Analisis senyawa flavonoida dari ekstrak etanol dan hasil fraksinasi Pemisahan senyawa flavonoida dari fraksi etilasetat secara KKt

3.9 Analisis senyawa flavonoida dari ekstrak etanol dan hasil fraksinasi

secara KKt Ekstrak etanol dan hasil fraksinasi dilakukan KKt menggunakan 5 sistem fase gerak yaitu BAA, asam asetat 15, asam asetat 50, Forestal, asam klorida 1, sebagai fase diam adalah kertas Whatmann No.1 yang berukuran 3 x 20 cm. Cara kerja: Ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi kloroform, fraksi etilasetat dan fraksi air masing-masing ditotolkan pada kertas Whatmann dari tepi bawah, kemudian kertas tersebut dimasukkan ke dalam bejana kromatografi yang berisi fase gerak yang telah dijenuhkan, lalu dielusi sampai garis tanda. Kertas diangkat dan dikeringkan, lalu disemprot dengan penampak bercak aluminium klorida 5 bv dan diamati di bawah sinar lampu UV 366 nm. Gambar kromatogram hasil KKt ekstrak etanol dapat dilihat pada lampiran 12 halaman 59. Gambar kromatogram hasil KKt fraksi n-heksan, fraksi kloroform, fraksi etilasetat dan fraksi air dapat dilihat pada lampiran 13-17 halaman 60-64.

3.10 Pemisahan senyawa flavonoida dari fraksi etilasetat secara KKt

preparatif Fraksi etilasetat dilakukan pemisahan secara KKt preparatif sebagai fase gerak asam asetat 15 dan fase diam kertas Whatmann No.3 yang berukuran 15 x 15 cm. Cara kerja : Fraksi etilasetat yang telah diencerkan ditotolkan pada kertas berupa pita, kemudian dimasukkan ke dalam bejana kromatografi berisi fase gerak yang telah dijenuhkan. Lalu dielusi sampai garis tanda, kertas diangkat dan dikeringkan, diamati di bawah sinar lampu UV 366 nm. Bagian tengah kertas ditutup dengan kaca yang bersih sedangkan pada sisi kanan dan kiri kertas disemprot dengan penampak bercak aluminium klorida 5 bv dan dikeringkan, lalu diamati di bawah sinar lampu UV 366 nm, kemudian bercak diberi tanda dan digunting menjadi potongan-potongan kecil, direndam dalam metanol selama 24 jam dan sekali-kali dikocok lalu disaring. Proses perendaman dan pelarutan diulangi hingga 3 kali sampai semua senyawa flavonoida tersari sempurna, selanjutnya filtrat dikumpulkan dan diuapkan hingga diperoleh isolat kental. Gambar kromatogram hasil KKt preparatif fraksi etilasetat dapat dilihat pada lampiran 18 halaman 65.

3.11 Uji kemurnian isolat