Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
tersebut, kemudian media kultur diinkubasi selama 7 dan 14 hari. Pada setiap masa inkubasi media kultur diambil sebanyak 10 mL dan disentrifugasi kemudian
diambil supernatannya untuk dianalisis gula reduksinya secara kuantitatif dengan metode Nelson-Somogyi.
Untuk menentukan kadar gula reduksi secara kuantitatif terlebih dahulu kita persiapkan Regensia Nelson, Larutan Arsenomolybdat dan larutan Pb-Asetat.
I. Penyiapan Reagensia 1. Reagensia Nelson
Reagensia Nelson A Ditimbang 12,5 gr Natrium karbonat anhidrat; 12,5 gr garam Rochelle K-
Na tetrat; 10 gr Natrium bikarbonat dan 100 gr Natrium Sulfat anhidrat dilarutkan dalam 350 mL air suling dan diencerken sampai 500 mL.
Reagensia Nelson B Ditimbang 7,5 gr CuSO
4
5H
2
O dilarutkan dalam 50 mL air suling dan ditambahkan 1 tetes asam sulfat pekat.
Reagensia Nelson dibuat dengan mencampurkan 25 bagian reagensia Nelson A dan 1 bagian Nelson B. Pencampuran dilakukan pada hari akan
digunakan.
2. Larutan Arsenomolybdat
Ditimbang 25 gr Amonium molybdat dilarutkan dalam 450 mL air suling dan ditambahkan 25 mL asam sulfat pekat. Pada tempat yang lain
dilarutkan 3 gr Na
2
H
2
SO
4
7H
2
O dalam 25 mL air suling, kemudian larutan ini dituang kedalam larutan yang pertama. Disimpan dalam botol yang
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
berwarna coklat dan diinkubasi selama 24 jam. Reagensia ini baru dapat digunakan setelah masa inkubasi tersebut, reagensia ini berwarna kuning.
3. Larutan Pb-asetat
Ditimbang 10 gr Pb-asetat anhidrat, dilarutkan dalam 100 mL aquades, kemudian dinetralkan dengan NaOH. Untuk menghilangkan kelebihan Pb
yang digunakan dalam penjernihan, tambahkan kedalam filtrat K atau Na- oksalat anhidrat secukupnya.
Kemudian dibuat larutan glukosa standart dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 mg100 mL sehingga diperoleh Tabel seperti berikut :
Tabel 1. Pengenceran Larutan Glukosa Standart Tabung
Reaksi mL larutan 0,2
mg glukosamL mL aquadest
mL glukosamL
1 2
3 4
5 6
7 8
9
10 11
0,1 0,2
0,3 0,4
0,5 0,6
0,7 0,8
0,9 1,0
1 0,9
0,8 0,7
0,6 0,5
0,4 0,3
0,2 0,1
0,02 0,04
0,06 0,08
0,10 0,12
0,14 0,16
0,18 0,20
Masing-masing larutan dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukkan kedalam tabung reaksi, ditambahkan 1 mL reagensia Nelson, dipanaskan semua tabung
pada air mendidih selama 20 menit. Kemudian didinginkan, setelah dingin tambahkan 7 mL reagensia Arsenomolybdat dan diguncang hingga larut.
Kemudian ditambahkan 7 mL aquadest diguncang hingga homogen. Nilai absorbansi diukur dengan mengukur larutan standart tersebut pada panjang
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
gelombang 541 nm. Dari perlakuan diatas diperoleh data kalibrasi seperti pada Tabel berikut ini :
Tabel 2. Data Kalibrasi Larutan Glukosa Standar NO
Xi Yi
Xi
2
Yi
2
XiYi
1 0,02
0,165 0,0004
0,027225 0,00330
2 0,04
0,233 0,0016
0,054289 0,00932
3 0,06
0,302 0,0036
0,091204 0,01812
4 0,08
0,363 0,0064
0,131769 0,02904
5 0,10
0,421 0,0100
0,177241 0,04210
6 0,12
0,480 0,0144
0,230400 0,05760
7 0,14
0,547 0,0186
0,293764 0,07580
8 0,16
0,605 0,0256
0,366025 0,09680
9 0,18
0,661 0,0324
0,436921 0,11898
10 0,20
0,720 0,04003
0,518400 0,14400
4,492 0,1540
2,327238 0,59514
Keterangan : Xi : konsentrasi glukosa standart Yi : Absorbansi pada panjang gelombang = 541 dan n = 10
Dibuat persamaan regresi dengan memakai data-data tersebut : Y = a + bx, sehingga diperoleh Y = 0,1125 + 3,061x, dengan r = 0,997
dimana : Y = Absorbansi, x = konsentrasi gula reduksi mgmL. Setelah diketahui nilai x, kemudian disubsitusikan pada persamaan :
Kadar gula reduksi = A x FP x 100 S
Dengan :
A = Konsentrasi gula reduksi dari perhitungan persamaan regresi mgmL FP = Faktor pengenceran
