27
3.4.1. Golongan Penisilin Pembuatan Spora Bakteri Uji
Bakteri Bacillus calidolactis ditambahkan dalam agar miring dan
diinkubasi pada suhu 55 C selama 2 dua minggu. Kemudian bakteri yang
ditumbuhkan tersebut dipanen dan dimasukkan ke dalam larutan aquabides steril 20 ml, sebanyak 4 tabung sentrifuge, lalu dipanaskan dalam waterbath pada suhu
65 C selama 30 menit. Selanjutnya suspensi dipusing 3000 rpm selama 10 menit
buang supernatan lapisan atasnya. Kedalam endapan tambahkan aquabides secukupnya, dikocok dan
dimasukkan kedalam refrigerator dengan suhu 4 C selama 18-24 jam. Kemudian
larutan dipanaskan kembali dalam waterbath dengan suhu 65 C selama 30 menit,
setelah itu dipusing dengan kecepatan 1000 rpm selama 5 menit dan diambil lapisan atasnya. Hasilnya disimpan dalam refrigerator sebagai spora.
Pembuatan Kultur Media Uji
Sebanyak 5 gr tryptone, 12 gr yeast extract, 1 gr dextrose dan 15-16 gr bacto agar dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian diukur pada pH 5,7 ± 0,1
dan dididihkan. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat Buffer
Sebanyak 13,3 gr KH
2
PO
4
dan 6,2 gr Na
2
HPO
4
dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian larutan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.
3.4.2. Golongan Tetrasiklin Pembuatan Spora Bakteri Uji
Bakteri Bacillus cereus ditambahkan dalam agar miring dan diinkubasi
pada suhu 30 C selama 1 satu minggu. Kemudian bakteri yang ditumbuhkan
tersebut dipanen dan dimasukkan ke dalam larutan NaCl fisiologis steril 20 ml, sebanyak 4 tabung sentrifus, lalu dipanaskan dalam waterbath pada suhu 65
C
28 selama 18-24 jam. Selanjutnya suspensi dipusing 3000 rpm selama 10 menit
buang supernatan lapisan atasnya. Kedalam endapan tambahkan NaCl fisiologis secukupnya, dikocok dan
dimasukkan kedalam refrigerator dengan suhu 4 C selama 18-24 jam. Kemudian
larutan dipanaskan kembali dalam waterbath dengan suhu 65 C selama 30 menit,
setelah itu dipusing dengan kecepatan 1000 rpm selama 5 menit dan diambil lapisan atasnya. Hasilnya disimpan dalam refrigerator sebagai spora.
Pembuatan Kultur Media Uji
Sebanyak 6 gr peptone, 1,5 gr beef extract, 3 gr yeast extract, 1,35 gr KH
2
PO
4
, dan 15-16 bacto agar dalam 1000 ml aquadest, kemudian diukur pada pH 5,7 ± 0,1 dan dididihkan. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat Buffer
Sebanyak 3,5 gr KH
2
PO
4
dan 3 gr Na
2
HPO
4
dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian larutan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.
3.4.3. Golongan Makrolida Pembuatan Spora Bakteri Uji
Kategori