19
3.5 Prosedur
3.5.1 Sterilisasi alat
Alat dicuci bersih dengan merendam di dalam air sabun selama 24 jam, lalu dibilas. Dihapus bekas spidol dengan larutan aceton. Setelah bersih alat gelas
ditiriskan atau dikeringkan dalam handuk. Setelah kering dibungkus dengan kertas lalu sterilisasi kering dengan memasukkan ke dalam oven dan dipanaskan pada
suhu 180
o
C selama 2 jam, sedangkan alat yang mempunyai presisi disterilisasi basah dengan memasukkan kedalam autoklaf dan dipanaskan pada suhu 121
C
selama 15 menit. 3.5.2
Pembuatan Media
Pembuatan media yang digunakan untuk seluruh parameter dalam pengujian sampel obat tradisional yaitu:
Tabel 3.1 Media Pengujian Nama Media
Berat gram Aquadest ml
Plate Count Agar PCA 22,5
1000
Potato Dextrose Agar PDA 39,0
1000
Peptone Dilution Fluid PDF 1
1000
Serbuk media ditimbang lalu dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dalam akuades. Pembuatan 300 ml media PDA, ditimbang serbuk PDA
sebanyak 11.7 gram, dengan perhitungan sebagai berikut: 39,0 g
1000 ml × 300 ml = 11,7 g
20
Pembuatan 300 ml media PCA, ditimbang serbuk PCA sebanyak 6,75 gram, dengan perhitungan sebagai berikut:
22,5 g 1000 ml
× 300 ml = 6,75 g Pembuatan 261 ml media PDF, ditimbang serbuk PDF sebanyak 0,261 gram,
dengan perhitungan sebagai berikut: 1 g
1000 ml × 261 ml = 0,261 g
Ditambahkan kloramfenikol sebanyak 30 mg untuk 300 ml PDA dan TTC sebanyak 3 mg untuk 300 ml PCA. Ditutup ujung erlenmeyer dengan
menggunakan kapas dan kertas perkamen, lalu dihomogenkan. Media dipanaskan hingga larutjernih. Media disterilisasi didalam autoklaf dengan suhu 121
C selama 15 menit.
3.5.3 Homogenisasi sampel
Sebanyak 10 g sampel ditimbang secara aseptis pada kertas perkamen, lalu dimasukkan ke dalam erlenmeyer. Ditambahkan media PDF sebanyak 90 ml,
kemudian dihomogenkan. 3.5.4
Pengenceran a.
Angka lempeng total
Disiapkan 5 tabung reaksi atau lebih yang masing-masing telah diisi dengan 9 ml PDF. Dari suspensi pengenceran 10
-1
dipipet 1 ml ke dalam tabung yang berisi 9 ml pengencer PDF hingga diperoleh pengenceran 10
-2
. Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10
-6
.
21
b. Angka kapang khamir