26
BAB III METODE PENELITIAN
A. Subjek dan Objek Penelitian
1. Subjek Penelitian
Subjek pada penelitian ini adalah enzim tripsin. 2.
Objek Penelitian
Objek penelitian ini adalah aktivitas enzim tripsin dengan dan tanpa penambahan ion logam Ag
+
dalam bentuk senyawa AgNO
3
konsentrasi 0,001 M; 0,003 M; 0,005 M; dan 0,007 M pada kondisi optimum.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel Bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah konsentrasi senyawa AgNO
3
.
2. Variabel Terikat
Variabel terikat dalam penelitian ini adalah aktivitas enzim tripsin dengan dan tanpa penambahan ion logam Ag
+
dalam bentuk senyawa AgNO
3
konsentrasi 0,001 M; 0,003 M; 0,005 M; dan 0,007 M.
3. Variabel Terkendali
Variabel terkendali dari penelitian ini adalah kondisi optimum dari enzim tripsin.
C. Alat dan Bahan Penelitian
1. Alat-Alat Penelitian
Dalam penelitian ini menggunakan alat-alat sebagai berikut:
27
a. Seperangkat alat gelas
b. Seperangkat alat spektronik-20
c. Neraca analitik
d. Sentrifuge
e. Inkubator
2. Bahan-bahan Penelitian
Dalam penelitian ini, semua bahan kimia yang digunakan adalah bahan kimia pro-analis E-Merck kecuali akuades. Bahan-bahan yang digunakan adalah
sebagai berikut: a.
Larutan Buffer Fosfat 0,1 M pH 7 sebanyak 50 mL Larutan buffer fosfat 0,1 M pH 7 dibuat dengan melarutkan 0,6 gram NaH
2
PO
4
ke dalam 25 mL akuades. Kemudian ditambahkan NaOH 0,5 M tetes demi tetes hingga diperoleh pH 7. Setelah itu menambahkan akuades hingga volume
50 mL. b.
Larutan Buffer Fosfat 0,1 M pH 8 sebanyak 1000 mL Larutan buffer fosfat 0,1 M pH 8 dibuat dengan melarutkan 12 gram NaH
2
PO
4
ke dalam 500 mL akuades. Kemudian ditambahkan NaOH 0,5 M tetes demi tetes hingga diperoleh pH 8. Setelah itu menambahkan akuades hingga volume
1000 mL. c.
Larutan Buffer Fosfat 0,1 M pH 9 sebanyak 50 mL Larutan buffer fosfat 0,1 M pH 9 dibuat dengan melarutkan 0,6 gram NaH
2
PO
4
ke dalam 25 mL akuades. Kemudian ditambahkan NaOH 0,5 M tetes demi
28
tetes hingga diperoleh pH 9. Setelah itu menambahkan akuades hingga volume 50 mL.
d. Larutan 10 TCA asam trikloroasetat sebanyak 500 mL
Larutan 10 TCA dibuat dengan melarutkan 50 gram kristal TCA kedalam 500 mL akuades.
e. Larutan Enzim Tripsin pH 7 sebanyak 10 mL
Larutan enzim tripsin dibuat dengan melarutkan 4 mg padatan enzim tripsin pada 10 mL buffer fosfat 0,1 M pH 7.
f. Larutan Enzim Tripsin pH 8 sebanyak 200 mL
Larutan enzim tripsin dibuat dengan melarutkan 80 mg padatan enzim tripsin pada 200 mL buffer fosfat 0,1 M pH 8.
g. Larutan Enzim Tripsin pH 9 sebanyak 10 mL
Larutan enzim tripsin dibuat dengan melarutkan 4 mg padatan enzim tripsin pada 10 mL buffer fosfat 0,1 M pH 9.
h. Reagen Folin-Ciocalteau 1 N sebanyak 200 mL
Reagen Folin-Ciocalteau 1 N dibuat dengan menambahkan akuades 100 mL pada larutan induk Folin-Ciocalteau 100 mL perbandingan 1:1.
Menghomogenkan larutan reagen Folin-Ciocalteau 1 N. i.
Larutan NaOH 0,5 M sebanyak 1000 mL Larutan NaoH 0,5 M dibuat dengan melarutkan 20 gram kristal NaOH dengan
1000 mL akuades. Mengaduknya hingga kristal NaOH benar-benar larut. j.
Larutan Kasein 1 pH 7 sebanyak 50 mL
29
Larutan induk kasein dengan menimbang 0,5 gram bubuk kasein. Kemudian menambahkan NaOH 0,5 M tetes demi tetes hingga bubuk kasein berbentuk
gel. Menambahkan 10 mL akuades. Memanaskan larutan kasein sambil diaduk hingga kasein benar benar larut. Menambahkan larutan buffer fosfat 0,1 M pH
7 hingga volume 50 mL. k.
Larutan Kasein 10 mgmL pH 8 sebanyak 600 mL Larutan induk kasein dengan menimbang 6 gram bubuk kasein. Kemudian
menambahkan NaOH 0,5 M tetes demi tetes hingga bubuk kasein berbentuk gel. Menambahkan 100 mL akuades. Memanaskan larutan kasein sambil
diaduk hingga kasein benar benar larut. Menambahkan larutan buffer fosfat 0,1 M pH 8 hingga volume 600 mL.
l. Larutan Kasein 1 pH 9 sebanyak 50 mL
Larutan induk kasein dengan menimbang 0,5 gram bubuk kasein. Kemudian menambahkan NaOH 0,5 M tetes demi tetes hingga bubuk kasein berbentuk
gel. Menambahkan 10 mL akuades. Memanaskan larutan kasein sambil diaduk hingga kasein benar benar larut. Menambahkan larutan buffer fosfat 0,1 M pH
9 hingga volume 50 mL. m.
Pereaksi Lowry 1
Reagen A sebanyak 75 mL Melarutkan 1,5 gram Na
2
CO
3
dalam 75 mL NaOH 0,1 M. Mengaduknya hingga larut sempurna.
2 Reagen B sebanyak 10 mL
30
Melarutkan 0,005 gram CuSO
4
.5H
2
O dalam 10 mL KaliumNatrium Tartrat 1 melarutkan 0,1 gram KaliumNatrium Tartrat pada 10 mL akuades .
Mengaduknya hingga larut sempurna. 3
Reagen C sebanyak 76,5 mL Mencampurkan 75 mL reagen A dengan 1,5 mL reagen B.
4 Reagen E sebanyak 10 mL
Reagen E dibuat dengan menambahkan akuades 5 mL pada larutan induk Folin-Ciocalteau 5 mL perbandingan 1:1. Menghomogenkan larutan
reagen Folin-Ciocalteau 1N. n.
Larutan induk AgNO
3
0,01 M sebanyak 100 mL Melarutkan 0,172 gram kristal AgNO
3
dengan akuades sebanyak 100 mL. o.
Akuades
D. Prosedur Penelitian
Kategori