58 dalam media yang mengandung TDZ tanaman akan mengalami necrosis dan
kemudian mati, hal ini diduga karena kandungan sitokinin yang semakin tinggi.
4.2.4 Pengaruh perlakuan TDZ dan NAA pada media pengakaran
Tunas hasil multiplikasi sebelum disubkultur ke media pengakaran MS + 0.5 µM NAA terlebih dahulu disubkultur ke media MS0 sebanyak dua kali untuk
pembesaran tunas dan merangsang pembentukan akar. Nursandi 2005 menyatakan bahwa sitokinin BAP dan TDZ dapat menghambat pembentukan
akar secara spontan pada konsentrasi tertentu. Akar dapat diinduksi dengan mensubkultur ke media pengakaran yaitu MS + 0.54 µM NAA untuk eksplan
yang berasal dari BAP, sedangkan yang berasal dari TDZ sebelumnya disubkultur ke media MS0 dua kali.
Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa konsentrasi TDZ, NAA dan interaksi antara TDZ dan NAA tidak berpengaruh nyata terhadap persentase
tunas berakar, jumlah akar, dan jumlah daun sampai 5 MST. Tetapi memberikan pengaruh sangat nyata terhadap panjang akar dan tinggi tanaman Tabel 22.
Pada 5 MST semua perlakuan mampu membentuk akar 94,4-100 dengan rata-rata 4.0 akartunas. Persen tunas berakar dan jumlah akar yang
dihasilkan tidak berbeda pada semua perlakuan demikian juga dengan jumlah daun, rata-rata jumlah daun yang dihasilkan adalah 5.7 dauneksplan.
Tabel 22. Rekapitulasi hasil analisis ragam perlakuan TDZ dan NAA dalam media pengakaran pada 5 MST.
Peubah Perlakuan
TDZ NAA
TDZ NAA
Persentase Tunas berakar tn
tn tn
Jumlah Akar tn
tn tn
Panjang Akar Jumlah Daun
tn tn
tn Tinggi Tanaman
Keterangan : tn : tidak nyata, : berbeda nyata a=5, : berbeda sangat nyata a=1
Persen pembentukan akar yang dihasilkan pada penelitian ini lebih tinggi dari tanaman anggur yang hanya mampu membentuk akar 12-64 pada
konsentrasi 0.0-0.1 µ
M TDZ Gribaudo dan Fronda 1991. Penambahan auksin
59 eksogen 0.5
µ M NAA pada media pengakaran diduga mampu merubah
keseimbangan hormonal tunas, sehingga tunas tersebut akan lebih responsif. Alasan lain tingginya persen pembentukan akar adalah karena subkultur berulang
pada media MS0 sehingga menurunkan kandungan sitokinin endogen tanaman. Tunas yang berasal dari media multiplikasi dengan kombinasi 0.5 µM
TDZ + 1.0 µM NAA memberikan rata-rata panjang akar terpanjang, yaitu 3.79 cmtidak berbeda nyata dengan perlakuan 0.05-0.5
µ M TDZ + 1.0
µ M NAA, 0.05
µ M TDZ + 2.0
µ M NAA, 0.5 dan 2.0
µ M NAA tanpa TDZ. Tetapi berbeda nyata
dengan kombinasi 0.10µM TDZ + 2.0 µM NAA dan 0.5 µM TDZ + 2.0 µM NAA yang memberikan rata-rata panjang akar terpendek, yaitu 1.7 cm dan 1.9 cm.
Peningkatan konsentrasi TDZ akan cenderung menurunkan panjang akar. Menurut Murthy et al. 1995 penggunaan TDZ dalam perbanyakan in vitro akan
meningkatkan biosintesis atau akumulasi sitokinin dan auksin endogen. Sitokinin dengan konsentrasi tinggi akan berpengaruh negatif yaitu pembengkakan akar dan
pertumbuhan akar terhenti Fratini dan Ruiz 2002. Tunas yang berasal dari media kontol memberikan rata-rata panjang akar yang tidak berbeda nyata dengan
kombinasi 0.05 µM TDZ + 0.5 µM NAA memberikan rata-rata panjang akar yang sama, yaitu 3.6 cmtunas pada media pengakaran Tabel 23. Hasil percobaan ini
menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi TDZ yang digunakan, semakin pendek akar yang terbentuk.
Tabel 23. Pengaruh perlakuan TDZ dan NAA terhadap panjang akar dalam media pengakaran pada 5 MST
TDZ Rata-rata panjang akar
µ M
NAA µ
M 0.0
0.5 1.0
2.0 0.00
3.6bc 2.9ab
3.3ab 3.5ab
0.05 3.3ab
3.6bc 3.2ab
3.3ab 0.10
3.4ab 2.5bc
3.2ab 1.9c
0.50 3.1ab
2.5bc 3.7a
1.7c Keterangan : Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT 5.
Tinggi tanaman merupakan ukuran yang sering diamati baik sebagai indikator pertumbuhan maupun sebagai peubah yang digunakan untuk mengukur
60 pengaruh lingkungan atau perlakuan yang dicobakan. Penambahan tinggi eksplan
disebabkan oleh dua proses yaitu pembelahan dan pemanjangan sel. Kedua proses ini terjadi pada jaringan meristem, yaitu pada titik tumbuh batang.
Pengamatan terhadap tinggi tanaman dilakukan pada akhir percobaan, yaitu minggu ke-5. Hasil analisis ragam pada Tabel 20. menunjukkan bahwa
konsentrasi TDZ, NAA dan interaksi antara TDZ dengan NAA memberikan pengaruh yang sangat nyata terhadap tinggi tanaman. Tanaman tertinggi diperoleh
dari media multiplikasi 0.05 µM TDZ tanpa NAA, yaitu 5.6 cm, tidak berbeda nyata dengan perlakuan 0.1
µ M TDZ tanpa NAA, 2.0
µ M NAA tanpa TDZ dan
kontrol. Tabel 24. Sedangkan tanaman terpendek diperoleh dari perlakuan 0,5 µ
M TDZ + 2 µ
M NAA, yaitu 3.6 cm, tidak berbeda nyata dengan perlakuan 0.5 µ
M TDZ + 0.5 µ
M NAA, 0.1 µ
M TDZ + 0.5-2.0 µ
M NAA. Peningkatan konsentrasi TDZ dan NAA cenderung menurunkan tinggi tanaman, hal serupa
juga dilaporkan Gribaudo dan Fronda 1991 pada tanaman anggur peningkatan konsentrasi 0.1
µ M atau lebih menyebabkan pemendekan pucuk. Hal tersebut
diduga karena selain NAA yang ditambahkan pada media pengakaran, tanaman juga mempunyai auksin endogen yang terbawa dari media multiplikasi
sebelumnya sehingga diduga terjadi akumulasi auksin. Konsentrasi auksin dan sitokinin yang tinggi akan menginduksi produksi etilen dan menekan
pemanjangan tunas Thomas dan Katterman 1986; Yip dan Yang 1986.
Tabel 24. Pengaruh perlakuan TDZ dan NAA terhadap tinggi tanaman dalam media pengakaran pada 5 MST
TDZ Rata-rata tinggi tanaman
mM NAA mM
0.0 0.5
1.0 2.0
0.00 5.3abc
4.7bde 5.3abc
5.6a 0.05
5.6a 4.9abcd
4.5cde 4.9abcd
0.10 5.5ab
4.3def 4.0ef
4.2def 0.50
5.0abcd 4.3def
5.2abc 3.6f
Keterangan : Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT 5.
61
4.2.5 Aklimatisasi perlakuan TDZ dan NAA
