13
1. Menentukan jenis kromofor, ikatan rangkap yang terkonjugasi dan
auksokrom dari senyawa organik 2.
Menjelaskan informasi dari struktur berdasarkan panjang gelombang maksimum suatu senyawa
3. Mampu menganalisis senyawa organik secara kuantitatif dengan
menggunakan hukum Lambert-Beer
2.6.2.1 Analisis Kualitatif
Kegunaan spektrofotometri ultraviolet dalam analisis kualitatif sangat terbatas karena rentang daerah radiasi yang relatif sempit hanya dapat
mengakomodasi sedikit sekali puncak absorpsi maksimum dan minimum, karena itu identifikasi senyawa yang tidak diketahui tidak memungkinkan untuk
dilakukan Satiadarma, dkk, 2004. Akan tetapi, jika digabung dengan cara lain seperti spektroskopi
inframerah, resonansi magnet inti dan spektroskopi massa, maka dapat digunakan untuk identifikasi atau analisis kualitatif senyawa tersebut Rohman, 2007.
2.6.2.2 Analisis Kuantitatif
Penggunaan utama spetrofotometri ultraviolet adalah dalam analisis kuantitatif. Apabila dalam alur radiasi spektrofotometer terdapat senyawa yang
mengabsorpsi radiasi, maka akan terjadi pengurangan kekuatan radiasi yang mencapai detektor. Parameter kekuatan energi radiasi khas yang diabsorpsi oleh
molekul adalah absorbansi A yang dalam batas konsentrasi rendah nilainya sebanding dengan banyaknya molekul yang mengabsorpsi radiasi dan merupakan
dasar analisis kuantiatif. Penentuan kadar senyawa organik yang mempunyai
Universitas Sumatera Utara
14
struktur kromofor atau mengandung gugus kromofor, serta mengabsorpsi radiasi ultraviolet penggunaanya cukup luas Satiadarma, dkk, 2004.
Analisis kuantitatif dengan metode spektrofotometri ultraviolet dapat digolongkan menjadi analisis zat tunggal atau analisis satu komponen dan analisis
kuantitatif dua macam zat atau lebih analisis multikomponen. 1.
Analisis kuantitatif zat tunggal analisis satu komponen Terdapat dua metode penggunan pengukuran spektofotometri dalam
analisis senyawa, yaitu metode penetapan kadar absolut dan komparatif. Metode penetapan kadar komparatif lebih disukai. Pada jenis penetapan
kadar ini, larutan standar obat yang akan dianalisis disiapkan, serapan sampel dan standar ditentukan pada kondisi yang sama Cairns, 2009,
dimana menurut Holme dan Hazel 1983, konsentrasi sampel dihitung dengan rumus sebagai berikut:
Ct Cs
At As =
Keterangan: As = Absorbansi baku pembanding At = Absorbansi sampel
Cs = Konsentrasi baku pembanding Ct = Konsentrasi sampel
2. Analisis kuantitatif dua macam zat atau lebih analisis multikomponen
Analisis dua atau lebih bahan kadang-kadang ditentukan secara simultan dalam sekali pengamatan tanpa dipisahkan. Hal ini didasarkan pada asumsi
bahwa absorbansi total dari campuran komponen merupakan jumlah serapan masing-masing komponen tersebut. Menurut Day dan Underwood
Universitas Sumatera Utara
15
2002, ada tiga kemungkinan analisis campuran dua komponen atau lebih, yaitu:
a. Spektrum tanpa tumpang tindih overlap
Spektrum tidak saling tumpang tindih memungkinkan untuk menemukan suatu panjang gelombang dimana X menyerap dan Y tidak
menyerap, serta panjang gelombang serapan maksimum dimana Y menyerap dan X tidak menyerap Gambar 1. Komponen X dan Y
masing- masing diukur pada λ1 dan λ2
.
Gambar 1 . Spektrum absorpsi senyawa X dan Y tidak terjadi
tumpang tindih pada kedua panjang gelombang yang digunakan
b. Spektrum tumpang tindih satu arah
Spektrum dari X dan Y tumpang tindih satu arah Gambar 2. Y tidak mengganggu pengukuran X pada λ1 tetapi X menyerap cukup banyak
bersama- sama dengan Y pada λ2. Pemecahan masalah ini pada
prinsipnya cukup sederhana. Konsentrasi X ditetapkan langsung dari s
erapan larutan pada λ1. Kemudian serapan yang diberikan oleh konsentrasi X pada λ2 dihitung dari absorptivitas molar X pada λ2
Universitas Sumatera Utara
16
yang sebelumnya telah diketahui. Serapan ini dikurangkan dari serapan terukur larutan pada λ2 sehingga diperoleh serapan yang disebabkan
oleh komponen Y. Kemudian konsentrasi Y dapat dihitung dengan cara yang biasa.
Gambar 2 . Spektrum absorpsi senyawa X dan Y tumpang tindih satu
arah; X dapat diukur tanpa gangguan Y, tetapi X mengganggu pada pengukuran langsung dari Y
c. Spektrum tumpang tindih dua arah
Spektrum dari X dan Y saling tumpang tindih dua arah Gambar 3, pada keadaan ini tidak ada panjang gelombang serapan maksimum
dimana X dan Y menyerap tanpa gangguan. Maka perlu penyelesaian dua persamaan dengan dua variabel yang tidak diketahui. Hal ini
karena serapan total dari campuran beberapa komponen merupakan jumlah serapan masing-masing komponen tersebut. Sehingga,
konsentrasi X dan Y yang belum diketahui dalam kedua persamaan dapat diukur dengan mudah.
Universitas Sumatera Utara
17
Gambar 3 . Spektrum absorpsi senyawa X dan Y tumpang tindih dua
arah. Tidak ada panjang gelombang dimana masing- masing senyawa dapat diukur tanpa mengalami gangguan
oleh yang lainnya
2.7 Validasi Metode
