Alat dan Bahan METODOLOGI PENELITIAN

d. Media yang sudah mengalami kekeruhan, diambil sebanyak 3 ml dan ditumbuhkan pada MRS Broth 100 ml di dalam labu erlenmeyer e. Media yang berisi inokulum diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam hingga media menjadi keruh seperti sebelumnya f. Media yang sudah keruh diambil sebanyak 5 ml menggunakan pipet volume, lalu dimasukkan ke dalam tube centrifuge sebanyak 15 tabung g. Tabung yang berisi media disentrifugasi menggunakan centrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit h. Supernatan dibuang dan pelet yang mengendap di dasar tabung digunakan sebagai starter pada pembuatan tempoyak Yuliana, 2007. Tahap-tahap pembuatan starter dapat dilihat pada gambar berikut Gambar 3.2 : Gambar 3.2 Proses pembuatan starter A. Hasil inkubasi L. casei selama 48 jam B. Hasil inkubasi L. casei selama 24 jam C. Starter sebelum disentrifugasi D. Persiapan sentrifuse A D C B PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 3. Validasi Starter Untuk melihat validasi dari starter maka dilakukan pengecatan gram pada starter yang akan ditambahkan pada fermentasi tempoyak. a. Kaca benda dibersihkan terlebih dahulu menggunakan alkohol dan dikeringanginkan b. Jarum ose disterilkan dengan dipijarkan pada lampu bunsen, lalu starter diambil menggunakan jarum ose secara aseptis Gambar 3.2 A c. Starter diletakkan di atas kaca benda Gambar 3.2 B dan fiksasi dengan cara dilewatkan di atas bunsen, kemudian dilakukan pengecatan gram d. Kristal violet diteteskan di atas objek yang telah difiksasi Gambar 3.2 C dan diamkan selama 60 detik, lalu dicuci dengan akuades steril e. Larutan iodin diteteskan pada objek dan diamkan selama 60 detik, lalu dicuci dengan akuades steril f. Dilakukan dekolorisasi menggunakan alkohol selama 30 detik, lalu dicuci dengan akuades g. Larutan safranin diteteskan pada objek dan diamkan selama 60 detik, lalu dicuci dengan akuades steril h. Starter diamati di bawah mikroskop Gambar 3.2 D. Untuk memperjelas pengamatan, minyak emersi diteteskan pada objek, lalu diamati pada mikroskop dengan perbesaran 1000x. Gambar 3.3 Proses pengecatan gram pada starter sebelum di sentrifuse A. Pengambilan starter menggunakan jarum ose B. Proses meletakkan starter pada kaca benda C. Pemberian larutan pewarna pada starter D. Proses pengamatan menggunakan mikroskop 4. Pembuatan Tempoyak a. Kulit durian dibersihkan terlebih dahulu menggunakan sikat, lalu disemprot menggunakan alkohol kemudian dicuci menggunakan akuades steril. Hal ini untuk mendapatkan buah durian yang steril b. Buah durian dibuka Gambar 3.4 A lalu daging durian dipisahkan dari bijinya c. Daging durian ditimbang sebanyak 50 gram untuk masing-masing perlakuan lalu dimasukkan ke dalam wadah yang sudah steril d. Daging durian diicampurkan dengan garam NaCl sebanyak 3 secara merata dalam wadah C D A B