b. Suhufermentasi: ±30°C Juhasz, 2005; Deshpande dkk, 2012; Ilyas,
2011. c.
pH fermentasi: 5 Juhasz, 2005.
3.4 Prosedur Percobaan
Penelitian ini terdiri dari beberapa tahapan dimulai dari persiapan bahan baku dan mikroba, produksi enzim selulase dengan metode fermentasi padat hingga
pengambilan enzim. Berikut ini adalah prosedur sistematis dari pengerjaan masing-
masing tahapan. 3.4.1 Pembenihan Mikroba
Prosedur untuk pembenihan mikroba adalah sebagai berikut: 1.
Mikroba yang digunakan adalah Aspergillus niger dan Trichoderma reesei. Pembenihan dilakukan pada media PDA Potato Dextrose Agar
secara zig-zag dengan menggunakan kawat inokulasi di dalam cawan petri secara aseptik.
2. Mikroba diinkubasi pada suhu ± 30°C selama 72 jam.
3.4.2 Praperlakuan Eceng Gondok
Prosedur praperlakuan eceng gondok adalah sebagai berikut: 1.
Praperlakuan fisik a.
Eceng gondok dipotong-potong dengan pisau, dikeringkan dalam oven, lalu dianalisa kadar lignin dan selulosa awal.
Universitas Sumatera Utara
b. Eceng gondok dilumatkan dengan penggerus, diautoclave suhu 120
o
C selama 15 menit lalu dikeringkan, lalu dianalisa kadar lignin dan
selulosa akhir. c.
Eceng gondok ditambahkan aquadest untuk diatur kelembabannya. 2.
Praperlakuan biologi a.
Eceng gondok dipotong-potong dengan pisau, dilumatkan dengan penggerus. Dianalisa kadar lignin dan selulosa awal.
b. Eceng gondok disterilkan dengan autoclave suhu 120
o
C selama 15 menit, lalu didinginkan.
c. Eceng gondok didegradasi lignin dengan jamur pelapuk putihdengan
penambahan nutrisi pada suhu kamar selama 7 hari. Dicuci, dikeringkan, lalu dianalisa kadar lignin dan selulosa akhir.
d. Eceng gondok diatur kelembabannya.
Skema praperlakuan fisik dan biologi ditunjukkan oleh Gambar 3.1 dan 3.2.
Mulai
Di Cacah Eceng GondokDi Cuci
Universitas Sumatera Utara
Gambar 3.1 Skema PraperlakuanFisik
Apakah Eceng Gondok Sudah Kering
Tidak
Ya
Di Cuci Data Kadar Lignin-Selulosa
Sampel Fisik Di Gerus
Dikeringkan pada Suhu 105
o
C
Dilakukan Analisa Kadar Lignin-Selulosa Sampel Fisik
Mulai
Dilakukan Analisa Kadar Lignin-Selulosa Sampel Awal
Disterilkan Bubuk Eceng Gondok pada T = 121
o
C selama 15 menit
Di Fermentasi oleh Jamur Pelapuk Putih selama 7 hari
Universitas Sumatera Utara
Gambar 3.2 Skema Praperlakuan Biologi
3.4.3 Penyiapan Inokulum Cair
Prosedur penyiapan inokulum cair mikroba adalah sebagai berikut: 1.
Seratus mililiter media cair media cair ini terdiri dari sukrosa 22 wv, NH
4 2
SO
4
1 wv, KH
2
PO
4
1wv Junior dkk, 2009, api bunsen, dan kawat ose disiapkan.
2. pH media cair diatur dengan HCl hingga pH=3.
Apakah Eceng Gondok Sudah Kering
Tidak
Ya Dikeringkan pada Suhu
105
o
C
Data Kadar Lignin-Selulosa Sampel Biologi
Dilakukan Analisa Kadar Lignin-Selulosa Sampel Biologi
Universitas Sumatera Utara
3. Ujung kawat ose dicelupkan ke dalam alkohol 96 lalu dipanaskan pada
api bunsen sampai berwarna merah. 4.
Biakan Aspergillus nigerdan Trichoderma reeseidari media PDA diambil dengan menggunakan kawat ose lalu dicelupkan beberapa saat pada media
cair hingga tampak keruh. 5.
Media cair ditutup dengan kapas dan diinkubasi pada suhu ± 30°C selama 48 jam.
6. Pekerjaan ini dilakukan di ruang aseptic Sa’adah Z dkk, 2010.
3.4.4 Produksi Enzim Selulase
Kategori