BAB III METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian eksperimental murni sederhana tunggal dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah.
B. Variabel-variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Konsentrasi fraksi protein daun Azadirachta indica A. Juss FP
10
, FP
20
, FP
30
dan FP
40
. 2.
Variabel tergantung Prosentase kematian sel HeLa dan sel Vero pada masing-masing kultur sel.
3. Variabel pengacau terkendali
a. Medium tumbuh sel dikendalikan dengan menggunakan medium RPMI
1640 untuk sel HeLa dan medium M199 untuk sel Vero. b.
Tempat tumbuh dan waktu pemanenan daun mimba dikendalikan dengan memanen daun pada tempat dan waktu yang sama.
c. pH dan suhu pembuatan fraksi protein, dikendalikan pada pH 7,2 dan suhu
4
o
C. 4.
Variabel pengacau tak terkendali Kematian sel HeLa dan sel Vero secara alami.
25
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
C. Definisi Operasional
1. Uji sitotoksisitas adalah uji toksisitas secara in vitro menggunakan kultur sel.
2. Fraksi protein adalah protein yang didapat dari ekstrak gubal daun mimba
dengan pengendapan menggunakan amonium sulfat. 3.
Lethal Concentration LC
50
adalah konsentrasi fraksi protein daun mimba yang dapat mengakibatkan kematian 50 populasi sel HeLa maupun sel Vero.
D. Bahan atau Materi Penelitian
1. Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun segar tanaman
mimba Azadirachta indica A. Juss. Daun mimba diambil dari tanaman mimba Azadirachta indica A. Juss yang tumbuh di pekarangan
Laboratorium Hayati LPPT Unit III, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, pada bulan Juni 2006. Daun mimba diambil pada saat tanaman mimba belum
berbunga dan berbiji. 2.
Kultur sel HeLa dari stok Laboratorium Ilmu Hayati Universitas Gadjah Mada 3.
Kultur sel Vero dari stok Laboratorium Ilmu Hayati Universitas Gadjah Mada 4.
Pereaksi untuk isolasi dan penetapan konsentrasi protein dari daun Azadirachta indica A. Juss dengan bahan p.a Merck:
a. larutan dapar natrium fosfat 5mM pH 7,2
b. larutan dapar natrium fosfat 5mM pH 7,2 yang mengandung 0,14 M NaCl
c. amonium sulfat
5. Pereaksi untuk uji sitotoksisitas pada sel HeLa dan sel Vero
a. Media pencuci : RPMI 1640 Sigma, natrium bikarbonat, Hepes Sigma
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
b. Media penumbuh sel HeLa : RPMI 1640 Sigma, Foetal Bovine Serum
FBS 10 Gibco, Penisilin-Streptomisin 2 Gibco, dan Fungison 0,5 Gibco
c. Media penumbuh sel Vero : M199 Sigma, Foetal Bovine Serum FBS
10 Gibco, Penisilin-Streptomisin 2 Gibco, dan Fungison 0,5 Gibco
d. Reagen Stopper : natrium dodeksil sulfat 10 dalam HCl 0,01 N Merck
e. MTT 3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenyl tetrazolium bromide
5 mgml Sigma f.
Trypsin 0,25 Sigma
E. Alat-alat Penelitian
Kategori