bekerja pada luasan lubang di media tersebut, sedangkan ekstrak pada media cair akan bekerja di seluruh media cair yang luasannya lebih besar.
4.4 Senyawa Fitokimia
Uji fitokimia dilakukan terhadap ekstrak yang menunjukkan aktivitas antibakteri terbaik pada uji sebelumnya, yaitu ekstrak etil asetat hasil maserasi
bertingkat. Pengujian fitokimia dilakukan untuk menentukan senyawa yang bertanggung jawab atas aktivitas antibakteri pada ekstrak etil asetat kulit batang
api-api. Senyawa bioaktif yang diuji hanya terbatas pada senyawa yang berpotensi memiliki aktivitas antimikroba yaitu alkaloid, steroidtriterpenoid,
flavonoid, fenol hidrokuinon, saponin dan tanin. Hasil uji fitokimia dapat dilihat pada Tabel 3 dan Lampiran 3.
Tabel 3. Hasil identifikasi kandungan fitokimia ekstrak etil asetat kulit batang api- api A. marina hasil maserasi bertingkat
Uji fitokimia Hasil uji
warna Keterangan
Standar warna a.
Alkaloid Wagner
Meyer Dragendorff
- -
- Tidak terbentuk
endapan Endapan cokelat
Endapan putih kekuningan Endapan merah sampai
jingga
b. SteroidTriterpenoid
+ Biru
Merah menjadi biru atau hijau
c. Flavonoid
- Hijau ekstrak
tidak larut Merah, kuningjingga pada
lapisan amil alkohol d.
Saponin -
Tidak terbentuk busa
Terbentuk busa stabil selama 30 menit
e. Fenol hidrokuinon
+ Kehijauan
Hijau hijau biru f.
Tanin -
Jingga Biru kehitaman
Keterangan + : terdeteksi
- : tidak terdeteksi
Tabel 3 menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat kulit batang api-api hasil maserasi bertingkat memiliki kandungan senyawa steroidtriterpenoid dan fenol.
Steroidtriterpenoid positif berada dalam ekstrak etil asetat, dilihat dari kepekatan warna hijau yang terbentuk. Uji penentuan senyawa steroid dan triterpenoid
didasarkan pada reaksi Liebermann-Burchard, dimana warna hijau atau biru akan terbentuk jika terdapat senyawa tersebut. Fenol hidrokuinon terdapat pada ekstrak
etil asetat, ditunjukkan dengan warna kehijauan. Keberadaan senyawa fenol dan
steroidtriterpenoid pada ekstrak etil asetat mengindikasikan bahwa kedua senyawa tersebut berperan dalam aktivitas antimikroba.
Terpenoid terdiri atas beberapa macam senyawa mulai dari komponen minyak atsiri yaitu monoterpena dan seskuiterpena yang mudah menguap,
diterpena yang lebih sukar menguap, hingga senyawa yang tidak menguap yaitu triterpenoid dan sterol. Triterpenoid dapat dipilah menjadi triterpena sebenarnya,
steroid, saponin dan glikosida jantung. Steroid merupakan salah satu kelompok senyawa dari triterpenoid. Steroid adalah senyawa yang berbentuk padatan kristal
yang memiliki warna putih dan dapat berbentuk jarum kecil, lembaran, lempengan atau partikel amorf tergantung pelarut yang digunakan dalam proses kristalisasi
Harborne 1987. Beberapa penelitian sebelumnya sudah menunjukkan adanya senyawa
steroid dan triterpenoid pada tumbuhan api-api A. marina. Zhu et al. 2009 melaporkan bahwa steroid dan triterpenoid ditemukan pada kulit batang, daun,
bunga dan buah A. marina. Penelitian yang dilakukan oleh Yusuf 2010 berhasil mengisolasi dan menentukan struktur molekul senyawa triterpenoid dari kulit
batang api-api. Ravikumar et al. 2011 pada penelitiannya tentang antimikroba, menyatakan bahwa A. marina mengandung terpenoid.
Senyawa triterpenoid dan steroid dalam ekstrak etil asetat kulit batang api- api diduga memiliki aktivitas antimikroba. Pernyataan ini didukung oleh
Kiplimo et al. 2011 yang melaporkan aktivitas antimikroba dari senyawa triterpenoid terhadap beberapa jenis bakteri.
Senyawa triterpenoid dan steroid diketahui memiliki aktivitas antimikroba Doughari 2012. Mekanisme aksi senyawa triterpenoid terutama adalah
mengganggu kekuatan membran sel fungi Ahmad et al. 2010. Triterpenoid dapat menyebabkan kerusakan integritas membran dengan cara membentuk
komplek dengan sterol pada membran fungi Dudek 1950.
Menurut Cowan 1999, mekanisme penghambatan bakteri oleh senyawa steroidtriterpenoid diduga
dengan cara merusak membran sel bakteri.
Fenol merupakan metabolit sekunder dari tumbuhan yang cenderung mudah larut air. Hal tersebut disebabkan oleh fenol yang sering berikatan dengan
gula sebagai glikosida. Beberapa golongan bahan polimer penting dalam
tumbuhan seperti tanin adalah senyawa polifenol dan kadang satuan fenolik dijumpai pada protein, alkaloid dan diantara terpenoid Harborne 1987.
