3.6.2 Fraksinasi Ekstrak metanol dengan pelarut n-heksan, kloroform dan etil asetat
Ekstrak metanol sebanyak 50,00 g kental ditambahkan air sebanyak 100 ml, diekstraksi dengan 25 ml n-heksan, dikocok, pisahkan lapisan n-heksan.
Lakukan tiga kali. Kumpulkan ekstrak n-heksan, diuapkan sampai n-heksan habis. Residu diekstraksi kembali dengan 25 ml kloroform, dikocok, dipisahkan lapisan
kloroform, dilakukan tiga kali. Kemudian ekstrak kloroform diuapkan. Selanjutnya residu diekstraksi kembali dengan 25 ml etil asetat, dikocok,
dipisahkan lapisan etil asetat, dilakukan tiga kali pengulangan. Ekstrak etil asetat dikumpulkan, kemudian diuapkan.
3.7 Pemeriksaan Mikrobiologi 3.7.1 Sterilisasi Alat
Alat-alat dan bahan-bahan untuk pemeriksaan mikrobiologi harus disterilkan lebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat yang mempunyai presisi
disterilkan di autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit dan alat-alat jenis lainnya disterilkan di oven pada suhu 170
o
3.7.2 Pembuatan media
C selama 1 jam, jarum ose dibakar dengan lampu bunsen, alat-alat plastik direbus dalam air mendidih.
Media Nutrient Agar NA
Komposisi: Bacto-beef extrak 3 g
Bacto-peptone 5 g
Bacto-agar 15 g
Cara pembuatan: Ditimbang serbuk NA sebanyak 23 g, kemudian dilarutkan dalam akuades
sebanyak 1 liter. Dipanaskan di penangas air sampai semua bahan larut sempurna.
Universitas Sumatera Utara
Bahan dalam keadaan panas dituangkan ke dalam tabung reaksi kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
o
Media Potato Dextrose Agar PDA Ditjen POM, 1982
C selama 15 menit.
Komposisi: Potato extract 4 g
Dekstrose 20 g
Agar 15 g
Air suling 1 L
Cara pembuatan: Ditimbang sebanyak 39 gram serbuk PDA ke dalam air suling hingga
volume keseluruhan menjadi 1 liter lalu dididihkan hingga larut. Sterilkan pada suhu 121
o
3.7.3 Larutan NaCl 0,9
C selama 15 menit. Aduk dengan baik sebelum dituang.
Komposiis: NaCl 9 g
Akuades sampai 1000 ml
Cara Pembuatan: Ditimbang sebanyak 9 g natrium klorida dimasukkan ke dalam erlenmeyer
dilarutkan dengan akuades hingga 1000 ml, kocok sampai larut. Kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
o
3.7.4 Pembuatan Stok Kultur
C selama 15 menit.
Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 sebanyak satu koloni diambil dengan menggunakan jarum ose steril, lalu ditanam dalam media agar miring
dengan cara menggores. Kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 36±1
o
C selama 18-24 jam. Hal yang sama dilakukan pada bakteri Streptococcus pyogenes ATCC 24543, dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619.
Universitas Sumatera Utara
Jamur Trichophyton sebanyak satu koloni diambil dengan menggunakan jarum ose steril, lalu ditanam pada media Potato Dekstrose Agar PDA miring
dengan cara menggores. Kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 20-25
o
3.7.5 Penyiapan Inokulum Bakteri
C selama 48 jam. Hal yang sama dilakukan pada jamur Micosporum.
Bakteri Staphylococcus aureus dari stok kultur diambil dengan jarum ose steril, kemudian disuspensikan dalam tabung yang berisi 10 ml NaCl 0,9 .
diinkubasi pada temperatur 37
o
3.7.6 Penyiapan Inokulum Jamur
Kategori