commit to user 27
2. Kadar Glukosa Darah Sewaktu
Glukosa darah diukur menggunakan
Gluko-stick test
dari darah ekor mencit BalbC. Disebut DM apabila kadar glukosa darah sewaktu
≥ 200 mgdl.
H. Rancangan Penelitian
Gambar 3.1. Skema Rencana Penelitian
X = jumlah mencit yang dipakai
N
1 =
kelompok kontrol normal N
2
= kelompok kontrol positif
N
3
= kelompok kontrol negatif
N
4
= kelompok perlakuan 1
N
5
= kelompok perlakuan 2
N
6
= kelompok perlakuan 3
H
1
= kadar glukosa darah kelompok kontrol normal sebelum perlakuan
X N1
N2 N3
N4 N5
N6 H1
H2 H3
H4 H5
H6 I1
I2 I3
I4 I5
I6 Perlakuan
selama 14 hari
Uji one way
ANOVA
dilanjutkan Uji
LSD Post Hoc
Test
Non DM
DM
commit to user 28
H
2
= kadar glukosa darah kelompok kontrol positif sebelum perlakuan H
3
= kadar glukosa darah kelompok kontrol negatif sebelum perlakuan H
4
= kadar glukosa darah kelompok perlakuan 1 sebelum perlakuan
H
5
= kadar glukosa darah kelompok perlakuan 2 sebelum perlakuan
H
6
= kadar glukosa darah kelompok perlakuan 3 sebelum perlakuan
I
1
= kadar glukosa darah kelompok kontrol normal setelah perlakuan
I
2
= kadar glukosa darah kelompok kontrol positif setelah perlakuan
I
3
= kadar glukosa darah kelompok kontrol negatif setelah perlakuan
I
4
= kadar glukosa darah kelompok perlakuan 1 setelah perlakuan
I
5
= kadar glukosa darah kelompok perlakuan 2 setelah perlakuan
I
6
= kadar glukosa darah kelompok perlakuan 3 setelah perlakuan
I. Instrumen Penelitian
Instrumen yang digunakan adalah sebagai berikut : 1.
Kandang mencit 2.
Timbangan Digital 3.
Spuit disposable
4. Sonde mencit
5. pipet ukur
6. Labu takar
7. becker glas
8.
Blood glucose stick meter
GlucoDr
TM
9. Timbangan obat
commit to user 29
J. Bahan Penelitian
Bahan yang akan digunakan adalah sebagai berikut : 1.
Streptozotocin
2. Bekatul beras hitam
3. Aquades
4. pelet
5. Metformin
6.
citrate buffer
7. air
K. Penentuan Dosis
1. Bekatul Beras Hitam
Penggunaan bekatul beras hitam di masyarakat untuk pengobatan diabetes melitus yaitu 30 gram. Konversi dosis dari manusia 70 kg
terhadap mencit 200 gram adalah 0,0026 Soehardjono, 1990. Maka dosis bekatul beras hitam untuk mencit:
Dosis manusia: 30 gram 200 ml = 150 gramliter 15 gram
Dosis I = x 0,0026
0,2 l
= 0,195 graml Setara dengan: 0,2 ml setelah pengenceran dengan 10 ml air
commit to user 30
Dosis II = 30 gram x 0,0026 0,2 l
= 0,39 gram l Setara dengan: 0,4 ml
Dosis III =
x 0,0026
= 0,78 graml Setara dengan: 0,8 ml
Jadi, dosis bekatul yang diberikan per ekor tikus putih per hari adalah 0,2 ml dosis I, 0,4 ml dosis II dan 0,8 ml dosis III.
2. Induksi
Streptozotocin
Umumnya induksi diabetes dilakukan dengan pemberian secara intraperitoneal
streptozotocin
dalam 0.15 M NaCl dan 100 mM buffer sitrat pH 4.5 dengan dosis
streptozotocin
40 mgkg BB yang diberikan selama 5 hari berturut-turut dapat menyebabkan DM tipe II. Pada
penelitian lain digunakan dosis tunggal
streptozotocin
240 mgkg BB dapat menginduksi DM tipe I Nacci
et.al
, 2009. Hanya mencit dengan kadar glukosa darah
≥ 200 mgdl yang digunakan dalam penelitian ini Amirshahrokhi
et al.
, 2008
Streptozotocin
sebanyak 500 mg yang dilarutkan dalam 50 ml buffer sitrat 0,02 M, sehingga 1 ml larutan mengandung 10 mg
60 gram 0,2 l
commit to user 31
streptozotocin
. Dosis
streptozotocin
yang digunakan tidak mengacu pada penelitian yang telah ada, namun peneliti menggunakan dosis 65 mgkg
BB yang diberikan dua kali dengan selang waktu 5 hari. Bila berat mencit rata-rata adalah 30 gram, maka dibutuhkan 1,95 mg
streptozotocin
untuk setiap ekor mencit. Jika 1 ml larutan mengandung 10 mg
streptozotocin
, maka induksi secara intraperitoneal memerlukan 0,195 ml larutan.
3. Metformin
Berdasarkan tabel konversi perhitungan dosis untuk berbagai hewan uji dari berbagai spesies dan manusia, maka konversi dosis
manusia dengan berat badan 70 kg pada mencit dengan berat badan 20 gram adalah 0,0026 Ngatidjan,1991. Dosis metformin yang digunakan
untuk orang dewasa adalah 500 mghari, dengan demikian dosis untuk mencit 20 gram = 500 mg x 0,0026 = 1,3 mgmencit hari. Karena
pemberian metformin dilakukan secara peroral, maka perlu dilakukan pelarutan dalam aquades dengan rincian 26 mg metformin dilarutkan
dalam 2 ml aquades. Bila dosis tiap mencit adalah 1,3 mg maka volume metformin yang diberikan adalah 0,1 ml tiap tikus setiap hari.
commit to user 32
L. Cara kerja
