Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol Batang dan Daun Evodia (Euodia ridleyi Horch.) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans, Shigella dysenteriae dan Candida albicans Secara In Vitro

Lampiran 1. Ekstraksi Etanol Batang dan Daun Evodia dengan Metode Maserasi

dicuci

dikeringanginkan dihaluskan

ditimbang

dimasukkan ke dalam botol

dimaserasi selama ± 3 hari dengan pelarut etanol dan diaduk

disaring diulangi 3 kali

dirotarievaporator pada suhu didih etanol

dibuat konsentrasi 5 %,10%, 20% , 40% dan 0% sebagai kontrol

dilarutkan dalam DMSO

dipipet sebanyak 10 μl

diteteskan pada permukaan cakram kosong dibiarkan ±1 jam hingga larutan ekstrak berdifusi ke dalam cakram

Sampel tumbuhan

Serbuk

Maserat

Filtrat _Residu

Ekstrak kental

Larutan ekstrak

Cakram yang mengandung ekstrak

Lampiran 2. Peremajaan Biakan Murni dan Penyiapan Mikroba Uji

disubkultur dengan menggunakan media miring

dinkubasi pada suhu 37º C selama 24-72 jam

disuspensikan dalam larutan NaCl 0,9% steril sehingga diperoleh kekeruhan standart Mc. Farland dilakukan pengenceran 10-2 sehingga diperoleh suspensi 106 CFU/ml

Suspensi C. albicans Isolat S. mutans,

Lampiran 3. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Batang dan Daun Evodia (Euodia ridleyi Horch.) terhadap Pertumbuhan S. mutans,

S. dysenteriae dan C. albicans

dituang ke dalam cawan steril dibiarkan memadat

diusapkan suspensi biakan dengan

cotton bud

diletakkan cakram yang mengandung ekstrak tumbuhan uji

diletakkan cakram pembanding diinkubasi selama 24-72 jam

diamati dan diukur zona bening di sekitar cakram

Media MHA

Media Uji

Lampiran 4. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans Hari I

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat (mm)

Total (mm) Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

S. mutans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 8,70 15,38 12,05 36,13 12,04 10 11,03 13,03 14,20 38,25 12,75 20 10,24 15,53 15,58 41,34 13,78 40 11,21 14,03 18,53 43,76 14,59

S. dysnteriae 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 5 10,70 9,03 9,71 29,44 9,81 10 16,20 11,20 12,05 39,45 13,15 20 16,53 14,03 15,03 45,58 15,19 40 20,03 15,21 17,03 52,27 17,42

C. albicans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 10 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 20 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 40 6,00 6,00 10,53 22,53 7,51 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari II

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat (mm)

Total (mm) Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

S. mutans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 6,60 12,20 9,53 28,33 9,44 10 9,03 10,53 11,60 31,15 10,38 20 8,03 14,03 13,03 35,08 11,69 40 9,53 11,63 13,53 34,68 11,56

S. dysnteriae 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 5 10,03 9,03 9,03 28,09 9,36 10 14,03 10,03 11,53 35,58 11,86 20 13,19 13,53 15,70 42,41 14,14 40 15,53 13,53 13,71 42,76 14,25

C. albicans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 7,03 6,00 7,03 20,05 6,68 10 7,03 7,53 7,03 21,58 7,19 20 8,53 7,53 6,00 22,05 7,35 40 10,03 10,65 8,03 28,70 9,57 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 5. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans Hari III

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat (mm)

Total (mm) Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

S. mutans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 6,03 10,69 9,03 25,74 8,58 10 8,53 10,03 9,53 28,08 9,36 20 7,03 13,03 12,03 32,08 10,69 40 8,03 10,53 11,65 30,20 10,07

S. dysnteriae 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 5 10,53 9,03 7,03 26,58 8,86 10 14,03 8,03 7,53 29,58 9,86 20 12,53 11,03 11,03 34,58 11,53 40 16,03 12,14 9,53 37,69 12,56

C. albicans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 7,03 6,00 6,00 19,03 6,34 10 7,03 6,03 6,00 19,05 6,35 20 7,71 7,03 8,03 22,76 7,59 40 8,08 6,03 6,00 20,10 6,70 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 6. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Daun Evodia

terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans Hari I

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat (mm)

Total (mm) Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

S. mutans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 13,65 12,03 7,70 33,38 11,13 10 18,03 13,08 10,03 41,13 13,71 20 18,53 14,11 18,56 51,20 17,07 40 21,03 14,05 20,24 55,31 18,44

S. dysnteriae 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 5 9,03 10,08 9,53 28,63 9,54 10 9,03 12,16 12,59 33,78 11,26 20 13,09 13,03 13,18 39,29 13,10 40 11,60 15,03 17,35 43,98 14,66

C. albicans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 7,03 7,60 6,03 20,65 6,88 10 8,53 7,60 7,03 23,15 7,72 20 6,00 8,53 8,03 22,55 7,52 40 6,00 9,03 10,03 25,05 8,35 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari II

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat (mm)

Total (mm) Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

S. mutans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 14,08 10,03 6,66 30,76 10,25 10 13,53 9,40 8,53 31,45 10,48 20 13,08 11,03 15,59 39,69 13,23 40 18,03 9,53 17,53 45,08 15,03

S. dysnteriae 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 5 9,03 10,03 9,15 28,20 9,40 10 7,03 12,20 12,25 31,48 10,49 20 13,03 10,13 11,53 34,68 11,56 40 9,09 15,08 14,24 38,40 12,80

C. albicans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 6,53 7,03 6,03 19,58 6,53 10 7,10 7,08 7,39 21,56 7,19 20 8,03 6,09 8,03 22,14 7,38 40 9,15 6,03 6,70 21,88 7,29 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 7. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Daun Evodia

terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans Hari III

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat (mm)

Total (mm) Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

S. mutans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 10,03 9,20 6,03 25,25 8,42 10 13,03 8,03 8,03 29,08 9,69 20 11,53 10,03 14,03 35,58 11,86 40 15,03 9,53 14,53 39,08 13,03

S. dysnteriae 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 9,03 9,53 9,08 27,63 9,21

10 7,03 12,03 10,53 29,58 9,86 20 12,60 10,54 11,03 34,16 11,39 40 10,03 14,03 12,53 36,58 12,19

C. albicans 0 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

5 6,03 7,03 6,03 19,08 6,36 10 7,03 7,03 6,03 20,08 6,69 20 7,03 6,03 7,03 20,08 6,69 40 8,13 6,03 6,10 20,25 6,75 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 8. Pengamatan Zona Hambat (mm) Kontrol Positif Kloramfenikol (30 µg), Nistatin (20,6 µg) dan Kontrol Negatif (DMSO)

terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans Hari I, II dan III Mikroba uji

Senyawa / Diameter Zona Hambat (mm)

Hari I Hari II Hari III Kloramfenikol

(30 µg) DMSO

Kloramfenikol

(30 µg) DMSO

Kloramfenikol

(30 µg) DMSO

S. mutans 25,05 6,00 23,89 6,00 22,89 6,00

S. dysenteriae 27,86 6,00 26,86 6,00 25,03 6,00 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Mikroba uji Senyawa / Diameter Zona Hambat (mm)

Hari I Hari II Hari III Nistatin

(20,6 µg) DMSO

Nistatin

(20,6 µg) DMSO

Nistatin

(20,6 µg) DMSO

C. albicans 6,34 6,00 6,34 6,00 6,34 6,00 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 9. Pengamatan Zona Hambat Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang Evodia dan Daun Evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari I

Sampel Tumbuhan

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat

(mm) Total (mm)

Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

Batang Evodia

S. mutans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 7,03 8,03 6,00 21,06 7,02 3 7,59 8,09 9,03 24,71 8,24 4 8,59 8,11 9,53 26,23 8,74

S. dysenteriae 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 11,03 6,00 9,03 26,06 8,69 3 6,00 6,00 7,18 19,18 6,39 4 6,00 6,00 10,03 22,03 7,34

C. albicans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 8,03 6,00 6,51 20,54 6,85

Daun Evodia

S. mutans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 9,53 7,65 23,18 7,73 3 6,00 10,03 10,03 26,06 8,69 4 8,03 9,53 11,53 29,09 9,70

S. dysenteriae 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

C. albicans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 9,53 6,00 21,53 7,18 4 7,53 9,53 6,00 23,06 7,69 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 10. Pengamatan Zona Hambat Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang Evodia dan Daun Evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari II

Sampel Tumbuhan

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat

(mm) Total (mm)

Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

Batang Evodia

S. mutans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,51 7,03 6,00 19,54 6,51 3 8,08 7,56 7,53 23,17 7,72 4 8,53 7,58 8,03 24,14 8,05

S. dysenteriae 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 10,03 6,00 8,53 24,56 8,19 3 6,00 6,00 7,01 19,01 6,34 4 6,00 6,00 9,03 21,03 7,01

C. albicans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 6,00 6,00 6,05 18,05 6,02

Daun Evodia

S. mutans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 7,16 6,00 7,14 20,30 6,77

S. dysenteriae 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

C. albicans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 7,67 6,00 19,67 6,56 4 6,00 9,04 6,00 21,04 7,01 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 11. Pengamatan Zona Hambat Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang Evodia dan Daun Evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari III

Sampel Tumbuhan

Perlakuan Ulangan diameter zona hambat

(mm) Total (mm)

Rata-rata (mm) Mikroba uji Konsentrasi

Ekstrak (%)

1 2 3

Batang Evodia

S. mutans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,16 6,53 6,00 18,69 6,23 3 7,03 7,03 6,09 20,15 6,72 4 7,53 7,03 7,03 21,59 7,20

S. dysenteriae 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 9,03 6,00 7,53 22,56 7,52 3 6,00 6,00 6,55 18,55 6,18 4 6,00 6,00 8,53 20,53 6,84

C. albicans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 6,00 6,00 6,01 18,01 6,00

Daun Evodia

S. mutans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 7,03 6,00 6,16 19,19 6,40

S. dysenteriae 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 4 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00

C. albicans 1 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 2 6,00 6,00 6,00 18,00 6,00 3 6,00 7,15 6,00 19,15 6,38 4 6,00 8,53 6,00 20,53 6,84 Keterangan: Diameter zona hambat sebesar 6 mm sama dengan diameter cakram sehingga dinyatakan tidak memiliki daya hambat pertumbuhan.

