Skor intensitas warna : 0 : negatif 1 : lemah
2 : sedang 3 : kuat
Untuk skor akhir digunakan skor imunoreaktif. Skor imunoreaktif diperoleh dengan mengalikan skor jumlah yang terwarnai dengan skor intensitas
warna. Interpretasi : Negatif
: 0-3 Positifoverekspresi
: 4-9
3.5. Cara Kerja
1. Semua slide yang berasal dari sinonasal yang telah didiagnosis sebagai inverted papilloma dan karsinoma sel skuamosa sinonasal.
2. Dilakukan pemotongan ulang blok parafin. 3. Pewarnaan dengan imunohistokimia p63.
4. Dilihat tampilan dari p63,
3.5.1. Pembuatan Sediaan Mikroskopis Sediaan mikroskopis dibuat dengan cara sebagai berikut :
1. Blok parafin yang telah dikumpulkan, disimpan dalam freezer sampai cukup dingin, selanjutnya dipotong tipis dengan menggunakan mikrotom dengan
tebal 4 µm. Setiap blok parafin, dipotong ulang 1 kali untuk pulasan imunohistokimia p63.
2. Sampel blok parafin yang sudah dipotong tipis 4 µm ditempelkan pada kaca objek.
Universitas Sumatera Utara
Pada pulasan imunohistokimia p63 digunakan kaca objek yang telah dicoating dengan poly-L-lysine atau Silanized slide agar jaringan dapat menempel pada kaca
objek selama proses pulasan imunohistokimia. Proses pembuatan coated slide kaca objek adalah sebagai berikut :
1. Kaca objek direndam seluruhnya dalam Aseton selama 10 menit. Masukkan kaca objek dalam larutan APES 3-aminopropyltriethoxylene, cat
no. A3548 sigma 5 mL + aseton 195 ml selama 10 menit. Kaca objek selanjutnya dicuci dengan akuades.
2. Keringkan dalam inkubator bersuhu 37 ⁰C selama satu malam.
3. Kaca objek siap digunakan. Cara menempelkan potongan tipis pada kaca objek coated adalah menggunakan
ujung pisau atau pinset yang runcing. Potongan tipis dipisahkan dan diratakan dengan memasukkannya ke dalam air hangat. Setelah mengembang, pindahkan ke
atas kaca objek. Selanjutnya, kaca objek diletakkan di atas alat pemanas hot plate 50-60
⁰C. Setelah parafin melunak, kaca objek dikeringkan dan potongan jaringan siap untuk dipulas.
3.5.2. Prosedur Sebelum Pulasan Antibodi Primer
1. Siapkan preparat berupa potongan tipis jaringan 4 µm yang sudah ditempelkan pada kaca objek silanized.
2. Deparafinisasi dengan mencelupkan preparat ke dalam cairan xylol sebanyak 3 kali, masing-masing 5 menit.
3. Rehidrasi dengan cara mencelupkan secara berurutan dalam etanol absolut, 96, 80 dan 70, masing-masing selama 5 menit.
4. Bilas dengan air mengalir selama 5 menit.
Universitas Sumatera Utara
5. Blocking preparat dengan mencelupkannya ke dalam endogen peroksidase 0,5 metanol 100ml + H2O2 1,6ml selama 30 menit.
6. Bilas dengan air mengalir selama 5 menit. 7. Pretreatment dengan buffer sitrat pada microwave :
• Cook I, power level 8 selama 5 menit. • Cook II, power level 1 selama 5 menit.
Dinginkan ± 45 menit. 8. Bilas dalam PBS pH 7,4 selama 3 menit dan keringkan air di sekitar potongan
jaringan. 9. Tandai di sekitar jaringan yang ingin dipulas dengan Pap pen.
10. Blocking preparat dengan meneteskan Normal Horse Serum 5 dan dibiarkan selama 15 menit di dalam rak inkubasi.
3.5.3. Protokol Pemulasan p63 dengan Menggunakan Metode REAL Envision
