuh, ditambah lagi aktivitas antioksidatif yang dimiliki oleh L. fermentum, maka hal seperti di atas dapat menjelaskan
mengapa status enzim antioksidan Cu,Zn-SOD sangat tinggi pada kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC pada terminasi hari ke-15.
Selanjutnya, kelompok perlakuan yang memiliki kandungan enzim Cu,Zn- SOD tertinggi kedua setelah kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC adalah
kelompok perlakuan L. fermentum. Hal ini berarti pemberian L. fermentum selama 2 minggu mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati
tikus. Wang et al. 2009 menyebutkan bahwa L. fermentum memiliki aktivitas antioksidatif. Hasil penelitian ini juga menunjukkan bahwa L. fermentum mampu
meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus. Kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus kelompok perlakuan
L. fermentum tidak setinggi kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC. Tingginya kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus kelompok
perlakuan L. fermentum + EPEC dapat dijelaskan sebagai berikut, selain L. fermentum memang memiliki aktivitas antioksidatif seperti yang dijelaskan
Mikelsaar dan Zilmer 2009 dan Wang et al. 2009 diatas, keberadaan EPEC juga dapat menggertak sistem pertahanan antioksidan tubuh, sehingga antioksidan
dihasilkan lebih banyak. Inilah yang menyebabkan kandungan enzim antioksidan Cu,Zn-SOD kelompok perlakuan L. fermentum yang tidak diberi paparan EPEC
tidak setinggi kelompok perlakuan L. fermentum yang diberi paparan EPEC. Berbeda dengan kelompok perlakuan L. fermentum, kandungan enzim
Cu,Zn-SOD pada kelompok perlakuan L. plantarum pada terminasi hari ke-15 tidak berbeda nyata secara statistika dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini
terlihat dari reaksi positif kuat +++ kelompok perlakuan L. plantarum tidak berbeda nyata p0.01 dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif. Ini berarti
perlakuan L. plantarum selama 2 minggu belum mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus.
Begitu pula dengan kelompok perlakuan L. plantarum + EPEC, kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok ini tidak berbeda nyata p0.01 dengan
kelompok kontrol negatif. Hal ini berarti, walaupun ada paparan EPEC pada hari ke-8 sampai hari ke-14, L. plantarum tetap mampu mempertahankan kandungan
enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus. Kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada kelompok L. plantarum tidak setinggi
kelompok L. fermentum. Aktivitas anti Helicobacter pylori dari metabolit yang dihasilkan dari L. plantarum yang diisolasi dari kubis putih telah dilaporkan oleh
Rokka et al. 2006. Amin et al. 2009 juga telah melaporkan potensi antimikrobial yang dimiliki oleh L. plantarum yang diisolasi dari sayur segar
dalam melawan infeksi B. anthracis. Hal seperti diatas juga dapat menjelaskan potensi L. plantarum yang diisolasi dari daging sapi Ongol di pasar-pasar daerah
Bogor pada penelitian ini memiliki aktivitas antibakteri terhadap EPEC. Metabolit yang dihasilkan oleh L. plantarum berperan sebagai anti-EPEC, sehingga
kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus dapat dipertahankan. Namun tidak ada laporan bahwa L. plantarum memiliki aktivitas antioksidatif. Penjelasan
inilah yang mungkin menyebabkan kandungan enzim antioksidan Cu,Zn-SOD pada kelompok L. plantarum tidak setinggi kelompok L. fermentum.
Kelompok perlakuan EPEC atau kontrol positif pada terminasi hari ke-15, secara statistika menunjukkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang paling rendah
diantara kelompok-kelompok perlakuan lain. Hal ini terlihat dari analisis statistik pada reaksi positif kuat +++ yang menunjukkan nilai paling rendah secara
sangat nyata p0.01 serta reaksi negatif - dan reaksi positif sedang ++ yang paling tinggi secara sangat nyata p0.01 dibandingkan kelompok lainnya.
