bertambah pendeknya telomer-telomer yang mengakibatkan penuaan dan bahkan kematian sel. Sel HeLa mudah menginvasi atau mengkontaminasi kultur sel lain
dalam satu laboratorium yang sama Anonim, 2007b. HeLa
cell line merupakan immortal cell line yang digunakan dalam penelitian dibidang kesehatan seperti uji antitumor, uji sitotoksisitas, biologi sel,
dan kemampuan invasi bakteri. Sel ini dapat dikultur menggunakan media RPMI 1640. Media RPMI 1640 mengandung nutrisi yang dibutuhkan oleh sel seperti
asam amino, vitamin, garam-garam anorganik dan glukosa Freshney, 1986.
2. Sel Vero
Vero epithelial cell line ditemukan pertama pada tahun 1962 oleh Y.
Yasumura dan Y. Kawakita di Universitas Chiba di Chiba, Jepang. Sel Vero diambil dari ginjal kera dewasa jenis African Green Monkey yang sehat.
Walaupun sering digunakan dalam tranfections dan produksi vaksin, sel Vero juga sering digunakan untuk mendeteksi verotoksin sekelompok toksin yang
berhubungan yang dihasilkan oleh beberapa strain Escherichia coli yang merupakan penyebab utama hemorrhagic colitic dan sindrom hemolytic uremic
pada manusia Anonim, 2006b.
E. Uji Sitotoksisitas In Vitro
Uji untuk identifikasi agen kemoterapetik kanker yang baru biasanya dilakukan pada hewan percobaan yang mempunyai kesamaan sifat dengan
manusia. Namun, ada beberapa pertimbangan yang menyebabkan kecenderungan untuk menggunakan kultur sel dibanding hewan uji. Pertimbangan tersebut antara
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
lain, tes in vitro lebih murah dibanding in vivo, ada perbedaan proses fisiologis antara hewan percobaan dan manusia, dan adanya pertimbangan moral di dalam
penggunaan hewan sebagai objek penelitian Freshney, 1986. Uji MTT 3-4,5-dimetil-tiazol-2-il-2,5-dipheniltetrazolium bromide
didasarkan pada aktivitas mitokondria, yang diinterpretasikan sebagai tolok ukur kelangsungan hidup sel. Pada uji MTT, garam tetrazolium, 3-4,5-dimetil-tiazol-
2-il-2,5-dipheniltetrazolium bromide secara aktif akan diabsorpsi ke dalam sel hidup dan direduksi dalam mitokondria sel membentuk suatu produk formazan
berwarna ungu. Produk tersebut terakumulasi di dalam sel karena tidak bisa keluar menembus membran sel. Dengan penambahan DMSO, isopropanil, atau solven
lain yang cocok, produk formazan ungu yang terbentuk tadi baru dapat larut atau dibebaskan dan siap diukur dengan metode kolorimetri Barile, 1997.
N N
+
N N
S N
Br
-
MTT 3-4,5-dimethyl-thiazol-2-yl-2,5- diphenyltetrazolium bromide
HN N
N N
S N
Formazan 2E,4Z-4,5-dimethylthiazol-2-yl-3,5- diphenylformazan
NADH NAD
Gambar 1. Reaksi reduksi MTT menjadi formazan
Kematian sel merupakan respon uji sitotoksisitas maka konsentrasi yang menimbulkan kematian pada 50 populasi pada sel dalam waktu yang spesifik
dan kondisi percobaan yang sesuai diistilahkan dengan median lethal
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
concentration atau LC
50
Cassaret and Doull, 2001. Semakin kecil harga LC
50
suatu senyawa berarti senyawa tersebut semakin besar sitotoksisitasnya.
F. Landasan Teori
Penyakit kanker merupakan penyakit yang telah menjadi ancaman di seluruh dunia, sementara obat spesifik untuk menghentikan perkembangan sel
kanker belum juga ditemukan. Tetapi upaya pencegahan terus diusahakan dengan terapi alternatif obat antikanker yang berasal dari tanaman.
Tanaman mimba merupakan salah satu tanaman yang diyakini mempunyai khasiat untuk mengobati kanker. Fraksi protein daun mimba ternyata dapat
memberikan efek sitotoksik terhadap beberapa tipe sel kanker termasuk sel HeLa. Sel HeLa dapat hidup dan berkembang sangat baik dalam kultur buatan di
laboratorium, diakui aman untuk digunakan dalam kultur sel, dan mampu memberikan respon yang cukup baik terhadap aktivitas dari senyawa-senyawa
yang diujikan. Beberapa penelitian tentang sitotoksisitas fraksi protein daun mimba
terhadap sel HeLa sebagai subyek uji telah banyak dilakukan. Dari penelitian Suwanto 2006 diketahui bahwa fraksi protein hasil pengendapan amonium sulfat
30 dan 60 memiliki nilai LC
50
yang berpotensi untuk dikembangkan sebagai senyawa antikanker. Diduga bahwa protein yang berperan sebagai antikanker
berada terutama antara kedua fraksi protein tersebut sehingga dimungkinkan untuk memfraksinasi protein kedalam konsentrasi yang lebih kecil lagi dengan
cara pengendapan menggunakan amonium sulfat dengan tingkat kejenuhan 10
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
FP
10
, 20FP
20
, 30 FP
30
dan 40 FP
40
. Dengan demikian, diharapkan dapat diketahui pada fraksi mana protein yang memiliki potensi sebagai
antikanker tersebut paling banyak terendapkan dan kespesifikan protein yang bersifat antikanker. Namun, fraksi protein daun mimba belum pernah dicobakan
pada sel normal sel Vero. Jika ternyata tidak menimbulkan kerusakan pada sel normal sel Vero, fraksi protein daun mimba dapat diajukan sebagai alternatif
obat antikanker baru. Hal-hal tersebutlah yang mendasari dilakukan penelitian fraksinasi protein daun mimba menjadi lebih kecil lagi untuk dilihat keberadaan
protein yang berpotensi untuk dikembangkan menjadi senyawa antikanker.
G. Hipotesis
