28 selama 18-24 jam. Selanjutnya suspensi dipusing 3000 rpm selama 10 menit
buang supernatan lapisan atasnya. Kedalam endapan tambahkan NaCl fisiologis secukupnya, dikocok dan
dimasukkan kedalam refrigerator dengan suhu 4 C selama 18-24 jam. Kemudian
larutan dipanaskan kembali dalam waterbath dengan suhu 65 C selama 30 menit,
setelah itu dipusing dengan kecepatan 1000 rpm selama 5 menit dan diambil lapisan atasnya. Hasilnya disimpan dalam refrigerator sebagai spora.
Pembuatan Kultur Media Uji
Sebanyak 6 gr peptone, 1,5 gr beef extract, 3 gr yeast extract, 1,35 gr KH
2
PO
4
, dan 15-16 bacto agar dalam 1000 ml aquadest, kemudian diukur pada pH 5,7 ± 0,1 dan dididihkan. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat Buffer
Sebanyak 3,5 gr KH
2
PO
4
dan 3 gr Na
2
HPO
4
dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian larutan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.
3.4.3. Golongan Makrolida Pembuatan Spora Bakteri Uji
Bakteri Micrococcus luteus ditambahkan dalam agar miring dan
diinkubasi pada suhu 36 C selama 18-24 jam. Kemudian diambil 1 ose kuman
biakan Micrococcus luteus ke dalam 10 ml media Heart Infusion Broth HIB. Selanjutnya diinkubasikan selama 18-24 jam dalam inkubator suhu 36
C. Kuman
siap digunakan untuk pengujian. Pembuatan Kultur Media Uji
Sebanyak 6 gr peptone, 1,5 gr beef extract, 3 gr yeast extract, 1 gr D+glukosa dan 15-16 gr bacto agar dilarutkan dalam 1000 ml aquades,
kemudian diukur pada pH 5,7 ± 0,1 dan dididihkan. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
C selama 15 menit.
29
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat Buffer
Sebanyak 7 gr KH
2
PO
4
dan 6 gr Na
2
HPO
4
dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian larutan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
C selama 15 menit.
3.4.4. Golongan Aminoglikosida Pembuatan Spora Bakteri Uji
Bakteri Bacillus subtilis ditambahkan dalam agar miring dan diinkubasi pada suhu 36
C selama 1 satu minggu. Kemudian bakteri yang ditumbuhkan tersebut dipanen dan dimasukkan ke dalam larutan aquabides 20ml, sebanyak 4 tabung
sentrifuge, lalu dipanaskan dalam waterbath pada suhu 65 C selama 30 menit.
Selanjutnya suspensi dipusing 3000 rpm selama 10 menit dibuang supernatan lapisan atasnya.
Kedalam endapan tambahkan aquabides secukupnya, dikocok dan dimasukkan kedalam refrigerator dengan suhu 4
C selama 18-24 jam. Kemudian larutan dipanaskan kembali dalam waterbath dengan suhu 65
C selama 30 menit, setelah itu dipusing dengan kecepatan 1000 rpm selama 5 menit dan diambil
lapisan atasnya. Hasilnya disimpan dalam refrigerator sebagai spora.
Pembuatan Kultur Media Uji
Sebanyak 5 gr peptone, 3 gr beef extract, 3 gr yeast extract, dan 15-16 gr bacto agar dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian diukur pada pH 5,7 ± 0,1
dan dididihkan. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 C selama 15
menit.
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat Buffer
Sebanyak 6,4 gr KH
2
PO
4
dan 18,9 gr Na
2
HPO
4
dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian larutan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
C selama 15 menit.
30
3.4.5. Kalibrasi SporaKuman