Usus merupakan portal masuknya bakteri. Bakteri EPEC yang masuk ke saluran pencernaan akan membentuk koloni di usus. Keberadaan koloni EPEC di
saluran pencernaan akan mengundang sistem pertahanan tubuh berupa sel-sel fagosit seperti makrofag untuk memfagosit bakteri EPEC tersebut. Selama proses
fagositosis, sel-sel fagosit memproduksi radikal bebas berupa reactive oxygen species ROS maupun reactive nitrogen spesies RNS, seperti hidrogen
peroksida H
2
O
2
, nitrit oksida NO, dan anion superoksida O
2 -
Truusalu et al. 2008. Untuk menetralisir tingginya kadar radikal bebas, akan terjadi peningkatan
penggunaan enzim antioksidan superoksida dismutase untuk menetralisis radikal- radikal bebas anion superoksida yang terbentuk tersebut Yan dan Polk 2008.
Oleh karena itu, kelompok perlakuan EPEC kandungan SOD-nya rendah. Perlekatan bakteri pada sel epitel usus inang akan membentuk lesi attaching
and effacing AE Lesion. Salah satu faktor yang disuntikkan oleh EPEC pada sel epitel inang adalah adalah Tir translicated intimin receptor yang berfungsi
sebagai reseptor membran plasma untuk perlekatan EPEC. EPEC kemudian mengikat Tir melalui protein membran luar yang disebut intimin. Beberapa
protein sitoskeletal termasuk aktin, menjadi tempat melekatnya EPEC. Pada akhirnya, terjadi penyusunan kembali sitoskeletal setelah Tir-intimin berikatan,
dan menghasilkan formasi pedestal formation Goosney et al. 2000. Secara histologi, lesio AE merupakan tanda adanya penyakit Songer dan Post 2005.
Setelah attaching melekat pada sel epitel usus inang, enteropathogenic E. coli ini melakukan effacement penghilangan mikrovili, menyebabkan
enterosit prematur, mengelupaskan sel epitel, dan menjadikan sel menjadi bentuk abnormal. Erosi epitel dapat terjadi, sehingga terjadi kerusakan epitel usus Black
2004. Peningkatan jumlah sel yang rusak pada kelompok yang diberi perlakuan EPEC dapat menyebabkan peningkatan jumlah sel radang, karena perubahan
struktur sekecil apapun yang terjadi pada sel akan dikenali oleh sel radang sebagai benda asing untuk segera dimusnahkan difagosit Tizard 2000. Dengan kondisi
sel epitel usus halus yang tidak normal tersebut, akan memudahkan bakteri merusak sel epitel lebih lanjut dan melakukan invasi menembus mukosa usus
Scaletsky et al. 1996. Apabila invasi tersebut sampai pada lapisan yang lebih dalam hingga ke lapisan yang terdapat pembuluh darah, maka bakteri mungkin
saja bisa ikut masuk ke peredaran darah. Bakteri di usus dapat masuk ke peredaran darah intestinal dan ikut bersama
aliran darah menuju berbagai lokasi organ tubuh. Kejadian seperti ini disebut bakterimia. Beberapa strain E. coli dapat menyebar ekstraintestinal dan
menyebabkan infeksi ekstraintestinal sepeti infeksi traktus urinaria dan meningitis neonatal Wold et al. 1992. Bakterimia adalah keadaan dimana ikutnya bakteri
Gambar 8 Fotomikrograf
jaringan hati
tikus dengan
pewarnaan imunohistokimia terhadap Cu,Zn-SOD pada terminasi hari ke-15.
Skala = 50 µ m. T2A = kontrol negatif; T2B = perlakuan L. plantarum; T2C = perlakuan L. fermentum; T2D = perlakuan L.
plantarum + EPEC; T2E = perlakuan L. fermentum + EPEC; T2F = kontrol positif. Terlihat bahwa kandungan Cu,Zn-SOD pada
kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC paling tinggi diantara kelompok lain; kelompok perlakuan L. fermentum memiliki
kandungan Cu,Zn-SOD tertinggi kedua; kandungan Cu,Zn-SOD kelompok perlakuan L. plantarum dan L. plantarum + EPEC sama
dengan kontrol negatif; kelompok kontrol positif memiliki kandungan Cu,Zn-SOD paling rendah.