Bandaranayake 2002 menyebutkan bahwa senyawa fenolik dapat ditemukan pada mangrove, termasuk pada A. marina.
Senyawa aktif lain yang mendukung kemampuan antibakteri ekstrak etil asetat pada penelitian ini yaitu senyawa fenolik. Senyawa fenolik terbukti
memiliki aktivitas antimikroba. Pernyataan ini didukung oleh penelitian Haq et al. 2011 yang mengekstrak senyawa fenolik dari Bruguiera gymnorrhiza,
fenol terbukti memiliki aktivitas antioksidan dan antimikroba
.
Senyawa fenol mampu mengkoagulasikan protein dan merusak membran sel dengan cara menurunkan tegangannya Waluyo 2008. Cowan 1999
melaporkan bahwa mekanisme aktivitas antimikroba dari fenol meliputi adsorpsi dan gangguan pada membran mikroba, interaksi dengan enzim dan substrat, serta
penghilangan besi. Maris 1995 menyatakan bahwa fenol bekerja secara spesifik pada membran sel dan enzim intrasitoplasma dengan cara membentuk kompleks
yang tidak stabil. Salah satu target penting dari senyawa antibakteri adalah dinding sel
Brock dan Madigan 1991. Kemampuan fenol dalam mengendapkan atau mendenaturasi protein dapat menggangu dinding sel bakteri yang tersusun dari
protein. Komponen utama dinding sel bakteri adalah peptidoglikan Pelczar dan Chan 1986.
Alkaloid adalah salah satu kelompok metabolit sekunder yang paling penting berdasarkan jumlahnya pada tumbuhan dan aktivitas farmakologinya.
Umumnya alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya merupakan bagian dari sistem siklik. Banyak
alkaloid bersifat terpenoid Harborne 1987. Menurut Perez-Amador et al. 2007 senyawa ini tersebar luas pada tumbuhan yang dipengaruhi oleh lokasi tumbuh
tanaman dan kondisi lingkungan. Ravikumar et al. 2011 menemukan ekstrak etanol daun A. marina mengandung alkaloid. Pada penelitian ini, senyawa
alkaloid tidak terdeteksi. Hal ini mengindikasikan bahwa pada senyawa alkaloid tidak larut pada etil asetat.
Flavonoid umumnya terdapat pada tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida. Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran, jarang sekali
dijumpai hanya flavonoid tunggal dalam jaringan tumbuhan Harborne 1987. Pada penelitian Ravikumar et al. 2011 ditemukan bahwa flavonoid terkandung
dalam jumlah banyak pada ekstrak etanol daun A. marina, namun pada penelitian ini tidak terdeteksi. Flavonoid bersifat larut air sehingga diduga kelarutannya
kecil dalam etil asetat semi-polar yang mengakibatkan tidak terdeteksinya senyawa ini pada ekstrak etil asetat kulit batang api-api hasil maserasi bertingkat.
Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun, serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya membentuk busa dan
menghemolisis sel darah Harborne 1987. Menurut Francis et al. 2001 nama saponin berasal dari kemampuannya untuk berbentuk busa mirip sabun yang stabil
dalam larutan encer. Pada uji fitokimia Tabel 3 tidak terdeteksi senyawa saponin dalam ekstrak etil asetat kulit batang api-api hasil maserasi bertingkat
yang ditandai dengan tidak terbentuknya busa pada larutan. Hasil serupa didapat oleh Abeysinghe et al. 2006 yang melaporkan tidak ditemukannya saponin pada
ekstrak daun A. marina. Menurut Cowan 1999, tanin secara umum ditemukan pada semua bagian
tumbuhan. Tanin dibagi dalam dua kelompok yaitu tanin hidrolisis dan tanin kondensasi. Clinton 2009 menyatakan bahwa tanin memiliki fungsi
perlindungan pada kulit di batang dan akar, atau lapisan luar lain pada tumbuhan. Senyawa ini membentuk kompleks yang kuat dengan protein, pati dan
makromolekul lain. Tumbuhan mangrove diketahui memiliki kandungan tanin yang tinggi, hal
ini didukung oleh penelitian Hong et al. 2011 yang mengekstrak tanin hidrolisis dari mangrove Rhizopora apiculata. Senyawa tanin tidak terdeteksi dalam ekstrak
etil asetat kulit batang api-api hasil maserasi bertingkat pada uji fitokimia. Penggunaan jaringan kering untuk ekstraksi tanin akan menyebabkan hasil
tanin yang agak berkurang karena terjadinya pelekatan tanin pada tempatnya di dalam sel. Umumnya tanin dapat terekstrak dengan asam panas Harborne 1987.
Pengeringan kulit batang api-api sebelum ekstraksi pada penelitian ini
menyebabkan senyawa tanin melekat pada jaringan sehingga sulit terekstrak oleh etil asetat pada suhu ruang yang menyebabkan senyawa tanin tidak terdeteksi.
4.5 Kandungan Total Fenol