S = Berat sampel kering mg Untuk mengukur media kultur sama prosedurnya dengan pelaksanaan
pembuatan larutan standar. Untuk menghitung kadar gula reduksi dari media kultur harus diketahui persamaan regresi dengan menggunakan data larutan
standar. Kadar gula reduksi dapat diketahui melalui persamaan :
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
Kadar gula reduksi : A x FP x 100 S
A = K onsentrasi gula reduksi dan perhitungan persamaan regresi mgmL
FP = Faktor pengencer S = Berat sampel kering mg
Metode Penelitian
Hasil uji pada media cair Selulosa Agar secara kualitatif dari 38 mikroorganisme selulolitik tidak ada yang tidak menghasilkan endapan merah
bata. Sehingga semua isolat mikroorganisme tersebut perlu diuji lagi pada media cair secara kuantitatif. Percobaan pada media cair ini menggunakan metode
Rancangan Acak Lengkap RAL Non Faktorial dengan satu faktor Mikroorganisme Selulolitik yang terdiri dari 39 perlakuan dan 2 ulangan dengan
menggunakan uji beda rataan Duncan Multiple Range Test : 1. SUKJ 1
: Kayu yang mengandung jamur 1 pada media SA 2. SUKJ 2
: Kayu yang mengandung jamur 2 pada media SA 3. SUKJ 4
: Kayu yang mengandung jamur 4 pada media SA 4. SUKJ 5 : Kayu yang mengandung jamur 5 pada media SA
5. SUKJ 7 : Kayu yang mengandung jamur 7 pada media SA 6. SUKJ 8
: Kayu yang mengandung jamur 8 pada media SA 7. SUKJ 9
: Kayu yang mengandung jamur 9 pada media SA 8. SUKJ 10 : Kayu yang mengandung jamur 10 pada media SA
9. SUKJ 11 : Kayu yang mengandung jamur 11 pada media SA
10. SUKJ 12 : Kayu yang mengandung jamur 12 pada media SA 11. MUKJ 1
: Kayu yang mengandung jamur 1 pada media MYA
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
12. MUKJ 2 : Kayu yang mengandung jamur 2 pada media MYA
13. MUKJ 3 : Kayu yang mengandung jamur 3 pada media MYA 14. MUKJ 5 : Kayu yang mengandung jamur 5 pada media MYA
15. MUKJ 6 : Kayu yang mengandung jamur 6 pada media MYA 16. MUKJ 7
: Kayu yang mengandung jamur 7 pada media MYA 17. MUKJ 8 : Kayu yang mengandung jamur 8 pada media MYA
18. MUKJ 9 : Kayu yang mengandung jamur 9 pada media MYA
19. MUKJ 10 : Kayu yang mengandung jamur 10 pada media MYA 20. SAGJ 1
: Gambut yang mengandung jamur 1 pada media SA 21. SAGJ 2 : Gambut yang mengandung jamur 2 pada media SA
22. MAGJ 1 : Gambut yang mengandung jamur 1 pada media MYA 23. MAGJ 2 : Gambut yang mengandung jamur 2 pada media MYA
24. SUKA 1 : Kayu yang mengandung aktinomicetes 1 pada media SA 25. SUKA 2
: Kayu yang mengandung aktinomicetes 2 pada media SA 26. SUKA 3 : Kayu yang mengandung aktinomicetes 3 pada media SA
27. SUKB 1 : Kayu yang mengandung bakteri 1 pada media SA 28. SUKB 2 : Kayu yang mengandung bakteri 2 pada media SA
29. SUKB 3 : Kayu yang mengandung bakteri 3 pada media SA 30. MUKB 1 : Kayu yang mengandung bakteri 1 pada media MYA
31. MAGB 1 : Gambut yang mengandung bakteri 1 pada media MYA 32. MAGB 2 : Gambut yang mengandung bakteri 2 pada media MYA
33. SAGA 1 : Gambut yang mengandung aktinomicetes pada media SA
34. H 34 : Aktinomicetes Koleksi laboratorium 35. BB 31 : Bakteri Koleksi laboratorium
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
36. PH 12 : Bakteri Koleksi laboratorium 37. H 27 : Bakteri Koleksi laboratorium
38. TA 5 : Aktinomicetes Koleksi laboratorium 39. KONTROL
Sehingga total unit percobaan adalah 78 unit. Adapun model linier dari rancangan percobaan yang dipergunakan dalam
penelitian ini adalah: Y
ij
= µ + i +
ij
Dengan : Y
ij
: nilai pengamatan hasil penelitian pada perlakuan ke-i ulangan ke-j µ : nilai rerata mean harapan
i : pengaruh faktor perlakuan jenis isolat
ij
: pengaruh galat
2. Uji Potensi Pada Media Kayu
Kayu segar dicacah dengan ukuran ± 5 cm. Lalu ditimbang setiap perlakuan 100 gr, sebelumnya dilakukan analisis CN awal pada kayu tersebut.