Lampiran 12. Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans

Perlakuan Rata-Rata Zona Hambat (mm) Mikroba Uji Kontrol + /

Konsentrasi Ekstrak Hari 1 Hari 2 Hari 3

S. mutans

Kloramfenikol 25,05 a 23,89 a 22,89 a

0 % 6,00 b 6,00 b 6,00 b

5 % 12,04 c 9,44 c 8,58 c

10 % 12,75 c 10,38 c 9,36 c

20 % 13,78 c 11,69 c 10,69 c

40 % 14,59 c 11,56 c 10,07 c

Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan

S. dysenteriae

Perlakuan Rata-Rata Zona Hambat (mm) Mikroba Uji Kontrol +/

Konsentrasi Ekstrak Hari 1 Hari 2 Hari 3

S. dysenteriae

Kloramfenikol 27,86 a 26,86 a 25,03 a

0 % 6,00 b 6,00 b 6,00 b

5 % 9,81 c 9,36 c 8,86 c

10 % 13,15 d 11,86 d 9,86 cd

20 % 15,19 de 14,14 de 11,53 d

40 % 17,42 e 14,25 e 12,56 de

Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan

C. albicans

Perlakuan Rata-Rata Zona Hambat (mm) Mikroba Uji Kontrol +/

Konsentrasi Hari 1 Hari 2 Hari 3

C. albicans

Nistatin 6,34 a 6,34 a 6,34 a

0 % 6,00 a 6,00 a 6,00 a

5 % 6,00 a 6,68 a 6,34 a

10 % 6,00 a 7,19 ab 6,35 a

20 % 6,00 a 7,35 a 7,59 b

Lampiran 13. Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans

Perlakuan Rata-Rata Zona Hambat (mm) Mikroba Uji Kontrol +/

Konsentrasi Ekstrak Hari 1 Hari 2 Hari 3

S. mutans Kloramfenikol 25,05 a 23,89 a 22,89 a

0 % 6,00 b 6,00 b 6,00 b

5 % 11,13 c 10,25 c 8,42 c

10 % 13,71 cd 10,48 c 9,69 cd

20 % 17,07 d 13,23 c 11,86 d

40 % 18,44 d 15,03 c 13,03 de

Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan

S. dysenteriae

Perlakuan Rata-Rata Zona Hambat (mm) Mikroba Uji Kontrol +/

Konsentrasi Ekstrak Hari 1 Hari 2 Hari 3

S. dysenteriae Kloramfenikol 27,86 a 26,86 a 25,03 a

0 % 6,00 b 6,00 b 6,00 b

5 % 9,54 c 9,40 c 9,21 c

10 % 11,26 cd 10,49 cd 9,86 cd

20 % 13,10 d 11,56 cd 11,39 d

40 % 14,66 d 12,80 c 12,19 d

Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan

C. albicans

Perlakuan Rata-Rata Zona Hambat (mm) Mikroba Uji Kontrol +/

Konsentrasi Ekstrak Hari 1 Hari 2 Hari 3

C. albicans Nistatin 6,34 a 6,34 a 6,34 a

0 % 6,00 a 6,00 a 6,00 a

5 % 6,88 ac 6,53 ac 6,36 ab

10 % 7,72 b 7,19 bc 6,69 ab

20 % 7,52 ab 7,38 bc 6,69 ab

DAFTAR PUSTAKA

Adi, P., Noorhamdani, A.S. dan Chielwin, I.G. 2010. Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Bawang Putih (Allium sativum) terhadap Pertumbuhan

Streptococcus mutans Penyebab Karies Secara In Vitro. Universitas

Brawijaya. Malang

Adnyana, I.K., Yulinah, E., Sigit, J.I., Fisheri, N. dan Insanu, M. 2004. Efek Ekstrak Daun Jambu Biji Daging Buah Putih dan Jambu Biji Daging Buah Merah Sebagai Antidiare. Acta Pharmaceutica Indonesia 29(1): 19-27

Agoes, G. 2007. Teknologi Bahan Alam. Penerbit ITB. Bandung

Alexopoulos, C.J. and Mims, C.W. 1979. Introductory Mycology.Third Edition. John Wiley and Sons Inc. New York

Akpan, A. and Morgan, R. 2002. Oral Candidiasis. Journal Postgrad Med. 78: 455-459

Antony, B., Rekha, B., Anup, K.S., Thomas, K., and Ramanathan, K. 2010. Semiquantitation and Characterization of Streptococcus mutans from Patients Under Going Orthodontic Treatment. Journal Biosci Tech. 1(2): 59-63

Astuti, N.F. 2012. Perbandingan Resistensi Candida albicans dan Candida non

albicans terhadap Flukonazol dan Nistatin. [Tesis]. Yogyakarta:

Universitas Gadjah Mada

Bawa, I. 2011. Aktivitas Antioksidan Antijamur Senyawa Atsiri Bunga Cempaka Putih (Michelia alba). Jurnal Kimia. 5(1): 43-50

Berman, J. and Peter, E.S. 2002. Candida albicans: A Molecular Revolution Built on Lessons From Budding Yeast. Jurnal Nature. 3: 919-930

Burch, D.G. and Broschat, T.K. 1983. Aralias in Florida Horticulture. Proc Fla

State Hort Soc. 9: 161-164

Chander, J. 2002. Medical Mycology. Mentha Publisher. India

Chin, J.D. 2000. Manual Pemberantasan Penyakit Menular. Edisi 17. Terjemahan I Nyoman Kandun. Bakti Husada

[CLSI] Clinical and Laboratory Standards Institute. 2006. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing Sixtennth Informational Supplement. 26(3). United State America

Ciocan, I.D. and Bara, I.I. 2007. Plant Products as Antimicrobial Agents. Genetic

Biology Molecular. 7: 151-156

Cowan, M.M. 1999. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical

Microbiology. 12(4): 564-582

Dalimunthe, A. 2009. Interaksi pada Obat Antimikroba. Universitas Sumatera Utara. Medan

David, W.W. and Stout, T.R. 1971. Disc Plate Method of Microbiological Antibiotic Assay. Microbiology. 22(4): 659-665

Dewi, F.K. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda

citrifolia Linn.) terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar. [Skripsi].

Surakarta: Universitas Sebelas Maret

Dzen, S., Roekistiningsih., Sanarto, S., Sri, W., Sumarno., Samsul, I., Noorhamdani, A. dan Dewi, S. 2003. Bakteriologi Medik. Bayumedia Publishing. Malang

Fatimah, C., Urip. H., Isma, S., Safrida. dan Ernawati. 2006. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Angsana (Pterocarpus indicus Willd) Secara In Vitro. Jurnal Ilmiah PANNMED. 1(1): 1-8

Falahudin, D. 2008. Penghambatan Peroksidasi Lipid Sel Khamir Candida sp. Y390 oleh Ekstrak Daging Buah Salak Bongkok (Salacca edulis Reinw.) [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor

Gozali, D., Ida, M., Mutakin dan Kartika, A. 2009. Uji Aktivitas Antinyamuk dari Ekstrak Daun Zodia (Evodia suaveolens Scheff) terhadap Nyamuk Culex

fatigans dalam Sediaan. Farmaka. 7(3): 27-40

Hale, F.A. 2004. Dental Caries. Hale Veterinary Clinic Februari 2013]

Hamilton, M. 1973. Polyene Resistance in Yeast: a consideration of Physiological and Biochemical Mechanisms. Microbios 8: 209

Hasyim, N. 2005. Chemical Constitiuents and Biological Activity of Four Melicope Species (Rutaceae). [Tesis]. Malaysia: Universiti Putra Malaysia

Harborne, J. 1996. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung

Hotmauli, M. 2010. Perbandingan Efektivitas Ekstrak Daun Pacar Air (Impatiens

balsamina Linn.) dengan Ketokonazol 2% terhadap Pertumbuhan Candida

American Type Culture Collection (ATCC) 10231 pada Media Saboraud Dextorse Agar (SDA). [Karya Tulis Ilmiah]. Semarang: Universitas Diponegoro

Irianto, K. 2006. Mikrobiologi. Jilid 2. Yrama Widya. Bandung

Ismiati, E. 2006. Studi Efikasi Ekstrak Daun Kisampang (Melicope denhamii) terhadap Ektoparasit pada Ayam Kampung yang ada di Bagian Ekor. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor

Krieg, N.R., Staley, J.T., Brown, D.R., Hedlund. B,P., Paster, B.J., Ward, N.L., Ludwig, W., Whitman, W.B. and Parte, A.C. 2010. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Second Edition. Volume Four. Springer. New York

Kumala, W. 2006. Mikologi Dasar Kedokteran. Penerbit Universitas Trisakti. Jakarta

Kusumamaningtyas, E. 2009. Mekanisme Infeksi Candida albicans pada Permukaan Sel. Lokakarya Nasional Penyakit Zoonosis. Bogor

Lathifah, Q. 2008. Uji Efektivitas Ekstrak Kasar Senyawa Antibakteri pada Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimni L.) dengan Variasi Pelarut. [Skripsi]. Malang: Universitas Islam Negeri Malang

Lay, B.W. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. PT Raja Grafindo Persada. Jakarta

Legros, D. and Pierce, N.F. 2005. Guidelines for the Control of Shigellosis, including Epidemics due to Shigella dysenteriae type 1. World Health Organization

Lemmens. R.H.M.Y and Bunyapraphatsara, N. 2003. Plant Resources of South-East Asia. Prosea. Bogor

Lenny, S. 2006. Senyawa Terpenoid dan Steroida. [Karya Ilmiah]. Universitas Sumatera Utara

Lubis, R.D. 2008. Pengobatan Dermatomikosis. Universitas Sumatera Utara. Medan

Maryuni, A.E. 2008. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Antibakteri Minyak Atsiri Daun Zodia (Evodia sp.). [Tesis]. Bogor: Institut Pertanian Bogor Sekolah Pascasarjana

Mukhlisoh, W. 2010. Pengaruh Ekstrak Tunggal dan Gabungan Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn) terhadap Efektivitas Antibakteri Secara In Vitro. [Skripsi]. Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Ibrahim

Prathibha, K.P., Raghavendra, B.S. and Vijayan, V.A. 2010. Evaluation of Larvecidal Effeect of Euodia ridleyi Horch. Leaf Extract Againts Three Mosquito Spesies at Mysore. Biological Sciences 5(6): 452-455

Reapina, E. 2007. Kajian Aktivitas Antimikroba Ekstrak Kulit Kayu Mesoyi (Cryptocaria massoia) terhadap Pertumbuhan Bakteri Patogen dan Pembusuk Pangan.[Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor

Rippon, J.W. 1988. Medical Mycology. Third Edition. W. B. Saunders Company. Canada

Roekistiningsih, Yudani, T. dan Tadhfirah, F. 2010. Efek Antimikroba Ekstrak Daun Pepaya (Carica papaya L.) sebagai Antimikroba terhadap Shigella

dysenteriae secara In Vitro. [Tugas Akhir]. Malang: Universitas

Brawijaya

Robinson, 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerbit ITB. Bandung