dalam peredaran darah. Setiap peredaran darah akan melewati hati Songer dan Post 2005. Karena E. coli memiliki kecenderungan untuk tinggal di berbagai
organ, bakteri yang terdapat dalam peredaran darah dapat singgah di hati. Keberadaan bakteri di hati ini akan menggertak mekanisme pertahanan inang
dengan aktivasi sel-sel fagosit. Sebagaimana disebutkan di atas bahwa sel fagosit tersebut akan mengeluarkan molekul-molekul toksik berupa radikal dalam proses
fagositosis. Keberadaan bakteri di jaringan akan menggertak sistem pertahanan
antioksidan tubuh Halliwell dan Gutteridge 1999. Antioksidan superoksida dismutase yang ada di hati dikerahkan untuk menetralisir radikal anion
superoksida yang terbentuk. Namun, apabila infeksi EPEC tetap berlanjut dan terus menghasilkan radikal bebas dalam proses memfagositnya, maka pertahanan
antioksidan di hati tidak mampu lagi menetralisir radikal bebas yang ada. Sehingga kandungan SOD di jaringan hati menjadi sedikit pada kelompok yang
diinfeksi EPEC saja. Berbeda dengan kelompok yang diinfeksi EPEC namun diberi probiotik L. fermentum, gertakan sistem antioksidan jaringan oleh hadirnya
radikal bebas akibat infeksi EPEC membuat kandungan enzim SOD di hati menjadi meningkat, ditambah lagi aktivitas antioksidatif yang dimiliki oleh
L. fermentum. Oleh karena itu, kandungan SOD di jaringan hati tikus yang diinfeksi EPEC dan L. fermentum lebih tinggi dari pada kelompok yang diberi
EPEC saja. Terminasi hari ke-22 menunjukkan bahwa kandungan enzim antioksidan
Cu,Zn-SOD pada kelompok perlakuan L. fermentum + EPEC paling tinggi secara sangat nyata p0.01 dibandingkan dengan kelompok lain Gambar 9. Hal ini
berarti pemberian L. fermentum selama 3 minggu masih mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus setelah 1 satu minggu
paparan EPEC dari luar dihentikan. Selain itu, kelompok tikus yang diberi perlakuan L. fermentum memiliki
kandungan enzim Cu,Zn-SOD lebih tinggi secara sangat nyata p0.01 dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini berarti pemberian
L. fermentum secara tunggal selama 3 minggu masih mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati.
Gambar 9 Fotomikrograf jaringan hati dengan pewarnaan imunohistokimia terhadap Cu,Zn-SOD tikus pada terminasi hari ke-22. Skala = 50 µ m.
T3A = kontrol negatif; T3B = perlakuan L. plantarum; T3C = perlakuan L. fermentum; T3D = perlakuan L. plantarum +
EPEC; T3E = perlakuan L. fermentum + EPEC; T3F = kontrol positif. Terlihat kandungan Cu,Zn-SOD pada kelompok L. fermentum +
EPEC paling tinggi diantara kelompok perlakuan lainnya; kelompok perlakuan L. fermentum tertinggi kedua; kelompok perlakuan
L. plantarum sama dengan kontrol negatif; kelompok L. plantarum + EPEC lebih rendah dari pada kontrol negatif; kelompok kontrol positif
memiliki kandungan Cu,Zn-SOD paling rendah.
Hasil penelitian yang dilakukan oleh Truusalu et al. 2008 menjelaskan bahwa aplikasi L. fermentum ME-3 dapat menekan kelebihan stres oksidatif yang
terjadi akibat banyaknya radikal bebas yang dikeluarkan selama proses fagositosis. Netralisasi dari produksi superoksida oleh superoksida dismutase
SOD merupakan satu dari kemungkinan mekanisme dalam mencegah berlanjutnya stres oksidatif.
Analisis statistika terhadap kelompok perlakuan L. plantarum menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata p0.01 dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini
berarti perlakuan L. plantarum selama 3 minggu tetap belum mampu meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati tikus.
