22
Gambar 11. Reaksi Oksidasi Tirosin
Gambar 12. Reaksi Reduksi Fosfotungstat Menjadi Tungsten dan Fosfomolibdat Menjadi Molibdenum Biru
I. Penentuan Aktivitas Enzim dengan Metode Anson
Penentuan aktivitas enzim tripsin dengan metode Anson dilakukan berdasarkan pada produk larutan TCA-filtrat yang direaksikan dengan reagen
Foiln-Ciocalteau. Produk larutan TCA-filtrat adalah produk hasil hidrolisis protein oleh tripsin. Pemecahan protein oleh tripsin spesifik terhadap gugus karboksil lisin
atau arginin yang akan menghasilkan asam amino yang lebih sederhana Yayat, 2011: 20. Asam amino yang dihasilkan ini kemudian dihitung kadarnya dengan
metode Lowry. Dalam penentuan aktivitas enzim tripsin dengan metode Anson ini,
menggunakan metode Anson yang telah dimodifikasi Togu dkk., 2012: 42-43. Metode Anson modifikasi menggunakan tiga tabung yang berbeda. Ketiga tabung
tersebut adalah tabung sampel, tabung kontrol dan tabung blanko. Ketiga tabung tersebut diukur absorbansinya menggunakan spektronik-20 untuk mengetahui nilai
absorbansinya.
23
Absorbansi tabung kontrol dan tabung sampel dihitung dari terbentuknya kompleks warna biru antara asam amino dan reagen Folin-Ciocalteau. Asam amino
membentuk kompleks Biuret dengan Cu
2+
dalam reagen Folin-Ciocalteau. Kompleks CuII-asam amino ini akan mengalami reduksi menjadi Cu
+
karena berada pada lingkungan basa. Ion Cu
+
dan gugus fenol asam amino misalkan pada tirosin bereaksi dengan mereduksi asam fosfotungstat dan asam fosfomolibdat
menjadi tungsten dan molybdenum biru. Banyaknya kompleks warna yang terbentuk sebanding dengan jumlah produk asam amino yang dihidrolisis oleh
enzim tripsin. Nilai absorbansi yang diperoleh digunakan untuk menghitung aktivitas
enzim tripsin. Menurut Togu Gultom dan Eddy Sulistyowati 2011 aktivitas enzim tripsin dapat diperoleh dari perhitungan menggunakan rumus berikut:
� = � − �
�
� Keterangan:
V = aktivitas enzim tripsin � = Absorbansi tabung sampel
�
�
= Absorbansi tabung kontrol tabung yang enzimnya telah dinonaktifkan t = waktu inkubasi menit
J. Penelitian yang Relevan