Kemudian dinokulasikan isolat jamur, bakteri dan aktinomicetes sesuai perlakuan dan dimasukkan kedalam plastik. Kemudian diaduk dan dimasukkan kedalam
ember. Rasio CN diukur dan dilakukan pembalikan setiap 5, 10, 15, 20, 25, 30 hari.
Metode Penelitian Pada Media Kayu
Dari hasil uji potensi pada media Selulosa Agar cair secara kuantitatif masing-masing isolat jamur, bakteri, dan aktinomicetes diambil yang terbaik.
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
Percobaan pada media kayu ini menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap RAL Non Faktorial dengan satu faktor Mikroorganisme Selulolitik yang terdiri
dari 19 perlakuan dan 2 ulangan. Dengan menggunakan uji beda rataan Duncan Multiple Range Test :
1. SUKJ 1 : Kayu yang mengandung jamur 1 pada media SA
2. SUKJ 2 : Kayu yang mengandung jamur 2 pada media SA
3. SUKJ 5 : Kayu yang mengandung jamur 5 pada media SA
4. MUKJ 1 : Kayu yang mengandung jamur 1 pada media MYA
5. MUKJ 9 : Kayu yang mengandung jamur 9 pada media MYA
6. SAGJ 1 : Gambut yang mengandung jamur 1 pada media SA
7. SAGJ 2 : Gambut yang mengandung jamur 2 pada media SA
8. MAGJ 1 : Gambut yang mengandung jamur 1 pada media MYA
9. MAGJ 2 : Gambut yang mengandung jamur 2 pada media MYA
10. SUKA 3 : Kayu yang mengandung aktinomicetes 3 pada media SA 11. SUKB 1 : Kayu yang mengandung bakteri 1 pada media SA
12. SUKB 2 : Kayu yang mengandung bakteri 2 pada media SA 13. SAGB 1 : Gambut yang mengandung bakteri 1 pada media SA
14. H 34 : Aktinomicetes koleksi laboratorium
15. BB 31 : Bakteri koleksi laboratorium
16. PH 12 : Bakteri koleksi laboratorium
17. H 27 : Bakteri koleksi laboratorium
18. TA 5 : Aktinomicetes koleksi laboratorium
19. KONTROL Sehingga total unit percoban adalah38 unit
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
Adapun model linier dari rancangan percobaan yang dipergunakan dalam penelitian ini adalah:
Y
ij
= µ + i +
ij
Dengan : Y
ij
: nilai pengamatan hasil penelitian pada perlakuan ke-i ulangan ke-j µ : nilai rerata mean harapan
i : pengaruh faktor perlakuan jenis isolat
ij
: pengaruh galat
Parameter yang Diamati
1. Analisis kadar gula reduksi kuantitatif metode Nelson-Somogyi 2. Analisis CN media kayu
3. Bobot kayu g 4. Serat, warna dan bau
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
I. Isolasi Mikroorganisme Selulolitik
Dari kayu dan tanah gambut yang digunakan berhasil diperoleh beberapa isolat mikroorganisme selulolitik sebagaimana yang disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Isolasi Mikroorganisme Selulolitik yang Diisolasi dari Kayu dan Tanah Gambut
Jenis MOS Jumlah Isolat
1. Kayu
Jamur Bakteri
Aktinomicetes
Media SA
10 3
3
Media MYA
9 1
-
2. Tanah gambut
Jamur Bakteri
Aktinomicetes 2
2 1
2 -
-
Dari Tabel 3 terlihat bahwa jumlah mikroorganisme terbanyak yaitu pada jamur sebanyak 19 isolat dari kayu dan 4 isolat dari tanah gambut lalu diikuti
isolat bakteri sebanyak 4 isolat dari kayu dan 2 isolat dari tanah gambut sedangkan yang paling sedikit pada aktinomicetes sebanyak 3 isolat dari kayu dan
1 isolat dari tanah gambut. Dari sampel kayu dan tanah gambut yang diuji, ditemukan
mikroorganisme selulolitik sebanyak 33 isolat yaitu 26 isolat dari kayu 19 jamur, 3 aktinomicetes, 4 bakteri dan 7 isolat dari tanah gambut 4 jamur, 1
aktinomicetes, 2 bakteri.
Desi Nurmayani : Isolasi Dan Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik Asal Tanah Gambut Dan Kayu Sedang Melapuk Dalam Mendekomposisikan Kayu, 2007.
USU Repository © 2009
II. Uji Potensi Mikroorganisme Selulolitik 1. Uji Potensi Pada Media Cair Selulosa Agar