Kelompok perlakuan L. plantarum + EPEC, secara statistika menunjukkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang lebih rendah daripada kelompok kontrol
negatif, namun lebih tinggi dari pada kelompok kontrol positf. Hal ini terlihat dari reaksi positif kuat +++ pada kelompok perlakuan L. plantarum + EPEC lebih
rendah secara sangat nyata p0.01 dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif pada terminasi hari ke-22, namun lebih tinggi secara sangat nyata p0.01
dari pada kelompok kontrol positif. Ini berarti pemberian L. plantarum selama 3 minggu tidak mampu lagi mempertahankan kandungan enzim Cu,Zn-SOD pada
tikus yang diberi paparan EPEC pada minggu sebelumnya. Namun, pemberian L. plantarum tetap lebih baik dibandingkan hanya perlakuan EPEC saja.
Secara statistika, kelompok kontrol positif pada terminasi hari ke-22 menunjukkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD paling rendah secara sangat nyata
p0.01 diantara kelompok-kelompok perlakuan lainnya. Setelah tidak dilakukan lagi pemberian EPEC pada hari ke-15 sampai hari ke-21, rendahnya kandungan
enzim Cu,Zn-SOD pada terminasi hari ke-22 mungkin disebabkan oleh belum tuntasnya eliminasi EPEC dari saluran pencernaan tikus yang diberi EPEC pada
hari ke-8 sampai dengan hari ke-14, sehingga masih terdapat koloni EPEC di saluran pencernaan tikus percobaan. Selain itu, hal ini juga disebabkan karena
kelompok ini tidak diberi bakteri asam laktat BAL. Kandun dan Chin 2000 melaporkan bahwa masa inkubasi EPEC adalah 9-
12 jam dan menurut dokter Otto 2009 dapat mencapai 3-4 hari, bahkan dapat terjadi 1-8 hari. Masa penularan EPEC dapat berlangsung lama dan masih dapat
ditemukan pada pasien sampai dengan 3 minggu setelah sembuh Kandun dan Chin 2000. Jadi berdasarkan penjelasan di atas, 1 satu minggu pasca pemberian
EPEC, EPEC belum tereliminasi dari tubuh. Selain itu, berdasarkan penelitian Suhesti 2010, 1 minggu setelah paparan EPEC dari luar dihentikan, diare masih
terjadi, artinya EPEC yang merupakan penyebab diare belum tereliminasi secara tuntas dari tubuh tikus. Penjelasan di atas merupakan penyebab masih rendahnya
kandungan enzim Cu,Zn-SOD di jaringan hati pada tikus yang pernah dipapar EPEC 1 minggu sebelumnya.
Superoksida dismutase SOD merupakan metaloenzim yang membutuhkan seng Zn sebagai kestabilan strukturnya dan tembaga Cu untuk aktivitas
enzimatiknya Eriyamremu et al. 2008. Kerusakan sel enterosit karena infeksi EPEC yang digambarkan pada struktur pedestal epitel usus dapat menyebabkan
maldigesti dan malabsorpsi, sehingga menurunkan kapasitas penyerapan bahan- bahan makanan oleh mukosa intestin Black 2004. Cu dan Zn yang terkandung
dalam pakan tidak terserap sempurna. Cu dan Zn yang merupakan prekursor pembentukan enzim Cu,Zn-SOD tidak tersedia, sehingga pembentukan enzim
Cu,Zn-SOD tidak dapat terjadi. Oleh karena itu, kelompok yang diberi paparan EPEC kandungan enzim Cu,Zn-SOD-nya rendah.
Pemberian probiotik L. plantarum pada minggu pertama sampai minggu ketiga menunjukkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang sama dengan kondisi
normal kontrol negatif. Hal ini berarti L. plantarum kurang memiliki aktivitas antioksidatif sehingga tidak terjadi peningkatan kandungan enzim antioksidan ini
di jaringan hati tikus. Pada terminasi hari ke-15 dan hari ke-22, kelompok perlakuan L. fermentum
+ EPEC dan L. fermentum memiliki kandungan enzim Cu,Zn-SOD yang lebih tinggi dari pada kelompok perlakuan L. plantarum dan L. plantarum + EPEC. Hal
ini menunjukkan bahwa L. fermentum lebih baik dari pada L. plantarum dalam hal kemampuan melawan EPEC dan meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD di
jaringan hati tikus. Sehingga probiotik L. fermentum lebih disarankan untuk meningkatkan kandungan enzim Cu,Zn-SOD baik pada tikus yang diinfeksi EPEC
maupun tidak.
V. SIMPULAN DAN SARAN
Kategori