Safitri, R. dan Sinta, S. Medium Analisis Mikroorganisme. Trans Info Media. Jakarta

Santoso, A.T., Noorhamdani, dan Bambang, S. 2009. Uji Ekstrak Bunga Kamboja (Plumeria acuminatae Ait) sebagai Antimikroba terhadap Shigella

dysenteriae. Universitas Brawijaya. Malang

Sari, L.O. 2006. Pemanfaatan Obat Tradisional dengan Pertimbangan Manfaat dan Keamanannya. Majalah Ilmu Kefarmasian. 3(1). 1-7

Silaban, L.W. 2009. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri dari Kulit Buah Sentul (Sandoricum koetjape Burn F. Merr) terhadap Beberapa Bakteri Secara In Vitro. [Skripsi]. Medan: Universitas Sumatera Utara

Suprianto. 2008. Potensi Ekstrak Sereh Wangi (Cymbopogon nardus L.) sebagai Anti Streptococcus mutans. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor

Suprihatin, S. 1982. Candida dan Kandidiasis pada Manusia. Balai Penerbitan FKUI. Jakarta

Tekur, U. 2007. Pharmalogy Antimicrobial Agents: Antibacterial Drugs. Maulana Azad Medical College. New Delhi

Volk, W.A., dan Wheeler, M.F. 2006. Mikrobiologi Dasar. Jilid I. Terjemahan Markam. Erlangga. Jakarta

Waji, R.A. dan Andis, S. 2009. Flavonoid (Quercetin). [Makalah]. Universitas Hasanudian Program S2 Kimia

Way, A., Camberley. and Surrey. 2007. The Genus Streptococcus, An Overview.

Microgen Bioproducts Newsletter. 25: 1-4

Wulandari, A. R. 2012. Uji Daya Efektivitas Antifungi Biji Tanjung (Mimusops elengi Linn.) terhadap Pertumbuhan Candida albicans secara In Vitro dengan Metode Difusi. [Skripsi]. Jakarta: Universitas Pembangunan Nasional Veteran

Yenny dan Herwana, E. 2007. Resistensi dari Bakteri Enterik: Aspek Global Terhadap Antimikroba. Universa Medica. 28(1): 48-56

Yulia, R. 2006. Kandungan Tanin dan Potensi Anti Streptococcus mutans Daun Teh Var. Assamica pada Berbagai Tahap Pengolahan. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor

Zein, U., Sagala, K.H. dan Ginting, J. 2004. Diare Akut disebabkan Bakteri. Universitas Sumatera Utara. Medan

BAB 3

BAHAN DAN METODE

3.1. Waktu Dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret 2013 sampai dengan Juni 2013 di Laboratorium Kimia Organik Bahan Alam FMIPA dan Laboratorium Mikrobiologi FMIPA, Universitas Sumatera Utara, Medan.

3.2. Alat Dan Bahan

Alat yang digunakan adalah neraca analitik, timbangan meja, rotary evaporator, cawan Petri, Erlenmeyer, autoklaf, inkubator, mikroskop, blender, gelas piala, gelas ukur, spatula, plastik wrap, aliminium voil, magnetic stirrer, oven,

handspray, propipet, Bunsen, jangka sorong, pinset, hot plate, jarum ose dan

pipet serologi.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah batang dan daun evodia

yang diambil dari beberapa tempat di Kota Medan, isolat S. mutans,

S. dysenteriae dan C. albicans, cotton bud, aquadest, alkohol 70%, Mueller Hinton Agar (MHA), nutrient agar (NA), NaCl 0,9 %, kertas cakram, kapas,

kloramfenikol (30 µg), nistatin (20,6 µg), dimethilsulfoxyde (DMSO), etanol, pereaksi Wagner, Meyer, Bouchardart, Dragendrof, FeCl3 1%, CeSO4, Lieberman-Bouchard, alkohol 96%, dan HCl 6% 2 N.

3.3. Susunan Rancangan Penelitian

Uji aktivitas ekstrak etanol batang dan daun evodia terhadap S. mutans,

S. dysenteriae dan C. albicans secara in vitro dilaksanakan dengan Rancangan

Acak Lengkap (RAL) Faktorial dengan 3 faktor yaitu faktor 1: variasi konsentrasi ekstrak etanol batang evodia, faktor 2: variasi konsentrasi ekstrak etanol daun evodia, serta faktor 3: mikroorganisme uji yang terdiri dari S. mutans, S.

dysenteriae dan C. albicans. Perlakuan diulangi sebanyak 3 kali dan data hasil uji

homogenitasnya. Jika data yang didapatkan normal dan homogen, maka dilakukan uji beda dengan menggunakan uji parametrik One Way Anova diperoleh p < 0,05 dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc Bonferroni. Jika data yang didapatkan tidak normal dan tidak homogen, maka dilakukan uji beda dengan menggunakan uji non parametrik Kruskall-Wallis diperoleh p <0,05 dan dilanjutkan dengan uji

Mann-Whitney.

3.4. Prosedur

Penelitian ini dilakukan dalam beberapa tahap, yaitu preparasi sampel tumbuhan uji, ekstraksi etanol batang dan daun evodia dengan metode maserasi, uji skrining fitokimia, peremajaan biakan murni dan penyiapan mikroba uji, serta pengujian aktivitas antimikroba oleh ekstrak etanol batang dan daun evodia.

3.4.1. Preparasi Sampel Tumbuhan Uji

Batang dan daun evodia masing-masing dikumpulkan sebanyak 1 kg dari beberapa tempat di Kota Medan, kemudian dicuci dan dikeringanginkan pada suhu kamar, hingga berat konstan (500 g), kemudian diblender menjadi serbuk (Mukhlisoh, 2010).

3.4.2. Ekstraksi Etanol Batang dan Daun Evodia dengan Metode Maserasi

Serbuk batang dan daun evodia masing-masing direndam dengan etanol selama 3 x 24 jam dengan beberapa kali pemaserasian. Kemudian larutan ekstrak batang dan daun evodia masing-masing disaring, dipisahkan filtrat dengan ampasnya. Filtrat ekstrak batang dan daun evodia masing-masing dipekatkan dengan rotary evaporator dan ditimbang. Ekstrak pekat yang diperoleh digunakan untuk uji golongan senyawa aktif dan uji antimikroba (Lathifah, 2008). Setelah perlakuan tersebut, masing-masing ekstrak kental dimasukkan dalam botol vial dan dikeringkan di desikator. Ekstrak etanol batang dan daun evodia sebanyak 0,8 g dari masing-masing ekstrak dilarutkan dalam 2 ml dimethilsulfoxyde (DMSO). Ekstrak yang diperoleh disimpan di dalam botol gelap dan disimpan pada suhu

refrigerator. Ekstraksi tumbuhan dengan metode maserasi dapat dilihat pada

3.4.3. Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Batang dan Daun Evodia

Uji skrining fitokimia ekstrak etanol batang dan daun evodia yang dilakukan meliputi pemeriksaan kandungan senyawa flavonoid, alkaloid, steroid, terpenoid dan saponin. Pemeriksaan senyawa ini sesuai dengan prosedur yang telah dilakukan Harbone (1996), yaitu:

a. Uji Flavonoid

Ekstrak kental batang dan daun evodia masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditetesi FeCl3. Kemudian diamati perubahan warna yang terjadi. Ekstrak dinyatakan mengandung flavonoid jika larutan berwarna biru kehitaman.

b. Uji Alkaloid

Ekstrak kental batang dan daun evodia masing-masing dimasukkan ke dalam 4 buah tabung reaksi. Tabung I ditetesi pereaksi Meyer, tabung II ditetesi pereaksi Wagner, tabung III ditetesi Bouchardart dan tabung IV ditetesi Dragendrof. Kemudian diamati perubahan warna yang terjadi. Ekstrak dinyatakan mengandung alkaloid jika salah satu pada tabung reaksi I terdapat endapan putih kekuningan, pada tabung reaksi II terdapat endapan coklat, pada tabung reaksi III terdapat endapan coklat dan pada tabung reaksi IV terdapat endapan merah bata.

c. Uji Steroid dan Terpenoid

Ekstrak kental batang dan daun evodia masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditetesi Lieberman-Bouchard. Ekstrak dinyatakan mengandung terpenoid dan steroid jika pada tabung reaksi terbentuk larutan biru kehijauan.

d. Uji Saponin

Ekstrak kental batang dan daun evodia masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan aquadest, alkohol 96% dan HCl 6% 2 N, dikocok selama beberapa detik. Ekstrak dinyatakan mengandung saponin jika pada larutan terdapat busa.

3.4.4. Peremajaan Biakan Murni dan Penyiapan Biakan Mikroba Uji

Mikroba uji (S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans) diperoleh dari laboratorium Mikrobiologi FMIPA Universitas Sumatera Utara. Mikroba uji tersebut, diremajakan pada media padat agar miring dengan cara menggoreskan jarum ose yang mengandung S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans secara aseptis. Kemudian tabung reaksi ditutup dengan kapas dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37oC. Penyiapan biakan mikroba uji dilakukan dengan membuat suspensi mikroba, yaitu dengan mengambil koloni mikroba uji, kemudian dimasukkan ke dalam larutan NaCl 0,9 % dan disesuaikan dengan kekeruhan Mc. Farland (1x108 CFU/ml). Kemudian diambil 0,1 ml suspensi mikroba uji dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril kemudian ditambahkan 9,9 ml larutan NaCl 0,9%, divortex sampai homogen, sehingga diperoleh suspensi mikroba 106 CFU/ml (Fatimah dkk, 2006). Peremajaan biakan murni dan penyiapan mikroba uji dapat dilihat pada Lampiran 2 hal. 43.

3.4.5. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol Batang dan Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans

Pengujian ekstrak etanol batang dan daun evodia, menggunakan kertas cakram kosong (Oxoid, Inggris) yang memiliki diameter 6 mm. Cakram dimasukkan ke dalam cawan Petri kosong steril. Larutan ekstrak yang telah diencerkan dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%, 40% dan 0% sebagai kontrol negatif (DMSO). Masing-masing dipipet sebanyak 10 μl selanjutnya diteteskan pada permukaan cakram dan ditunggu selama 1 jam hingga larutan berdifusi ke dalam cakram. Dituangkan sebanyak 10 ml media Mueller Hinton Agar (MHA) ke dalam cawan Petri steril dan dibiarkan memadat. Dicelupkan cotton bud steril pada suspensi mikroba uji dan diusapkan secara perlahan-lahan pada permukaan media secara merata, selanjutnya dibiarkan mengering selama beberapa menit. Dengan menggunakan pinset, cakram yang telah ditetesi ekstrak tanaman dengan konsentrasi yang berbeda diletakkan secara teratur pada permukaan media uji. Untuk pembanding digunakan cakram yang mengandung antijamur standart nistatin 20,6 µg dan antibakteri standart kloramfenikol 30 µg. Kemudian diinkubasi pada suhu 37 oC dan diamati pada jam ke 24, 48 dan jam ke 72.

