Yogyakarta, 24 November 2007
E ‐ 3
sebagai antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang terdapat pada teh, buah-buahan, sayuran, anggur, bir dan kecap Sofia, 2006.
Kekurangan salah satu komponen tersebut akan menyebabkan terjadinya penurunan status antioksidan secara menyeluruh dan berakibat perlindungan tubuh terhadap serangan radikal bebas
melemah, sehingga terjadilah berbagai macam penyakit. Pemeriksaan status antioksidan tubuh sekarang menjadi suatu piranti diagnostik yang penting. Pemeriksaan ini dapat dilakukan melalui
pengukuran yaitu Status Antioksidan total, Superoksida Dismutase dan Glutation Peroksidase sekaligus untuk memeriksa status selenium Wijaya, 1997.
3. METODE PENELITIAN 3.1 Bahan
Bahan sampel yang digunakan adalah belimbing wuluh yang diambil dari daerah Tawangmangu, Kabupaten Karanganyar, Jawa Tengah. Bahan penyari dan fraksinasi adalah:
metanol, eter, aqua destilata. Bahan kimia lainnya DPPH dan rutin. Bahan kimia yang digunakan adalah berderajad kualitas Pro Analisis.
3.2 Alat
Alat penyarian dan fraksinasi adalah alat soxletasi hot plate, alat soxhlet, batu didih, corong pisah, rotavapor, alat gelas. Spektrofotometer UV-Vis, timbangan analitis, labu ukur 25ml; 50ml;
100ml. Alat lain yang digunakan adalah Moisture Balance, oven, botol coklat, stopwatch, timbangan milligram, timbangan analitik, beaker glass, pipet volume, pipet ukur.
3.3 Jalannya Penelitian Persiapan Bahan
Belimbing wuluh dipanen dicuci dengan air untuk menghilangkan kotoran dan cemaran, dikeringkan dengan oven pada suhu 40° C sampai kering dan dibuat serbuk yang diayak dengan
ayakan nomor 100 dan serbuk yang didapatkan digunakan untuk penelitian.
Pembuatan fraksi eter dan air ekstrak metanolik daun belimbing wuluh
Serbuk belimbing wuluh ditimbang sebanyak 50 gram dimasukkan dalam kantong dari kertas saring dan diikat dengan tali lalu dimasukkan dalam labu alas bulat ditambahkan pelarut petroleum
eter sebanyak 300 ml menggunakan metode soxhletasi. Ampas yang dihasilkan diangin-anginkan sampai kering dan tidak berbau petroleum eter, kemudian disari lagi dengan pelarut metanol
sebanyak 350 ml menggunakan metode soxhletasi diatur pada suhu 65° C. Soxhletasi dihentikan sampai diperoleh larutan penyari yang jernih. Ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan vacum
evaporator dengan suhu 60
C hingga pekat, selanjutnya disebut ekstrak metanolik. Ekstrak metanolik yang diperoleh disuspensi dengan 100 ml air dan dipartisi dengan 100 ml eter sebanyak
tiga kali menggunakan corong pisah. Lapisan eter dipisahkan dan dipekatkan diperoleh fraksi eter kemudian dilarutkan dengan metanol. Dibuat berbagai konsentrasi. Fraksi air dipekatkan dan
dilarutkan dengan metanol. Fraksi air dibuat berbagai konsentrasi.
Pengukuran absorbansi peredaman radikal bebas DPPH
Larutan uji dengan berbagai konsentrasi 10 ppm, 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm, 160 ppm sebanyak 4 ml ditambahkan 1 ml larutan pereaksi DPPH dimasukkan dalam vial dikocok.
Didiamkan pada suhu kamar selama 30 menit, kemudian dibaca serapan aktivitasnya pada panjang gelombang maksimum. Blangko yang digunakan metanol dan rutin sebagai kontrol positif.
Yogyakarta, 24 November 2007
E ‐ 4
Analisa data
Data aktivitas antioksidan penangkap radikal DPPH fraksi eter, air dan rutin dianalisis dan dihitung dengan nilai IC50 melalui analisis probit. Hasil nilai IC
50
dilakukan uji statistik yaitu uji Anava satu jalan.
4. HASIL Dan DISKUSI Pembuatan fraksi eter dan air ekstrak
