20 Setelah itu larutan CuSO
4
2.5 mM sebanyak 0.1 ml dan larutan sukrosa 50 gl sebanyak 0.5 ml dimasukkan ke dalamnya t =
0 menit. Pengukuran reaksi hidrolisis mengikuti prosedur sebelumnya.
d. Penentuan parameter kinetika
Kondisi inhibisi invertase oleh CuSO
4
yang optimum dipilih suhu dan pH yang kemudian pada selang konsentrasi substrat
tertentu diuji aktivitasnya dalam menghidrolisis sukrosa.. Hasil yang diperoleh kemudian diplotkan pada kurva kinetika Lineweaver-Burk,
dan dihitung parameter kinetikanya K
M
dan V
maks
serta dibandingkan antara perlakuan tanpa CuSO
4
dan dengan penambahan CuSO
4
. Nilai K
M
dan V
maks
dapat diperoleh dari persamaan linier plot kurva Lineweaver-Burk. Slope yang diperoleh merupakan K
M
V
maks
, sedangkan intersep menunjukkan 1V
maks
. Bentuk kurva Lineweaver- Burk yang diperoleh menunjukkan model kinetika ihibisi. Penentuan
model kinetika menggunakan alat bantu program SigmaPlot 2004 for Windows Version 9.01
. Program ini menentukan model kinetika inhibisi yang paling tepat berdasarkan nilai r
2
tertinggi.
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
Kemampuan hidrolisis sukrosa oleh invertase dilakukan dengan mengukur aktivitas enzim tersebut, sedangkan kemampuan inhibisi garam logam CuSO
4
dilihat pada setiap perubahan faktor yang berpengaruh konsentrasi substrat, konsentrasi enzim, pH, suhu dan lama pemanasan terhadap aktivitas enzim serta
perubahan parameter kinetika K
M
dan V
maks
inhibisi degradasi sukrosa.
A. Aktivitas Invertase
Penentuan aktivitas invertase penting dilakukan untuk mengetahui seberapa besar perubahan mikromol sukrosa menjadi gula pereduksi setiap
menit reaksi. Slope yang diperoleh dari persamaan garis linier adalah 3.2267, yang berarti bahwa invertase mampu menghidrolisis sukrosa 3.2267 µM
menjadi glukosa dan fruktosa dalam satu detik atau perubahan 0.3872 µmol sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa dalam satu menit. Aktivitas invertase
digambarkan dalam bentuk kurva pada Gambar 14.
200 400
600 800
1000 1200
50 100
150 200
250 300
350
lama reaksi detik k
o ns
e n
tr as
i gu la
pe re
du k
s i
u M
Gambar 14. Kurva aktivitas invertase berdasarkan konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan, dengan konsentrasi invertase 5 mgl,
konsentrasi sukrosa 25 gl. Persamaan garis linier y = 3.2267 x, r
2
= 0.9721