Aktivitas ekstrak tumbuhan dapat dilihat dengan adanya zona hambat (daerah bening) di sekitar cakram. Diameter zona hambat diukur dengan menggunakan jangka sorong (Bawa, 2011). Uji aktivitas ekstrak etanol batang dan daun evodia dapat dilihat pada Lampiran 3 hal. 44.

3.4.6. Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Ekstrak Etanol

Batang dan Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans,

S. dysenteriae dan C. albicans

Pengujian Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak etanol batang dan daun Evodia dilakukan dengan metode difusi cakram. Nilai KHM menunjukkan konsentrasi terendah komponen antimikroba dimana tidak terjadi pertumbuhan mikroba pada masa inkubasi 24 jam. Dalam penelitian ini, konsentrasi ekstrak etanol batang dan daun evodia yang dicoba 1-4 %, berdasarkan data yang telah diperoleh dari hasil uji sebelumnya (Maryuni, 2008).

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Batang dan Daun Evodia

Hasil uji skrining fitokimia ekstrak etanol batang dan daun evodia dengan berbagai pereaksi tertera di Tabel 4.1 di bawah ini:

Tabel 4.1. Hasil Skrining Fitokimia Batang Evodia dan Daun (Euodia ridleyi Horch.)

Metabolit Sekunder Pereaksi Batang Daun

Alkaloid Meyer - -

Wagner - -

Bouchardart - -

Dragendorf + + + + + +

Flavonoid FeCl3 1% + + + + + +

Steroid CeSO4 (TLC) + -

Liebermen-Bouchard + -

Terpenoid CeSO4 (TLC) + -

Saponin

Liebermen-Bouchard Aquadest, Alkohol 96%, HCl 6% 2 N

+ -

- +

Keterangan : (-): Tidak terdapat senyawa, (+) : sedikit, (++): sedang, (+++): banyak

Dari Tabel 4.1 di atas dapat dilihat hasil skrining fitokimia ekstrak etanol batang dan daun evodia. Ekstrak etanol batang evodia mengandung senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, steroid dan terpenoid. Ekstrak etanol daun evodia mengandung metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, dan saponin. Secara keseluruhan dari kedua ekstrak tersebut, memiliki metabolit sekunder terbanyak dari golongan senyawa alkaloid dan flavonoid.

Penelitian ini menggunakan pelarut etanol karena memiliki kemampuan dalam mengekstrak senyawa metabolit sekunder. Menurut Agoes (2007), senyawa yang dapat larut dalam etanol diantaranya adalah flavonoid, alkaloid, dan saponin serta senyawa aktif lainnya.

Senyawa metabolit sekunder telah banyak digunakan sebagai bahan obat antimikroba seperti flavonoid, saponin, dan tanin, yang memiliki gugus hidroksil

aromatis sebagai antibakteri. Golongan terpenoid juga memiliki kemampuan untuk menghambat mikroba. Salah satu contoh terpenoid yang dapat menghambat mikroba yaitu golongan triterpenoid dan monoterpenoid (Lenny, 2006; Silaban, 2009; Waji dan Andis, 2009).

Dalimunthe (2009) mengatakan, ada beberapa mekanisme senyawa antimikroba yaitu, sebagai antimetabolit, menghambat sintesis dinding sel, menghambat fungsi kerja membran sel, menghambat sintesis protein dan menghambat asam nukleat.

Flavonoid memiliki struktur fenolik yang mengandung satu gugus hidroksil. Dalam menghambat mikroba, flavonoid dapat berikatan dengan membran ekstraseluler dan protein. Sehingga sel bakteri mengalami kebocoran dan tidak dapat bereproduksi. Mekanisme terpenoid dalam menghambat mikroba belum diketahui dengan pasti, tetapi diduga dapat berikatan membran sel bakteri oleh senyawa yang bersifat lipofilik. Senyawa lipofilik berikatan dengan senyawa lipid pada bakteri sehingga dapat menembus lapisan dinding sel bakteri. Selain senyawa flavonoid dan terpenoid, alkaloid dan saponin juga dapat menghambat mikroorganisme. Adapun mekanisme alkaloid sebagai antimikroba yaitu dengan mengganggu sintesis DNA dan dinding sel sedangkan saponin, dengan cara merusak membran sel, sehingga menyebabkan kebocoran sel yang akhirnya memacu terjadinya kematian sel (Ciocan dan Bara, 2007; Cowan 1999; Hotmauli, 2010).

4.2.Uji Antagonis Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan

S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans

Hasil uji antagonis ekstrak batang evodia terhadap S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans secara in vitro menunjukkan bahwa ekstrak batang evodia berpotensi

menghambat pertumbuhan ketiga mikroba tersebut. Data hasil uji antagonis batang evodia terhadap mikroba dapat dilihat pada Lampiran 4 hal. 45 dan Lampiran 5 hal. 46. Diameter zona hambat ekstrak batang evodia dapat dilihat pada Gambar 4.1 (A, B, dan C).

Gambar 4.1. A. Zona Hambat Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans setelah 24 jam inkubasi B. S. dysenteriae setelah 24 jam inkubasi C. C. albicans setelah 48 jam inkubasi dengan konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

Dari Gambar 4.1, rata-rata diameter zona hambat terbesar dihasilkan oleh konsentrasi 40%. Hasil pengukuran diameter zona hambat menunjukkan bahwa ekstrak batang evodia memiliki kemampuan menghambat lemah terhadap

C. albicans (7,51 mm), sedang terhadap S. mutans (14,59 mm) dan kuat terhadap S. dysenteriae (17,42 mm). Penentuan kriteria ini menurut David dan Stout (1971)

yang mengatakan bahwa ketentuan kekuatan daya antibakteri sebagai berikut: daerah hambatan 20 mm atau lebih termasuk sangat kuat, daerah hambatan 10-20 mm kategori kuat, daerah hambatan 5-10 mm kategori sedang, dan daerah hambatan 5 mm atau kurang termasuk kategori lemah.

Gambar 4.2. Diamater Zona Hambat Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans Hari 1,2 dan 3

0 5 10 15 20

0 5 10 20 40 0 5 10 20 40 0 5 10 20 40

Streptococcus mutans Shigella dysenteriae Candida albicans

D

iam

et

er

z

on

a h

am

b

at

(

m

m

)

Konsentrasi Ekstrak Etanol Batang Evodia (%)

Hari ke 1 Hari ke 2 Hari ke 3

Berdasarkan Gambar 4.2, dapat dilihat bahwa diameter zona hambat ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan S. mutans dan S. dysenteriae, dari hari 1, 2 dan 3 mengalami penurunan, tetapi tidak terjadi pada C. albicans. Penurunan diameter zona hambat yang terjadi disebabkan oleh waktu. Menurut David dan Stout (1971), waktu kontak ekstrak dengan mikroba uji juga mempengaruhi diameter zona hambat. Penurunan zona hambat ini dipengaruhi oleh kondisi laju difusi ekstrak yang berkurang pada hari berikutnya. Pada saat berdifusi, konsentrasi ekstrak etanol batang evodia pada tepi zona mengecil, sehingga memberikan kesempatan untuk pertumbuhan mikroba.

Mikroorganisme mengalami beberapa fase tumbuh yaitu fase lag, fase log, fase stationer, dan fase kematian. Fase lag terjadi sebagai awal proses pertumbuhan C. albicans. Fase ini dipengaruhi oleh jenis C. albicans, umur

C. albicans dalam stok awal, dan komposisi media tumbuhnya. Menurut

Falahudin (2008), fase lag C. albicans terjadi pada hari ke-0 sampai hari ke-1, dan

fase log C. albicans terjadi pada hari ke-1 sampai hari ke-2. Pertumbuhan

C. albicans yang tidak merata pada hari ke-1 di media mengakibatkan diameter

zona hambat tidak terlihat secara sempurna. Diameter zona hambat C. albicans dapat terlihat pada hari ke-2, yaitu pada saat seluruh permukaan media telah ditumbuhi oleh koloni C. albicans.

Kemampuan ekstrak etanol batang evodia pada ketiga mikroorganisme tersebut berbeda-beda. Perbedaan ini dipengaruhi oleh struktur dinding sel mikroba. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Dewi (2010), bakteri G + cenderung lebih sensitif terhadap antibakteri, karena struktur dinding sel bakteri G + lebih sederhana dibandingkan dengan struktur dinding sel bakteri G - sehingga memudahkan senyawa antibakteri untuk masuk kedalam bakteri G +.

Hasil uji antagonis ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan terhadap S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans terdapat perbedaan. Ekstrak etanol batang evodia lebih efektif terhadap S. dysenteriae dibandingkan dengan

S. mutans dan C. albicans. Perbedaan efek ekstrak etanol batang evodia ini dapat

dipengaruhi oleh senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak tersebut.

Berdasarkan Tabel 4.1 hal. 19, ekstrak etanol batang evodia memiliki senyawa flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan steroid. Dinding sel bakteri G - contohnya S. dysenteriae, memiliki dinding sel berlapis tiga yang tersusun atas lipopolisakarida, peptidoglikan dan lipid dengan kadar yang tinggi (11-22%). Menurut Dewi (2010), flavonoid yang bersifat polar dapat berikatan dengan peptidoglikan yang juga bersifat polar. Setelah lapisan peptidoglikan dapat ditembus oleh flavonoid, senyawa terpenoid dan steroid yang bersifat lipofilik akan menembus lapisan lipid. Kemudian alkaloid akan mengganggu sintesis DNA.

Hasil uji statistik One Way Annova diameter zona hambat kontrol positif (kloramfenikol 30 µg) dengan berbagai ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan S. mutans menunjukkan nilai signifikan 0,000 (p < 0,05). Berdasarkan hasil uji statistik menunjukkan bahwa kontrol positif dan konsentrasi ekstrak etanol batang evodia baik konsentrasi 0%, 5%, 10%, 20% dan 40% telah menunjukkan aktivitas yang berbeda terhadap pertumbuhan S. mutans.

