a. Uji Kualitatif Flavonoid
Masing-masing fraksi A, B, C dan D diverifikasi kandungan flavonoidnya dengan mengambil sejumlah 10 mg fraksi kental di atas dan diuji seperti prosedur
pada uji pendahuluan.
b. Uji Total Flavonoid
Uji kuantitatif dilakukan untuk mempertegas keberadaan senyawa flavonoid dalam fraksi di atas, karena bila hasilnya nol berarti bisa saja hasil positif pada uji
kualitatif di atas bersifat biaspalsu.
Uji kuantitatif dinyatakan sebagai jumlah flavonoid total menggunakan metode yang diperkenalkan oleh Chang et al. 2002. Metode ini menetapkan
flavonoid sebagai senyawa kuersetin sehingga dalam perlakuannya menggunakan kuersetin sebagai baku pembanding.
Prosedurnya adalah sebagai berikut : Sebanyak 5 mg kuersetin ditimbang dan dilarutkan dalam 10 mL metanol sebagai larutan stok 500
gmL lalu diencerkan sedemikian rupa sehingga diperoleh konsentrasi larutan 40
– 120 gmL. Ambil 0,5 mL larutan lalu tambahkan 1,5 mL metanol; 0,1 mL AlCl
3
10; 0,1 mL Na asetat anhidrat 1M dan 2,8 mL aquades. Inkubasi selama 30 menit lalu ukur
absorbansinya pada 415 nm. Buat persamaan regresi linearnya.
Sampel uji ekstrak kloroform dengan konsentrasi 1000 gmL dan ekstrak etil
asetat 1000 gmL dilarutkan dalam metanol. Tambahkan 0,1 mL AlCl
3
10 ; 0,1 mL Na asetat anhidrat 1M dan 2,8 mL aquades. Inkubasi selama 30 menit lalu
ukur absorbansinya pada 415 nm.
Kadar flavonoid total dilakukan dengan mengukur absorbansi senyawa uji lalu diekstrapolasikan menggunakan persamaan regresi linear serangkaian seri
kadar kuersetin standar yang telah diukur absorbansinya sehingga kadar total flavonoid sampel ditentukan sebagai kadar kuersetin mg QE100 g bahan .
3. Identifikasi Senyawa Flavonoid
Proses KLT dilakukan pada fraksi yang positif mengandung flavonoid dengan prosedur berikut :
Cairan pengembang : Dilakukan proses optimasi Jarak rambat : 10 cm
Pengembangan : Menaik Penotolan : Bentuk garis
Pendeteksi : Sinar UV 254366
Bercak pada KLT yang terbentuk selanjutnya disemprot dengan pereaksi sitroborat. Bercak positif flavonoid ditandai dengan warna kuning yang berpendar
di bawah UV 366 Markham, 1988.
Kategori