protein dengan metode mikro- Kjeldahl pada dasarnya dapat dibagi menjadi tiga tahapan, yaitu proses destruksi, proses destilasi, dan tahap titrasi.
a. Proses Destruksi
Pada tahap ini, sampel dipanaskan dalm asam sulfat pekat sehingga terjadi penguraian sampel menjadi unsur-unsurnya, yaitu unsur-unsur C, H, O, N, S, dan
P. Unsur N dalam protein ini dipakai untuk menentukan kandungan protein dalam suatu bahan. Sebanyak 100 mg sampel kedelai, tepung terigu, atau bahan lain
ditambahkan dengan katalisator N sebanyak 0,5 - 1 g. Katalisator berfungsi untuk mempercepat proses destruksi dengan
menaikkan titik didih asam sulfat saat penambahan H
2
SO
4
pekat, serta mempercepat kenaikkan suhu asam sulfat, sehingga destruksi berjalan lebih cepat.
Katalisator N terdiri dari campuran K
2
SO
4
dan HgO dengan perbandingan 20 : 1. Proses destruksi dapat dikatakan selesai apabila larutan berwarna jernih.
Larutan yang jernih menunjukkan bahwa semua partikel bahan padat telah terdestruksi menjadi bentuk partikel yang larut tanpa ada partikel padat yang
tersisa. Larutan jernih yang telah mengandung senyawa NH
4 2
SO
4
ini kemudian didinginkan supaya suhu sampel sama dengan suhu ruang, sehingga penambahan
perlakuan lain pada proses berikutnya dapat memperoleh hasil yang diinginkan, karena reaksi yang sebelumnya telah usai.
b. Proses Destilasi
Larutan sampel jernih yang telah dingin kemudian ditambahkan dengan aquadest untuk melarutkan sampel hasil destruksi agar hasil destruksi dapat didestilasi
Universitas Sumatera Utara
dengan sempurna, serta untuk lebih memudahkan proses analisis karena hasil destruksi melekat pada tabung reaksi besar. Prinsip destilasi adalah memisahkan
cairan atau larutan berdasarkan perbedaan titik didih. Pada tahap destilasi, Ammonium sulfat dipecah menjadi Ammonia NH
3
dengan penambahan NaOH sampai alkali dan dipanaskan dengan pemanas. Ammonia yang dibebaskan selanjutnya akan ditangkap oleh larutan asam standar.
Asam standar yang dipakai dalam percobaan ini adalah asam borat 4 dalam jumlah yang berlebih. Indikator BCG-MR digunakan untuk mengetahui asam
dalam keadaan berlebih. Asam borat H
3
BO
3
berfungsi sebagai penangkap destilat NH
3
yang berupa gas yang bersifat basa. Supaya Ammonia dapat ditangkap secara
maksimal, maka sebaiknya ujung alat destilasi ini tercelup semua ke dalam larutan asam standar, sehingga dapat ditentukan jumlah protein yang sesuai dengan kadar
protein yang terkandung dalam bahan. Selama proses destilasi, lama-kelamaan larutan asam borat akan berubah warna menjadi biru. Hal ini disebabkan karena
larutan menangkap adanya Ammonia dalam bahan yang bersifat basa, sehingga mengubah warna merah muda menjadi biru.
Reaksi destilasi akan berakhir bila Ammonia yang telah terdestilasi tidak bereaksi lagi. Setelah destilasi selesai, larutan sampel berwarna keruh dan terdapat
endapan di dasar tabung endapan HgO, sedangkan larutan asam dalam Erlenmeyer akan berwarna biru karena berada dalam suasana basa akibat
menangkap Ammonia.
Universitas Sumatera Utara
c. Tahap Titrasi
