Persiapan Penelitian Isolasi dan Penghitungan Populasi Mikrob

3.3. Metode

Penelitian ini terdiri dari tiga tahap yaitu 1 persiapan penelitian, 2 isolasi dan penghitungan populasi mikrob dan 3 pengukuran pH, Eh serta kandungan logam- logam berat.

3.3.1 Persiapan Penelitian

Tahap ini dilakukan dengan mempersiapkan bahan yang terdiri dari sludge bubur kertas dan tanah bekas tambang batubara, untuk tanah bekas tambang batubara dilakukan sterilisasi dengan cara fumigasi. Setelah tanah diinkubasi selama 10-14 hari, tanah tersebut dicampur dengan sludge dengan perbandingan 75 : 25 vv Widyati et al., 2005 dan selanjutnya diinkubasi. Untuk menjaga kondisi campuran tanah dengan sludge tetap reduktif, maka dilakukan penggenangan hingga berbentuk lumpur. Perlakuan ini menggunakan kontrol tanah bekas tambang batubara steril yang digenangi.

3.3.2. Isolasi dan Penghitungan Populasi Mikrob

Mikrob diisolasi dari campuran tanah bekas tambang batubara yang sudah disterilkan dan sludge bubur kertas yang kemudian digenangi oleh air hingga berbentuk lumpur. Media yang digunakan untuk kegiatan isolasi ini adalah nutrient agar total bakteri, potato dextrose agar fungi, carboxy methyl celullose mikrob selulolitik, medium Nakamura mikrob xilan, dan Phosgate padat yang dimodifikasi bakteri pereduksi sulfat. Metode yang digunakan dalam isolasi mikrob dengan menggunakan media padat adalah metode agar tuang. Isolasi total mikrob dan mikrob fungsional mikrob selulolitik, mikrob pendegradasi xilan dan bakteri pereduksi sulfat dilakukan selama 15 hari dengan selang waktu isolasi setiap 5 hari. Pengenceran yang digunakan untuk isolasi total mikrob, fungi, bakteri xilan dan mikrob selulolitik yaitu 10 -4 - 10 -6 sedangkan pengenceran yang digunakan untuk isolasi bakteri pereduksi sulfat yaitu 10 -2 – 10 -4 dengan masing- masing pengenceran sebanyak 3 kali ulangan. Jumlah populasi mikrob didapatkan dengan cara mengalikan faktor pengenceran dengan jumlah koloni mikrob yang dihitung. Selanjutnya, hasil tersebut dikonversi ke dalam jumlah mikrob dalam 1 gram berat kering mutlak sampel. Grafik dinamika pertumbuhan mikrob didapatkan dari hasil perhitungan populasi mikrob.

3.3.3. Analisis Beberapa Sifat Kimia