36 perubahan suhu dapat dilihat pada Gambar 23. Hasil uji pengaruh suhu
menunjukkan besarnya inhibisi meningkat seiring dengan kenaikan sampai dengan suhu 60°C, kemudian turun secara tajam. Hal ini
menunjukkan bahwa perubahan konfigurasi sisi aktif enzim oleh suhu dapat menyebabkan inhibitor mudah atau sulit untuk mengikat enzim.
Inhibisi menjadi sangat besar pada saat suhu 60°C karena aktivitas invertase tanpa CuSO
4
masih tinggi, sedangkan aktivitas invertase dengan penambahan CuSO
4
0.125 mM sangat rendah karena telah mengalami denaturasi. Inhibisi menurun setelah suhu optimum karena aktivitas
invertase baik dengan maupun tanpa CuSO
4
telah turun. Hal ini menunjukkan bahwa CuSO
4
0.125 mM efektif dalam menghambat aktivitas invertase pada suhu optimum enzim pada rasio konsentrasi
invertase : sukrosa 1 : 2500.
-12.2 6.8
37.6 53.5
69.7 85.5
95.1 83.6
68.4
12.3 -20
20 40
60 80
100 120
10 20
30 40
50 60
70 80
90
suhu
o
C inhi
bi s
i
1 2
3 4
5 6
7 8
s ubs
et
Gambar 23. Inhibisi aktivitas invertase oleh CuSO
4
0.125 mM pada suhu yang berbeda, dengan konsentrasi invertase 5 mgl,
konsentrasi sukrosa 12.5 gl, lama reaksi 5 menit
5. Pengaruh Lama Pemanasan
Pengujian pengaruh lama pemanasan dilakukan pada rasio invertase terhadap sukrosa 1 : 2500, dengan konsentrasi CuSO
4
0.125 mM. Analisis sidik ragam menunjukkan bahwa pemanasan invertase yang
dilakukan pada waktu yang berbeda memberikan pengaruh yang nyata terhadap konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan. Hasil uji statistik
tersebut dapat dilihat pada Lampiran 11. Gula pereduksi yang dihasilkan
37 berda pada rentang 82 µM hingga 1467 µM, dengan konsentrasi tertinggi
pada invertase yang tidak dipanaskan dan konsentrasi terkecil pada pemanasan 60 detik dan 300 detik pada perlakuan tanpa CuSO
4
. Pengaruh lama pemanasan terhadap aktivitas invertase dapat dilihat pada Gambar
24.
200 400
600 800
1000 1200
1400 1600
10 20
30 40
50 60
300
lama pemanasan detik k
ons ent
ras i gul
a per
eduk s
i
u M
Perlakuan lama pemanasan dengan penambahan CuSO4 0.125 mM Perlakuan lama pemanasan tanpa CuSO4
Gambar 24. Kurva pengaruh lama pemanasan terhadap konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan, dengan konsentrasi invertase 5
mgl, konsentrasi sukrosa 12.5 gl, lama reaksi 5 menit Pengujian pengaruh lama pemasan ini memberikan hasil bahwa
semakin lama waktu pemanasan, semakin rendah aktivitas invertase dalam menghidrolisis sukrosa. Invertase menunjukkan kestabilan terhadap panas
dalam waktu yang sangat singkat. Aktivitas enzim terus menurun sampai 20 detik pemanasan, kemudian menjadi inaktif dengan pemanasan yang
lebih lama. Perlakuan dengan maupun tanpa penambahan CuSO
4
menunjukkan pola penurunan aktivitas yang sama. Hal ini dapat disebabkan oleh perubahan konformasi enzim oleh panas yang
mengakibatkan struktur enzim sulit berikatan dengan substrat. Hal ini sesuai dengan teori bahwa pemanasan dapat mengakibatkan enzim
terdenaturasi, karena enzim merupakan protein. Akibat penting dari enzim yang terdenaturasi yaitu enzim tidak akan menjadi aktif mengkatalisis
reaksi. Peristiwa ini terjadi karena susunan tiga dimensi yang khas dari rantai polipeptida terganggu dan molekul ini terbuka menjadi struktur
yang acak, tanpa adanya kerusakan pada struktur kovalen. Molekul enzim ini bersifat sangat rapuh dan segera rusak oleh panas Lehninger, 1988.
38 Inhibisi oleh CuSO
4
0.125 mM terjadi pada lama pemanasan 0 detik hingga kurang dari 20 detik, dapat dilihat pada Gambar 25. Waktu
pemanasan 20 detik hingga detik selanjutnya tidak terjadi inhibisi walaupun aktivitas kedua perlakuan tersebut tidak berbeda nyata
berdasarkan uji lanjut Duncan, dapat dilihat pada Lampiran 12. Inhibisi ini tidak terjadi karena invertase telah kehilangan aktivitasnya, sehingga tidak
dapat menghidrolisis substrat. Hal ini menyebabkan adanya penambahan CuSO
4
0.125 mM tidak dapat menginhibisi enzim karena struktur enzim telah rusak yang berakibat pada rusaknya sisi aktif enzim. Jadi,
penambahan CuSO
4
0.125 mM pada rasio konsentrasi invertase dengan sukrosa 1 : 2500 tidak berperan sebagai inhibitor pada perlakuan lama
pemanasan lebih dari 20 detik karena perlakuan pemanasan sendiri telah memberikan pengaruh penghambatan.
35.5
-19.8 44.4
-17.3 -21.3
-15.2 -13.3
-17.9 -40.0
-30.0 -20.0
-10.0 0.0
10.0 20.0
30.0 40.0
50.0 60.0
10 20
30 40
50 60
300
lama pemanasan detik in
h ib
is i
1 2
3
su b
se t
Gambar 25. Inhibisi aktivitas invertase oleh CuSO
4
pada lama pemanasan yang berbeda, dengan konsentrasi invertase
5 mgl, konsentrasi sukrosa 12.5 gl, lama reaksi 5 menit
D. Kinetika Inhibisi Reaksi Invertase