Uji statistik dilanjutkan dengan uji Post Hoc Bonferroni untuk melihat perlakuan mana yang memiliki efek yang sama atau berbeda dan efek yang terkecil sampai efek yang terbesar antara satu dengan yang lainnya. Uji Post Hoc

Bonferroni hari pertama antara kontrol positif dengan konsentrasi ekstrak batang

evodia menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05). Kontrol positif yang digunakan adalah kloramfenikol 30 µg yang menunjukkan diameter zona hambat sebesar 25,05 mm pada hari pertama. Berdasarkan hasil uji Post Hoc Bonferroni, kontrol positif lebih efektif atau lebih berpengaruh dibandingkan dengan variasi konsentrasi ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan S. mutans .

Uji statistik Post Hoc Bonferroni hari pertama terhadap diameter zona hambat S. mutans untuk konsentrasi 0% dengan konsentrasi 5%, 10%, 20% dan 40% menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (p < 0,05). Hasil uji statistik berarti bahwa konsentrasi 0% dengan konsentrasi 5%, 10%, 20% dan 40% memberikan efek yang berbeda terhadap pertumbuhan S. mutans. Uji statistik

Post Hoc Bonferroni untuk konsentrasi 5% (12,04 mm), konsentrasi 10% (12,75

mm), konsentrasi 20% (13,78 mm), dan konsentrasi 40% (14,59 mm) tidak ada perbedaan nyata. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa variasi konsentrasi

ekstrak etanol batang evodia memiliki kemampuan yang sama terhadap pertumbuhan S. mutans.

Hasil uji statistik Kruskal-Wallis diameter zona hambat antara kontrol positif (kloramfenikol) dengan berbagai ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan S. dysenteriae menunjukkan perbedaan yang nyata dengan nilai signifikan 0,000 (p < 0,05). Hasil uji menunjukkan bahwa kontrol positif dan konsentrasi ekstrak batang evodia baik konsentrasi 0%, 5%, 10%, 20% dan 40% telah memberikan aktivitas yang berbeda dalam menghambat pertumbuhan

S. dysenteriae.

Uji statistik dilanjutkan dengan uji statistik Mann-Whitney untuk melihat

perlakuan mana yang lebih efektif dalam menghambat pertumbuhan

S. dysenteriae. Uji statistik Mann-Whitney hari pertama antara kontrol positif dan

berbagai ekstrak etanol batang evodia menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (p < 0,05). Kontrol positif yang digunakan adalah kloramfenikol 30 µg. Diameter zona hambat yang dihasilkan oleh kontrol positif ini adalah diameter yang paling besar yaitu 27,86 mm pada hari pertama. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa kontrol positif memiliki kemampuan yang lebih baik dibandingkan dengan variasi konsentrasi ekstrak etanol batang evodia dalam menghambat pertumbuhan

S. dysenteriae.

Uji statistik Mann-Whitney hari pertama terhadap diameter zona hambat

S. dysenteriae untuk konsentrasi 0% dengan konsentrasi 5%, 10%, 20% dan 40%

menunjukkan perbedaan yang nyata. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa terdapat perbedaan efek antara konsentrasi 0% dengan konsentrasi ekstrak lainnya dalam aktivitasnya terhadap pertumbuhan S. dysenteriae. Uji Mann-Whitney hari pertama untuk konsentrasi 5% (9,81 mm) dengan konsentrasi 10% (13,15 mm), konsentrasi 20% (15,19 mm) dan konsentrasi 40% (17,42 mm) menunjukkan perbedaan yang nyata. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak etanol batang evodia memiliki efek terhadap pertumbuhan S. dysenteriae.

Hasil uji statistik Kruskall-Wallis diameter zona hambat antara kontrol positif (nistatin 20,6 µg) dengan berbagai konsentrasi ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan C. albicans pada hari pertama menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan 0,207 (p > 0,05). Perbedaan yang tidak signifikan ini

terjadi karena koloni C. albicans yang tidak tumbuh merata, sehingga zona hambat ekstrak belum dapat terlihat secara sempurna. Namun pada hari ke-2, menunjukkan perbedaan yang signifikan 0,001 (p < 0,05). Berdasarkan hasil uji statistik menyatakan bahwa ekstrak etanol batang evodia dan kontrol positif memberikan efek terhadap pertumbuhan C. albicans.

Uji statistik dilanjutkan dengan uji Whitney. Uji statistik

Mann-Withney diameter zona hambat pada hari ke-2 untuk kontrol positif (6,34 mm)

dengan konsentrasi 5% (6,68 mm), 10% (7,19 mm), dan 20% (7,35 mm) menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata (p > 0,05). Namun menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05) dengan konsentrasi 40% (9,57 mm). Berdasarkan hasil uji statistik berarti konsentrasi ekstrak etanol batang evodia 40% lebih

efektif dibandingkan dengan kontrol positif dalam menghambat pertumbuhan

C. albicans. Notasi hasil uji statistik diameter zona hambat ekstrak etanol batang

evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans dapat dilihat pada Lampiran 12 hal. 53.

4.3.Uji Antagonis Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan

S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans

Hasil uji antagonis ekstrak daun evodia terhadap S. mutans, S. dysenteriae, dan

C. albicans secara in vitro menunjukkan ekstrak daun evodia berpotensi

menghambat pertumbuhan mikroba. Data hasil uji antagonis daun evodia terhadap mikroba dapat dilihat pada Lampiran 6 hal. 47 dan Lampiran 7 hal. 48. Diameter zona hambat ekstrak daun evodia dapat dilihat pada Gambar 4.3. (A, B, dan C).

Gambar 4.3. A. Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan

S. mutans setelah 24 jam inkubasi B. S. dysenteriae setelah 24 jam

inkubasi C. C. albicans setelah 48 jam inkubasi dengan Konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada Media Mueller

Dari Gambar 4.3, rata-rata diameter zona hambat terbesar terdapat pada konsentrasi 40%. Menurut David dan Stout (1971), hasil pengukuran diameter zona hambat menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun evodia memiliki aktivitas yang lemah terhadap C. albicans (8,35 mm), sedang terhadap S. dysenteriae (14,66 mm) dan kuat terhadap S. mutans (18,44 mm).

Gambar 4.4. Diamater Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans Hari 1, 2 dan 3

Berdasarkan Gambar 4.4, dapat dilihat bahwa diameter zona hambat ekstrak etanol batang evodia terhadap pertumbuhan S. mutans dan S. dysenteriae, dan

C. albicans dari hari 1, 2 dan 3 mengalami penurunan. Penurunan diameter zona

hambat ini dipengaruhi oleh waktu. Menurut David dan Stout (1971), waktu kontak ekstrak dengan mikroba uji juga mempengaruhi diameter zona hambat. Penurunan zona hambat ini dipengaruhi oleh kondisi laju difusi ekstrak yang berkurang pada hari berikutnya. Pada saat berdifusi, konsentrasi ekstrak etanol batang evodia pada tepi zona terlalu kecil, sehingga memberikan kesempatan untuk pertumbuhan mikroba.

Kemampuan ekstrak etanol daun evodia dalam menghambat pertumbuhan ketiga mikroorganisme ini berbeda-beda. Perbedaan kemampuan ekstrak ini dipengaruhi oleh penyusun dinding sel mikroorganisme. Hasil uji ekstrak etanol

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

0 5 10 20 40 0 5 10 20 40 0 5 10 20 40

Streptococcus mutans Shigella dysenteriae Candida albicans

D iam et er z on a H am b at ( m m )

Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Evodia (%)

Hari ke 1 Hari ke 2 Hari ke 3

daun evodia menunjukkan bahwa ekstrak lebih efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri G + yaitu S. mutans dibandingkan dengan bakteri G - yaitu

S. dysenteriae dan jamur C. albicans.

Menurut Lathifah (2008), senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid yang bersifat polar lebih mudah menembus dinding sel bakteri G + (S. mutans), karena struktur dinding sel bakteri ini berlapis tunggal dan tersusun atas peptidoglikan (protein dan gula) serta lipid dengan kadar rendah (1-4%), sehingga ekstrak tumbuhan lebih mudah menembus bakteri ini. Dinding sel bakteri G – (S. dysenteriae) lebih sulit ditembus senyawa yang bersifat polar karena struktur dinding sel bakteri ini berlapis tiga yang tersusun atas lipopolisakarida, peptidoglikan dan lipid dengan kadar yang tinggi (11-22%).

Kusumaningtyas (2009), mengemukakan komposisi dinding sel

C. albicans yang terdiri dari fibrillar layer, mannoprotein, β-gulcan, kitin, dan membram plasma. Ekstrak etanol daun evodia memiliki senyawa metabolit sekunder yaitu saponin. Saponin mempunyai aktivitas sebagai antifungal dengan mekanisme kerjanya yaitu dengan cara merusak membran sel, sehingga menyebabkan kebocoran sel yang akhirnya memacu terjadinya kematian sel.

Hasil uji statistik Kruskall-Wallis diameter zona hambat antara kontrol positif (kloramfenikol 30 µg) dengan berbagai konsentrasi ekstrak etanol daun evodia terhadap pertumbuhan S. mutans menunjukkan perbedaan yang nyata dengan signifikan 0,000 (p < 0,05). Hasil uji statistik menunjukkan bahwa kontrol positif dan berbagai konsentrasi ekstrak tersebut memberikan pengaruh terhadap pertumbuhan S. mutans.

Uji statistik dilanjutkan dengan menggunakan uji statistik Mann-Whitney untuk melihat perlakuan yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan

S. mutans. Dari hasil uji Mann-Whitney hari pertama diameter zona hambat antara

kontrol positif (25,05 mm) dengan konsentrasi 0% (6 mm), 5% (11,13 mm), 10% (13,71 mm), 20% (17,07 mm) dan 40% (18,44 mm) menunjukkan ada perbedaan yang nyata. Apabila dibandingkan dengan konsentrasi ekstrak daun evodia, kontrol positif menghasilkan aktivitas yang kuat dengan diameter zona hambat terbesar. Berdasarkan hasil uji statistik berarti kloramfenikol 30 µg lebih efektif dibandingkan dengan ekstrak daun evodia.

Uji statistik Mann-Whitney hari pertama diameter zona hambat antara ekstrak konsentrasi 0% dengan konsentrasi 5%, 10%, 20% dan 40% menunjukkan perbedaan yang nyata. Berdasarkan hasil uji statistik menunjukkan bahwa ekstrak dengan konsentrasi 0% memiliki pengaruh yang tidak sama dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%, dan 40%. Uji statistik Mann-Whitney konsentrasi 5% dan 10% serta 10%, 20%, dan 40% tidak menunjukkan perbedaan yang nyata. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak 5% dan 10% serta 10%, 20% dan 40% memiliki efek yang sama.

