larutan 0,2 molar asam sitrat tersebut dengan menggunakan strirer selama 15 menit.
24
Buffer yang akan dibuat harus memiliki pH 7 yang terdiri dari Na2HPO4 0,2 N sebanyak 218 ml dan Asam Sitrat 0,1 N sebanyak 32,5
ml. Setelah Na2HPO4 dengan Asam Sitrat tercampur, tambahkan Aquades ke dalam gelas ukur hinga volume larutan menjadi 500 ml. Kemudian
lakukan homogenisasi larutan dengan menggunakan strirer selama 15 menit.
24
3.6.4 Pembuatan Larutan Siprofloksasin Standart
Sebanyak 50 mg bubuk siprofloksasin dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Masukkan HCl 0,1 N sebanyak 1 ml ke dalam tabung
tersebut. Kemudian lakukan homogenisasi menggunakan vortex. Tambahkan buffer fosfat citrat sebanyak 7 ml ke dalam tabung. Setelah itu
lakukan homogenisasi ulang dengan menggunakan vortex. Tahap terakhir adalah melakukan sentrifugasi selama 3 menit dengan kecepatan 2000 rpm
dengan menggunakan mesin sentrifuge.
23
3.6.5 Pembuatan Larutan Siprofloksasin Sampel
Sebanyak 110 siprofloksasin yang telah ditumbuk menjadi bubuk halus dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Masukkan HCl 0,1 N sebanyak
1 ml ke dalam tabung tersebut. Kemudian dihomogenisasikan dengan menggunakan vortex selama 30 detik. Tambahkan buffer fosfat citrat
sebanyak 7 ml ke dalam tabung. Lakukan homogenisasi untuk kedua kalinya dengan menggunakan vortex selama 30 detik. Setelah itu, lakukan
sentrifugasi selama 3 menit dengan kecepatan 2000 rpm. Sebanyak 3,5 ml supernatan dimasukkan ke dalam kuvet dengan menggunakan mikropipet
untuk diukur dengan spektrofotometri.
23
3.6.6 Penyiapan Alat Spektrofotometer UV-Visible
Secara singkat, penggunaan spektrofotometri Uv-visible adalah sebagai berilkut, mesin spktrofotometer memerlukan waktu 30 menit
setelah dinyalakan sebelum digunakan untuk merekam panjang gelombang larutan. Setelah 30 menit mesin menyala lakukan pengukuran panjang
gelombang untuk blanko yaitu buffer yang sudah disiapkan dengan cara lakukan penetapan base line dengan selalu meng-nol-kan serapan.
Penetapan base-line dilakukan menggunakan blanko, dalam hal ini adalah buffer fosfat citrat dengan pH 7.
3.6.7 Pembacaan Gelombang Serapan Maksimum Siprofloksasin Standar
Ambil salah satu kuvet, isi kuvet dengan larutan siprofloksasin standar sebanyak 3,5 ml. Masukkan ke dalam mesin spektrofotometer.
Lalu lakukan pembacaan panjang gelombang dengan spektrofotometer. lihat panjang gelombang serapan maksimumnya.
3.6.8 Pencarian Gelombang Serapan Maksimum Siprofloksasin Sampel
