Waktu dan Tempat Alat dan Bahan Isolat Bakteri, Fungi dan Benih Perbanyakan dan Pembuatan Suspensi Bakteri Kitinolitik

BAB 3 BAHAN DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilakukan dari bulan April sampai Agustus 2011 bertempat di Laboratorium Mikrobiologi, Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan.

3.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah cawan Petri, benang wol, pipa kaca, Erlenmeyer, hotplate, objek glass, cover glass, ose bengkok, bunsen, handspray, aluminium foil, kertas label, thermometer, kamera digital, gunting, pipet serologi, propipet, tabung reaksi, pipet tetes, gelas ukur, timbangan analitik, oven, autoklaf, inkubator fungi, neraca, label tempel, clingwrap, indikator pH, spatula, dan inkubator bakteri. Sedangkan bahan yang digunakan adalah natrium alginat, kitosan, CaCl 2 , tapioka, gliserol, media potato dextrosa agarbroth PDAB, nutrient agar NA, 0,9 NaCl, CH 3 COOH, larutan Mac Farland, akuadest steril, serbuk kitin, larutan garam, agar, spritus, koloidal kitin.

3.3 Isolat Bakteri, Fungi dan Benih

Isolat bakteri kitinolitik yang digunakan adalah koleksi Laboratorium Mikrobiologi yang merupakan bakteri tanah yang berasal dari daerah Bangka yaitu Enterobacter sp. BK 15 dan Bacillus sp. BK 17. F. oxysporum yang digunakan berasal dari Laboratorium Mikrobiologi, Departemen Biologi, FMIPA USU. F. oxysporum diremajakan pada media PDA. Pada umur 7 hari dibuat suspensi sporanya Universitas Sumatera Utara dengan konsentrasi ~10 6 selml Patonah 2008. Benih yang digunakan adalah benih cabai merah komersial yang telah tersertifikasi.

3.4 Perbanyakan dan Pembuatan Suspensi Bakteri Kitinolitik

Biakan bakteri disubkultur dalam media NA dan diinkubasi pada 30 o C selama ± 2 hari. Hasil subkultur biakan bakteri diambil dengan jarum ose dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 10 ml akuades steril. Setelah itu dihomogenkan dengan cara divorteks dan disamakan kekeruhannya dengan standart Mac Farland sehingga diperoleh suspensi bakteri dengan kerapatan sel ~10 8 CFUml.

3.5 Pembuatan Benih Cabai Merah Terenkapsulasi Alginat-kitosan-Bakteri Kitinolitik