Hasil uji statistik Kruskall-Wallis diameter zona hambat antara kontrol positif (kloramfenikol 30 µg) dengan berbagai konsentrasi ekstrak etanol daun evodia terhadap pertumbuhan S. dysenteriae menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05) dengan signifikan 0,000. Hal ini berarti kontrol positif dengan variasi konsentrasi ekstrak berpengaruh terhadap pertumbuhan S. dysenteriae.

Uji statistik dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk melihat konsentrasi yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan S. dysenteriae. Hasil uji Mann-Whitney hari pertama antara kontrol positif (27,86 mm) dengan konsentrasi 0% (6 mm), 5% (9,54 mm), 10% (11,26 mm), 20% (13,10 mm) dan 40% (14,66 mm) menunjukkan perbedaan yang nyata. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa antara kontrol positif dan konsentrasi ekstrak memiliki aktivitas yang berbeda terhadap S. dysenteriae.

Hasil uji statistik Mann-Whitney hari pertama antara kontrol positif dengan konsentrasi 40% memiliki perbedaan yang nyata (p < 0,05). Hasil uji statistik menunjukkan kontrol positif memiliki aktivitas menghambat mikroba lebih baik daripada konsentrasi 40%. Berdasarkan kriteria David dan Stout (1971), kontrol positif memiliki aktivitas yang sangat kuat terhadap S. dysenteriae.

Berdasarkan Gambar 4.4 hal. 26, dapat dilihat bahwa ekstrak etanol daun evodia dapat menghambat pertumbuhan C. albicans dengan diameter zona hambat terbesar dihasilkan oleh konsentrasi 40% dengan diameter 8,35 mm, dan diameter zona hambat terkecil dihasilkan oleh konsentrasi 5 % (6,88 mm). Pada konsentrasi 0 %, tidak menunjukkan zona hambat yang ditandai dengan diameter 6 mm (sama dengan diameter cakram).

Hasil uji statistik Kruskall-Wallis diameter zona hambat antara kontrol positif (nistatin 20,6 µg) dengan variasi konsentrasi ekstrak etanol daun evodia menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05) dengan signifikan 0,009. Hal ini menunjukkan bahwa kontrol positif dan variasi ekstrak etanol daun evodia memiliki pengaruh terhadap pertumbuhan C. albicans.

Uji statistik dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk mengetahui perlakuan yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan C. albicans. Hasil uji statistik Mann-Whitney hari pertama antara kontrol positif (6,34 mm) dengan konsentrasi 0% (6 mm) dan 5% (6,88 mm), dan menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata. Namun konsentrasi 0% dengan konsentrasi 10% (7,72 mm), 20 % (7,52 mm), dan 40% (8,35 mm) menunjukkan perbedaan yang nyata. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa ekstrak pada konsentrasi 10%, 20%, dan 40% merupakan konsentrasi yang memiliki efek yang sama dalam menghambat pertumbuhan C. albicans. Notasi hasil uji statistik diameter zona hambat ekstrak

etanol daun evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan

C. albicans dapat dilihat pada Lampiran 13 hal. 54.

Ekstrak etanol batang evodia dan ekstrak etanol daun evodia memiliki kemampuan untuk menghambat S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans. Ekstrak etanol batang evodia lebih efektif dalam menghambat S. dysenteriae dibandingkan dengan ekstrak etanol daun evodia. Perbedaan efek antimikroba kedua ekstrak dipengaruhi oleh perbedaan metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak. Hasil skrining fitokimia pada Tabel 4.1 hal. 19, menunjukkan ekstrak etanol batang evodia memiliki senyawa steroid dan terpenoid yang tidak terkandung dalam ekstrak etanol daun evodia. Mekanisme terpenoid dan steroid dalam menghambat mikroorganime adalah dengan cara berikatan dengan lipid. Kadar lipid pada bakteri G – lebih banyak, sehingga dengan adanya senyawa terpenoid dan steroid, lapisan lipid bakteri dapat ditembus, dan dapat mengakibatkan kebocoran sel.

Ekstrak etanol daun evodia lebih efektif dalam menghambat S. mutans dan

C. albicans dibandingkan dengan ekstrak etanol batang evodia. Perbedaan efek

antimikroba kedua ekstrak dipengaruhi oleh perbedaan metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak. Hasil skrining fitokimia pada Tabel 4.1 hal. 19,

menunjukkan ekstrak etanol daun evodia mengandung senyawa saponin sedangkan pada ekstrak etanol batang tidak. Saponin merupakan senyawa yang dapat merusak membran sel pada S. mutans dan C. albicans.

4.4. Uji Kontrol Positif Kloramfenikol (30 µg), Nistatin (20,6 µg) dan Kontrol Negatif (DMSO) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S.

dysenteriae, dan C. albicans

Hasil uji kontrol positif dan kontrol negatif terhadap pertumbuhan S. mutans,

S. dysenteriae dan C. albicans secara in vitro dapat pada Gambar 4.5. (A, B, dan

C). Data hasil uji kontrol positif dan negatif dapat dilihat pada lampiran 8 hal. 49.

Gambar 4.5. Zona Hambat DMSO (a) dan Kloramfenikol (30 µg) (b) terhadap

Pertumbuhan A. S. mutans setelah 24 jam inkubasi, B.

S. dysenteriae setelah 24 jam inkubasi, dan Zona Hambat DMSO

(a) dan Nistatin (20,6 µg) (b) C. terhadap Pertumbuhan C. albicans setelah 48 jam inkubasi pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37º C

Berdasarkan Gambar 4.5 (A. a), (B. a), dan (C. a) menunjukkan bahwa kontrol negatif (DMSO) tidak menghasilkan zona hambat. Gambar 4.5. (A. b), dan (B. b), menunjukkan bahwa kontrol positif (kloramfenikol 30 µg) menunjukkan zona hambat yang besar yaitu pada hari pertama diameter zona hambat masing-masing adalah 25,05 mm dan 27,86 mm. Untuk Gambar 4.5. (C. b) kontrol positif (nistatin 20,6 µg) menunjukkan zona hambat yang kecil sebesar 6,34 mm pada hari pertama.

Kontrol negatif berfungsi untuk mengetahui apakah pelarut juga berpotensi untuk menghambat atau membunuh mikroba. Kontrol positif merupakan obat antimikroba yang sudah murni dan kuat. Pengujian antimikroba

yang kuat ini digunakan sebagai perbandingan potensi ekstrak batang dan daun evodia dalam menghambat pertumbuhan mikroba.

Gambar 4.6. Diameter Zona Hambat Kontrol Positif Kloramfenikol (30 µg), Nistatin (20,6 µg) dan Kontrol Negatif (DMSO) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans pada Hari 1, 2 dan 3

Berdasarkan Gambar 4.6, dapat dilihat pada hari pertama kontrol positif (kloramfenikol 30 µ g) terhadap S. mutans dan S. dysenteriae menghasilkan diameter zona hambat masing-masing sebesar 25,05 mm dan 27,86 mm serta menurun pada hari ke-2 dan hari ke-3. Pada hari pertama kontrol positif (nistatin 20,6 µg) menghasilkan dimeter zona hambat sebesar 6,34 mm dan tidak menunjukkan perubahan pada hari ke-2 dan hari ke-3. Menurut kriteria kekuatan daya antimikroba yang dinyatakan David dan Stout (1971), kloramfenikol 30 µg memiliki kemampuan daya hambat yang sangat kuat terhadap S. mutans dan

S. dyenteriae, sedangkan nistatin 20,6 µg memiliki kemampuan daya hambat yang

lemah. Kontrol negatif (DMSO) terhadap ketiga mikroba tidak menunjukkan diameter zona hambat yang ditandai dengan diameter zona hambat 6 mm (sebesar diameter cakram).

Menurut Reapina (2007), DMSO adalah pelarut yang umum digunakan sering digunakan dalam analisis atau percobaan, karena kemampuannya untuk melarutkan senyawa baik polar ataupun non polar. DMSO memiliki sifat seperti emulsifier. Rumus senyawa DMSO adalah (CH3)2SO. DMSO merupakan cairan bening dengan bau seperti bawang putih. DMSO memiliki titik didih 189o C dan dapat larut dalam air. DMSO bersifat stabil dalam kondisi normal dan bersifat

0 5 10 15 20 25 30 K lo ra m fe n ik o l DM S O K lo ra m fe n ik o l DM S O N is ta tin DM S O

S. mutans S. dysenteriae C. albicans

D iam et er z on a h am b at ( m m

) Hari 1

Hari 2 Hari 3

higrokopis. DMSO efektif sebagai pelarut dalam proses ekstraksi dan pemisahan komponen aroma (flavor), serta dalam fraksinasi komponen tidak jenuh dari suatu bahan.

Menurut Tekur (2007), kloramfenikol juga disebut chloromycetin. Kloramfenikol diperoleh dari Streptomyces venezuelae. Kloramfenikol mengandung gugus nitrobenzena. Mekanisme kloramfenikol sebagai antimikroba adalah dengan menghambat sintesis protein bakteri dengan mengikat reversibel ke 50 S subunit ribosom dan menghambat pembentukan ikatan peptida. CLSI (2006), menyatakan zona hambat pada mikroba yang dihasilkan oleh kloramfenikol 30 µg akan dikatakan resisten apabila diameter zona hambat yang dihasilkan adalah ≤ 12 mm. Diameter zona hambat yang dihasilkan oleh kloramfenikol dalam penelitian ini > 12 mm, yang menunjukkan S. mutans dan S. dysenteriae tidak bersifat resisten.

Namun untuk C. albicans, kontrol positif yang diujikan tidak menunjukkan daya hambat. Pada Gambar 4.5. (C. b) terlihat bahwa nistatin lemah dalam menghambat pertumbuhan C. albicans karena hanya sedikit ditemukannya zona bening.

Menurut Lubis (2008), nistatin merupakan antibiotik yang digunakan sebagai antijamur, diisolasi dari Streptomyces nourse pada tahun 1951 dan merupakan antibiotik grup poliene. Nistatin tidak bersifat toksik tetapi dapat menimbulkan mual, muntah dan diare jika diberikan dengan dosis tinggi. Nistatin bekerja dengan mengikat sterol dalam membran sel sehingga mengakibatkan perubahan permeabilitas membran dan selanjutnya kebocoran komponen intraseluler.

Dalam penelitian Astuti (2012), resisten C. albicans mengalami resisten terhadap nistatin sebesar 2,95 %. Resisten terhadap antifungal golongan poliene jarang terjadi selama pengobatan, tetapi yang umum terjadi isolat menunjukkan konsentrasi hambat minimum yang tinggi. Apabila terjadi resisten terhadap antifungi golongan poliene, diakibatkan karena membran yang tidak biasa, sehingga mengakibatkan penurunan efektivitas poliene dalam menembus membran (Hamilton, 1973).

