30
3.4.5. Kalibrasi SporaKuman
Media di panaskan dan simpan di dalam waterbath pada suhu 55 C.
Kemudian di ambil sebanyak 100 ml, tambahkan spora yang akan diuji dan di kocok hingga larutan media dan kuman tercampur rata. Di pipet kultur media
masing-masing sebanyak 8 ml dilakukan 3 kali pengulangan dan dibiarkan memadat. Kertas cakram paper disk diletakkan diatas permukaan kultur media
dan ditetesi dengan larutan baku standar antibiotika. Sebelum diinkubasikan spora dibiarkan pada suhu kamar selama 1 jam. Inkubasikan di dalam inkubator dengan
suhu sesuai dengan spora yang diuji, selama 18-24 jam. Hasil ditentukan dengan mengukur diameter daerah hambatan dengan menggunakan jangka sorongkaliper
3.4.6. Penghitungan Spora Bakteri
Dari contoh suspensi diatas dibuat pengenceran berseri sampai dengan 10
-8
, setiap konsentrasi pengenceran ditu ang ke dalam cawan petri masing-masing 1
ml dilakukan 2 kali pengulangan, kemudian di tambahkan media agar sebanyak 15-20 ml dan digoyang hingga merata dan ditunggu sampai memadat. Selanjutnya
cawan petri di inkubasi selama 18-24 jam pada masing-masing temperatur tergantung jenis sporanya dan tiap cawan petri di hitung dan koloni yang di hitung
jumlahnya antara 25-250.
Gambar 2. Bagan Penghitungan Spora
1 ml SPORA 10
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml + 9 ml + 9 ml + 9 ml + 9 ml + 9 ml + 9 ml + 9 ml + 9 ml
10
-1
10
-2
10
-3
10
-4
10
-5
10
-6
10
-7
10
-8
+ 1 ml + 1 ml + 1 ml + 1 ml + 1 ml + 1 ml + 1 ml
+ 1 ml
31 Masing-masing cawan petri diisi dengan 15-20 ml media agar dan 1 ml spora.
3.4.7. Cara Menyatakan Hasil
Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yaitu angka pertama di depan koma dan angka kedua dibelakang koma. Jika angka yang ketiga sama
dengan atau lebih besar dari 5, harus dibulatkan satu angka lebih tinggi pada angka yang kedua.
Tabel 3. Standar Penghitungan Cawan Jumlah Koloni
Per Pengenceran Standar
Penghitungan Cawan Keterangan
10
-1
10
-2
10
-3
200 23
1 20 x 10
-4
23 dan 1 25 700
125 10
1,3 x 10
-5
700250 ; 1025 Jika cawan dari dua tingkat pengenceran menghasilkan koloni dengan
jumlah antara 25 dan 250, dan perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua pengenceran tersebut lebih kecil dari atau sama dengan 2, tentukan
rata-rata dari kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan pengencerannya. Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah lebih besar 2, yang dilaporkan
hanya hasil yang terkecil.
Tabel 4. Standar Penghitungan Cawan Jumlah Koloni
Per Pengenceran Standar
Penghitungan Cawan Keterangan
10
-2
10
-3
10
-4
250 41 4 4,1 x 10
-4
Hitung rata-rata : 41000\25000=1,64 2
140 32 2 1,4 x 10
-4
Hitung rata-rata : 32000\14000=2,3 2
32
3.4.8. Pembuatan Larutan Standar Kerja
Kategori