Penentuan kondisi optimum pertumbuhan bakteri Pseudomonas Produksi enzim lipase Isolasi enzim Lipase

Ekstrak kasar enzim yang diperoleh diendapkan dengan garam ammonium sulfat pada berbagai derajat kejenuhan yaitu 0-20 ; 20-40; 40- 60; 60-80; dan 80-100. Skema proses pengendapan ditunjukkan pada Gambar 8. Sejumlah ekstrak kasar enzim yang diperoleh ditambahkan garam ammonium sulfat secara perlahan sambil diaduk dengan magnetic stirer pada suhu 4°C. Endapan protein enzim yang didapatkan pada tiap fraksi kejenuhan ammonium sulfat dipisahkan dari filtratnya dengan sentrifugasi dingin pada kecepatan 5000 rpm selama 30 menit. Kemudian diuji aktivitasnya dengan metode Titrimetri, serta diukur kadar proteinnya dengan metode Lowry. Gambar 8. Skema proses pengendapan protein enzim dengan pengendapan ammonium sulfat + NH 4 2 SO 4 0-20 + NH 4 2 SO 4 20-40 Ekstrak Kasar Enzim EndapanF1 Filtrat EndapanF2 Filtrat EndapanF3 Filtrat + NH 4 2 SO 4 40-60 EndapanF4 Filtrat + NH 4 2 SO 4 60-80 + NH 4 2 SO 4 80-100 EndapanF5 Filtrat b. Dialisis Endapan enzim yang telah dilarutkan dari tiap fraksi ammonium sulfat dengan aktivitas spesifik yang tinggi dimasukkan ke dalam kantong selofan dan didialisis dengan bufer fosfat 0,05 M pH 7 selama ±24 jam pada suhu dingin. Selama dialisis, dilakukan pergantian larutan bufer selama 4-6 jam agar konsentrasi ion-ion di dalam kantong dialisis dapat dikurangi. Proses ini dilakukan secara kontinu sampai ion-ion di dalam kantong dialisis dapat diabaikan. Untuk mengetahui bahwa sudah tidak ada lagi ion-ion garam dalam kantong, maka diuji dengan menambahkan larutan BaOH 2 atau BaCl 2 . Bila masih ada ion sulfat dalam kantong, maka akan terbentuk endapan putih BaSO 4 . Semakin banyak endapan yang terbentuk, maka semakin banyak ion sulfat yang ada dalam kantong. Selanjutnya dilakukan uji aktivitas dengan metode Titrimetri serta diukur kadar proteinnya dengan metode Lowry.

8. Amobilisasi enzim lipase menggunakan bentonit.

a. Preparasi matriks bentonit Serbuk bentonit diayak dengan ayakan 120 mesh. Sebanyak 40 gram serbuk bentonit dikocok dengan 160 ml HCl 2 M kemudian di centrifuge 150 rpm selama 4 jam. Campuran di saring dengan kertas saring whatman dan endapan dicuci dengan aquades sampai pH 7 lalu dikeringkan dalam oven 105ºC sampai beratnya konstan Adel dan Haerudin, 2003.