4.5. Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) terhadap Pertumbuhan

S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans

Hasil uji antagonis ekstrak etanol batang dan daun evodia dalam menghambat

S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans secara in vitro menunjukkan bahwa

ekstrak tersebut sudah mampu menghambat pertumbuhan ketiga mikroorganisme ini pada konsentrasi 5%. Untuk mengetahui konsentrasi hambat minimum dari ekstrak tersebut, maka konsentrasi ekstrak diturunkan dengan pengenceran. Konsentrasi yang digunakan untuk uji KHM ini adalah 1%, 2%, 3% dan 4%. Grafik hasil pengujian KHM ekstrak batang dan daun evodia dapat dilihat pada Gambar 4.7 dan 4.8.

Gambar 4.7. Diameter Zona Hambat Minimum Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans pada Hari 1, 2 dan 3

Gambar 4.8. Diameter Zona Hambat Minimum Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans pada Hari 1, 2 dan 3

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

S. mutans S. dysenteriae C. albicans

D iam et er z on a h am b at ( m m )

Konsentrasi Ekstrak Etanol Batang Evodia (%)

Hari ke 1 Hari ke 2 Hari ke 3

0 2 4 6 8 10

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

S. mutans S. dysenteriae C. albicans

D iam et er z on a h am b at ( m m )

Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Evodia (%)

Hari ke 1 Hari ke 2 Hari ke 3

Berdasarkan Gambar 4.7, ekstrak etanol batang evodia pada konsentrasi 1% tidak dapat menghambat pertumbuhan S. mutans dan S. dysenteriae, pada konsentrasi 2% dapat menghambat S. mutans dengan diameter zona hambat sebesar 7,02 mm dan menghambat S. dysenteriae dengan diameter zona hambat 8,69 mm. Ekstrak etanol batang evodia pada konsentrasi 1%, 2%, dan 3% tidak dapat menghambat pertumbuhan C. albicans, pada konsentrasi 4% dapat menghambat C. albicans dengan diameter zona hambat 6,85 mm. Berdasarkan pada hasil penelitian diatas, menunjukkan bahwa konsentrasi hambat minimum ekstrak etanol batang evodia terhadap S. mutans dan S. dysenteriae adalah 2%, serta terhadap C. albicans adalah 4%.

Berdasarkan Gambar 4.8, ekstrak etanol daun evodia pada konsentrasi 1% tidak dapat menghambat pertumbuhan S. mutans, pada konsentrasi 2% dapat menghambat pertumbuhan S. mutans dengan diameter zona hambat sebesar 7,73 mm. Ekstrak etanol daun evodia pada konsentrasi 1%, 2%, 3% dan 4% tidak dapat mengambat pertumbuhan S. dysenteriae. Ekstrak etanol daun evodia pada konsentrasi 1% dan 2% tidak dapat menghambat pertumbuhan C.albicans, namun pada konsenstrasi 3% ekstrak dapat menghambat pertumbuhan C. albicans dengan diameter zona hambat sebesar 7,18 mm. Berdasarkan hasil penelitian di atas, menunjukkan bahwa konsentrasi hambat minimum ekstrak etanol daun evodia terhadap S. mutans adalah 2%, S. dysenteriae adalah 5%, dan C. albicans adalah 3%. Data uji konsentrasi hambat minimum ekstrak etanol batang dan daun evodia dapat dilihat pada Lampiran 9 hal. 50, Lampiran 10 hal. 51 dan Lampiran 11 hal. 52.

Hasil uji KHM ekstrak etanol batang dan daun evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans bervariasi. Konsentrasi Hambat Minimum ekstrak etanol batang dan daun evodia terhadap pertumbuhan

S. mutans adalah sama yaitu pada konsentrasi 2%. Dalam menghambat

pertumbuhan S. dysenteriae, KHM ekstrak etanol batang evodia lebih rendah daripada ekstrak etanol daun evodia serta dalam menghambat pertumbuhan C.

albicans, KHM ekstrak etanol daun evodia lebih rendah daripada ekstrak etanol

Nilai KHM ekstrak etanol batang sereh wangi dan ektrak etanol daun sereh wangi terhadap S. mutans adalah 6 % (Suprianto, 2008). Nilai KHM ekstrak etanol bawang putih terhadap S. mutans sebesar 5% (Adi dkk., 2010). Kedua nilai KHM tersebut lebih besar dibandingkan dengan nilai KHM ekstrak etanol batang evodia dan ekstrak etanol daun evodia yang didapat.

Nilai KHM ekstrak daun pacar air terhadap C. albicans ATCC 10231 sebesar 12,5 % (Hotmauli, 2010). Nilai KHM ekstrak daun pacar air lebih besar dibandingkan dengan nilai KHM ekstrak etanol batang evodia dan ekstrak etanol daun evodia. Nilai KHM ekstrak etanol jambu biji daging buah putih 0,03 % (Adnyana dkk., 2004). Nilai KHM ini lebih kecil dibandingkan dengan KHM ekstrak etanol batang evodia dan ekstrak etanol daun evodia.

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

Hasil skrining ekstrak etanol batang evodia menunjukkan bahwa ekstrak tersebut mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, dan terpenoid serta hasil skrining ekstrak etanol daun evodia menunjukkan bahwa ekstrak tersebut mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan saponin. Ekstrak etanol batang dan daun evodia memiliki aktivitas antimikroba terhadap S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans. Zona hambat terbesar dihasilkan pada konsentrasi 40%. Konsentrasi Hambat Minimum ekstrak etanol batang evodia terhadap S. mutans dan S. dysenteriae adalah 2%, sedangkan untuk C. albicans adalah 4%. Konsentrasi hambat Minimum ekstrak etanol batang evodia terhadap S. mutans adalah 2%, S. dysenteriae adalah 5%, dan C. albicans adalah 3%.

5.2. Saran

Sebaiknya dilakukan penelitian untuk mengetahui senyawa spesifik yang berkhasiat sebagai antimikroba pada batang dan daun evodia (Euodia ridleyi Horch.) dan aktivitas antimikroba terhadap mikroorganisme patogen lainnya. Serta dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai uji toksisitas dari ekstrak batang dan daun evodia untuk mengetahui dosis yang aman digunakan sebagai alternatif antimikroba.

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Karakteristik Streptococcus mutans

Streptococcus merupakan bakteri berbentuk bulat dengan susunan bentuk rantai.

Bakteri ini ditemukan oleh Billroth (1874). Menurut Dzen dkk., (2003), berdasarkan tipe hemolisis pada lempeng agar darah (blood agar plate), bakteri ini dibedakan menjadi 3 yaitu yang pertama Streptococcus hemolitik alfa (Gambar 2.1.a.) (Partial hemolytic Streptococcus). Koloni Streptococcus ini pada BAP (Blood Agar Plate) memberikan zona hemolisis yang sempit, artinya sel darah merah pada inner zone dari BAP tidak mengalami hemolisis secara komplit. Pada sekitar koloni sering didapatkan warna kehijauan (disebabkan oleh pembentukan

reductans of haemoglobin) (Dzen dkk., 2003). S. mutans (Gambar 2.1.b.)

termasuk ke dalam grup viridans (Antony et al., 2010).

Golongan kedua adalah Streptococcus hemolitik beta (Total Hemolytic

Streptococcus) disebut grup piogenes. Pada BAP bakteri ini dapat menyebabkan

zona hemolisis yang luas pada sekitar koloni. Golongan ketiga Streptococcus hemolitik gamma (Non-Hemolytic Streptococcus). Pada BAP bakteri ini tidak mengadakan hemolisis sama sekali (Dzen dkk., 2003).

Gambar 2.1.a. Koloni Streptococcus pada media agar darah (α-hemolysis)

(Way et al., 2007) b. S. mutans mikroskopis (Yulia, 2006)

Menurut Krieg et al., (2010), taksonomi S. mutans adalah sebagai berikut: Kingdom : Bacteria

Filum : Bacteroidetes

Kelas : Bacteroidia Ordo : Bacteroidales

Famili : Porphyromonadaceae Genus : Streptococcus

Spesies : Streptococcus mutans

2.2. Karakteristik Shigella dysenteriae

Shigella termasuk kedalam golongan bakteri gram negatif (Gambar 2.2.a.),

berbentuk batang, dan non-motil. Shigella terdiri dari empat jenis yaitu

S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii dan S. sonnei. Semua jenis Shigella

menyebabkan diare akut. S. dysenteriae (Gambar 2.2.b.) dikenal sebagai Shiga bacillus, berbeda dengan yang lainnya karena menghasilkan sitotoksin (Shiga toksin), sehingga menyebabkan penyakit yang bersifat fatal apabila dibandingkan dengan spesies Shigella yang lain, dan lebih resisten terhadap antimikroba (Legros dan Pierce, 2005).

Gambar 2.2.a. Hasil pewarnaan gram S. dysenteriae (Santoso dkk., 2009) b. Koloni S. dysenteriae pada media Nutrient Agar (Roekistiningsih dkk., 2010)

Menurut Krieg et al., (2010), taksonomi S. dysenteriae adalah sebagai berikut:

Kingdom : Bacteria

Filum : Verrucomicroba Kelas : Opitutae

Ordo : Opitutales

Famili : Enterobacteriaceae Genus : Shigella

Spesies : Shigella dysenteriae

2.3. Karakteristik Candida albicans

Candida albicans merupakan fungi dimorfik yang sering ditemukan pada mulut,

dan vagina (Irianto, 2002). C. albicans juga merupakan fungi patogen oportunistik yang menyebabkan berbagai penyakit pada manusia seperti sariawan, lesi pada kulit, vulvavaginitis, candiduria dan gastrointestinal candidiasis. Mekanisme infeksi C. albicans sangat kompleks termasuk adhesi dan invasi, perubahan morfologi dari bentuk sel khamir ke bentuk filamen (hifa), pembentukan biofilm dan penghindaran dari sel-sel imunitas inang. Kemampuan C. albicans untuk melekat pada sel inang merupakan faktor penting pada tahap permulaan kolonisasi

dan infeksi. Perubahan fenotip menjadi bentuk filamen memungkinkan

C. albicans untuk melakukan penetrasi ke epithelium dan berperan dalam infeksi

dan penyebaran C. albicans pada sel inang. C. albicans juga dapat membentuk biofilm yang diduga terlibat dalam penyerangan sel inang dan berhubungan dengan resistensi terhadap antifungi (Kusumaningtyas, 2009).

Candida memperbanyak diri dengan membentuk tunas, dan spora jamur

disebut blastospora atau sel ragi (sel khamir) (Gambar 2.3.b.). Jamur ini membentuk hifa semu (pseudohypha) yang sebenarnya adalah rangkaian blastospora, yang juga dapat bercabang-cabang. Berdasarkan bentuk-bentuk jamur tersebut maka dikatakan bahwa Candida menyerupai ragi (yeast-like), tidak membentuk simpai dan tidak berpigmen serta mudah tumbuh pada medium dengan variasi pH yang luas (Suprihatin, 1982).

Candida albicans dapat menginfeksi berbagai bagian tubuh, meliputi

mulut, vagina, kulit dan paru-paru. Organisme ini biasanya tampil sebagai sel seperti khamir lonjong yang membiak dengan bertunas. Akan tetapi, mungkin juga terlihat pada daerah yang terinfeksi hifa berbentuk benang dan pseudohifa (yang terdiri atas sel-sel khamir memanjang yang tetap menempel satu sama lain). Khamir ini mudah tumbuh pada suhu 25 sampai 37º C pada agar glukosa Sabauraud (Volk dan Wheeler, 2006).

Koloni C. albicans (Gambar 2.3.a.) berwarna krem, pucat, dan halus. Laju pertumbuhan yang cepat dalam tiga hari. Pada agar tepung jagung suhu 25ºC, memiliki karakteristik dengan adanya pseudohypha yang terlihat pada koloninya,

besar, berdinding tebal, terminal, dan memiliki chlamydospore (Chander, 2002). Ukuran sel C. albicans 2-5µ x 3-6 µ hingga 2-5,5 µ x 5-28,5 µ tergantung pada umurnya. Spesies Candida dapat dibedakan berdasarkan kemampuan fermentasi dan asimilasi terhadap larutan glukosa, maltosa, sakrosa, galaktosa dan laktosa (Suprihatin, 1982). Penambahan 0,1 g klorida tetrazolium triphenyl (TTC) untuk 100 ml medium sangat memudahkan identifikasi dari genus Candida karena koloni ragi menghasilkan warna yang berbeda seperti putih, mawar merah dan violet (Safitri dan Sinta, 2010). Sedangkan pada agar CHROM candida, koloni

C. albicans adalah memiliki karakteristik dengan koloni berwarna hijau muda ke

hijau kebiruan (Chander, 2002).

Menurut Alexopoulos dan Mims (1979), taksonomi C. albicans adalah sebagai berikut:

Kingdom : Fungi

Divisi : Amastigomycota Sub Divisi : Deuteromycotina Kelas : Deuteromycetes Ordo : Cryptococcales Famili : Cryptococcaceae Genus : Candida

Spesies : Candida albicans

Gambar 2.3.a. Koloni C. albicans pada media Salt-Dextrose Complete (SDC) b. Sel C. albicans secara mikroskopis (Berman dan Peter, 2002)

2.4. Patogenitas Streptococcus mutans

Streptococcus mutans merupakan bakteri dominan penyebab karies pada gigi.

Karies gigi (kavitasi) (Gambar 2.4.) adalah daerah yang membusuk di dalam gigi, terjadi akibat suatu proses bertahap yang dapat melarutkan email (permukaan gigi

sebelah luar yang keras) dan terus berkembang ke bagian dalam gigi sehingga pada akhirnya menyebabkan gigi tanggal (Yulia, 2006).

Gigi merupakan tempat bagi menempelnya mikroba. Ada dua spesies bakteri yang dijumpai berasosiasi dengan permukaan gigi yaitu S. sanguins dan

S. mutans yang merupakan penyebab utama kerusakan gigi, atau pembusuk gigi.

Tertahannya kedua spesies ini pada permukaan gigi merupakan akibat sifat adhesif baik dari glikoprotein liur maupun dari polisakarida bakteri. Sifat menempel ini sangat penting bagi kolonisasi bakteri di dalam mulut. Glikoprotein liur mampu menyatukan bakteri-bakteri tertentu dan berikatan pada permukaan gigi. S. mutans maupun S. sanguins menghasilkan polisakarida ekstraseluler yang disebut dekstran yang bekerja sebagai zat perekat, mengikat sel-sel bakteri menjadi satu dan juga melekatkan diri pada permukaan gigi. Tertahannya bakteri dapat juga terjadi karena terperangkapnya secara mekanis di celah-celah gusi atau di dalam lubang atau retakan gigi (Irianto, 2002).

Gambar 2.4. Karies Gigi (Hale, 2004)

2.5. Patogenitas Shigella dysenteriae

Penyakit yang disebabkan oleh Shigella ditularkan melalui makanan atau air. Organisme Shigella menyebabkan disentri basiler yang menghasilkan respons inflamasi pada kolon melalui enterotoksin dan invasi bakteri. Secara klasik,

Shigellosis timbul dengan gejala adanya nyeri abdomen, demam, BAB berdarah,

dan feses berlendir. Gejala awal terdiri dari demam, nyeri abdomen dan diare cair tanpa darah, kemudian feses berdarah setelah 3-5 hari kemudian. Lamanya gejala rata-rata pada orang dewasa adalah 7 hari, pada kasus yang lebih parah dapat terjadi selama 3-4 minggu. Shigellosis kronis dapat menyerupai kolitis ulseratif, dan status karier kronis dapat terjadi (Zein dkk., 2004).

DAFTAR ISI

Halaman

Persetujuan i

Pernyataan ii

Penghargaan iii

Abstrak iv

Abstract v

Daftar isi vi

Daftar Gambar viii

Daftar Lampiran x

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang 1

1.2. Permasalahan 2

1.3. Tujuan Penelitian 3

1.4. Hipotesis 3

1.5. Manfaat Penelitian 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Karakteristik Streptococcus mutans 4 2.2. Karakteristik Shigella dysenteriae 5

2.3. Karakteristik Candida albicans 6

2.4. Patogenitas Streptococcus mutans 7 2.5. Patogenitas Shigella dysenteriae 8

2.6. Patogenitas Candida albicans 9

2.7. Evodia (Euodia ridleyi Horch.) 10

2.8. Metode Ekstraksi Tanaman 11

2.9. Metabolit Sekunder 12

2.9.1. Terpenoid 12

2.9.2. Steroid 13

2.9.3. Flavonoid 13

2.9.4. Alkaloid 13

2.9.5. Saponin 13

BAB 3. BAHAN DAN METODE

3.1. Waktu dan Tempat 14

3.2. Alat dan Bahan 14

3.3. Susunan Rancangan Penelitian 14

3.4. Prosedur 15

3.4.1. Preparasi Sampel Tumbuhan Uji 15 3.4.2. Ekstraksi Etanol Batang dan Daun Evodia dengan

Metode Maserasi

3.4.3. Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Batang dan Daun Evodia

16 3.4.4. Peremajaan Biakan Murni dan Penyiapan Biakan

Mikroba uji

17 3.4.5. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Batang dan Daun

Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans

17

3.4.6. Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang dan Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S.dysenteriae dan C. albicans

18

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Skrining Fitokimia Batang dan Daun Evodia (Euodia ridleyi Horch.)

19 4.2. Uji Antagonis Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap

Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans

20 4.3. Uji Antagonis Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap

Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans

25 4.4. Uji Kontrol Positif Kloramfenikol (30 µg), Nistatin

(20,6 µg) dan Kontrol Negatif (DMSO) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans

30

4.5. Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans

33

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan 36

5.2. Saran 36

DAFTAR GAMBAR

Nomor

Gambar Judul Halaman

2.1. a. Koloni Streptococcus pada Media Agar Darah (α-hemolysis)

4

b. S. mutans mikroskopis 4

2.2. a. Hasil Pewarnaan Gram S. dysenteriae 5

b. Koloni S. dysenteriae pada Media Nutrient Agar 5 2.3. a. Koloni C. albicans pada Media Salt Dextrose Complete

(SDC)

7

b. Sel C. albicans mikroskopis 7

2.4. Karies Gigi 8

2.5. Candidiasis Mukosa 10

2.6. a. Daun Evodia 11

b. Bunga Evodia 11

4.1. a. Zona Hambat Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans setelah 24 jam inkubasi dengan Konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

22

b. Zona Hambat Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. dysenteriae setelah 24 jam inkubasi dengan Konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

22

c. Zona Hambat Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan C. albicans setelah 48 jam inkubasi dengan Konsentrasi a= 5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

22

4.2. Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S.mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari 1, 2, dan 3

22

4.3. a. Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans setelah 24 jam inkubasi dengan Konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

b. Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. dysenteriae setelah 24 jam inkubasi dengan konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

26

c. Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan C. albicans setelah 48 jam inkubasi dengan Konsentrasi a=5%, b=10%, c=20%, d=40% dan e=0% pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

26

4.4. Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari 1, 2 dan 3

27

4.5. a. Zona Hambat Kontrol DMSO (a) dan Kloramfenikol 30µg (b) terhadap Pertumbuhan S. mutans setelah 24 jam inkubasi pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

31

b. Zona Hambat Kontrol DMSO (a) dan Kloramfenikol 30µg (b) terhadap Pertumbuhan S. dysenteriae setelah 24 jam inkubasi pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

31

c. Zona Hambat DMSO (a) dan Nistatin 20,6 µg (b) terhadap Pertumbuhan C. albicans setelah 48 jam inkubasi pada Media Mueller Hinton Agar pada suhu 37 º C

31

4.6. Diameter Zona Hambat Kontrol Positif Kloramfenikol (30 µg), Nistatin (20,6 µg) dan Kontrol Negatif (DMSO) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans pada Hari 1, 2 dan 3

32

4.7. Diameter Zona Hambat Minimum Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari 1, 2, dan 3

34

4.8. Diameter Zona Hambat Minimum Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans Hari 1, 2 dan 3

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Lampiran

Judul Halaman

1. Ekstraksi Etanol Batang dan Daun Evodia dengan Metode Maserasi

42 2. Peremajaan Biakan Murni dan Penyiapan Mikroba

Uji

43 3. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Batang dan Daun

Evodia (Euodia ridleyi Horch.) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans

44

4. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari I

45

5. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari III

46

6. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari I

47

7. Pengamatan Zona Hambat (mm) Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari III

48

8. Pengamatan Zona Hambat (mm) Kontrol Positif Kloramfenikol (30 µ g), Nistatin (20,6 µg) dan Kontrol Negatif (DMSO) terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari I, II dan III

49

9. Pengamatan Zona Hambat Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang Evodia dan Daun Evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari I

50

10. Pengamatan Zona Hambat Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang Evodia dan Daun Evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari II

11. Pengamatan Zona Hambat Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Batang Evodia dan Daun Evodia terhadap pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae, dan C. albicans Hari III

52

12. Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Batang Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans

53

13. Hasil Uji Statistik Ekstrak Etanol Daun Evodia terhadap Pertumbuhan S. mutans, S. dysenteriae dan C. albicans