Uji Aktivitas Antioksidan dan Penentuan Kandungan Fenolik Total Pada Pakkat (Calamus caesius Blume.)
Lampiran 1. Identifikasi Tumbuhan
36
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Sampel yang digunakan
1. a
b
.
2. a
b
3. a
b
Keterangan Gambar :
1. a = Rotan muda segar
b = Pakkat segar
2. a = Rotan muda rebus
b = Pakkat rebus
3. a = Rotan muda bakar
b = Pakkat bakar
37
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Tumbuhan Rotan (Calamus caesius Blume.)
Rotan Muda
(Pakkat)
38
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Gambar Alat Spektrofotometer UV-Visibel (Shimadzu)
39
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Bagan Alir Persiapan pada Pakkar Segar
Rotan muda
Dikupas kulit luar
Diambil bagian dalam
Dicuci bersih
Ditiriskan airnya sampai kering
Ditimbang 100 gram
Dihaluskan dengan blender
Sampel pakkat segar
40
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Bagan Alir Persiapan pada Pakkat Rebus
Rotan muda
Dikupas kulit luar
Diambil bagian dalam
Dicuci bersih
Ditiriskan airnya sampai kering
Ditimbang 100 gram
Direbus air sebanyak 500 ml sampai
mendidih
Dimasukkan pakkat dibiarkan 15 menit
Didinginkan
Ditiriskan sampai kering
Dihaluskan dengan blender
Sampel pakkat rebus
41
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Bagan Alir Persiapan pada Pakkat Bakar
Rotan muda
Dibakar bersama kulit luarnya ± 15 menit
sampai kulit luarnya berwarna kehitaman
Didinginkan
Dikupas kulit luarnya
Diambil bagian dalam
Dicuci bersih
Ditiriskan sampai kering
Ditimbang sebanyak 100 gram
Dihaluskan dengan blender
Sampel pakkat bakar
42
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Bagan Alir Pembuatan Larutan Blanko DPPH 0,5 mM, Penentuan
Panjang Gelombang Maksimum, dan Waktu Kerja
8.1 Penentuan panjang geombang maksimum
9,8 mg Serbuk DPPH
Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml
Dilarutkan dengan metanol
Dicukupkan dengan methanol sampai garis
tanda
Larutan Blanko DPPH 0,5 mM
(C = 200 μg/ml)
Dipipet 5 ml
Dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml
Dicukupkan dengan methanol sampai garis
tanda ( C= 40 ppm)
Diukur pada serapan pada panjang gelombang
400-800 nm
Hasil Serapan Maksimum
8.2 Penentuan Waktu Kerja
Larutan Blanko DPPH 0,5 mM
(C = 200 μg/ml)
Dipipet 5 ml
Dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml
Dicukupkan dengan methanol sampai garis
tanda ( C= 40 ppm)
Diukur serapan pada λ 516 nm setiap menit
selama 80 menit
Hasil Waktu Kerja
43
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Bagan Alir Uji Aktivitas Antioksidan pada Pakkat
Sampel Pakkat (Segar, Rebus, dan Bakar)
Ditimbang seksama 5 gram
Dimasukkan kedalam labu 100 ml
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan dengan alat vortex selama
1 menit
Filtrat Larutan induk Pakat (segar, Rebus, dan Bakar)
konsentrasi 50000 µg/ml
Dipipet sebanyak 0,5 ml, 1 ml, 1,5 ml, dan
2 ml. untuk mendapatkan konsentrasi 50
µg/ml, 2000 µg/ml, 3000 µg/ml, dan 4000
µg/ml
Dimasukkan ke dalam masing-masing labu
tentukur 25 ml.
Ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM
(konsentrasi = 200 µg/ml).
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan kemudian Didiamkan
selama 60 menit
Diukur menggunakan alat spektrofotometer
UV-Visible dengan panjang gelombang 516
nm
Hasil
44
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Bagan Alir Uji Aktivitas Antioksidan pada Vitamin C
25 mg serbuk Vitamin C
Dimasukkan kedalam labu 25 ml
Dilarutkan dengan
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Filtrat Larutan induk Vitamin C
konsentrasi 1000 µg/ml
Dipipet sebanyak 0,05 ml; 0,1 ml; 0,15 ml;
dan 0,2 ml. untuk mendapatkan konsentrasi
2 µg/ml, 4 µg/ml, 6 µg/ml, dan 8 µg/ml
Dimasukkan ke dalam masing-masing labu
tentukur 25 ml.
Ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM
(konsentrasi = 200 µg/ml).
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan kemudian Didiamkan
selama 60 menit
Diukur menggunakan alat spektrofotometer
UV-Visible dengan panjang gelombang 516
nm
Hasil
45
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Bagan Alir Pembuatan Larutan Induk Asam Galat, Penentuan
Panjang Gelombang Maksimum, Waktu Kerja, Dan Standar
Kurva Kaibrasi Asam Galat
10 mg serbuk Asam Galat
Dimasukkan
kedalam
labu
tentukur 10 ml
Dilarutkan dengan metanol
Diaddkan sampai garis tanda
Larutan Induk Asam Galat
(LIAG) Konsentrasi 1000 µg/ml
• Dipipet 0,5 ml LIAG
• Dipipet 0,5 ml LIAG
• Dimasukkan dalam
labu tentukur 10 ml
• Ditambahkn 7,5 ml
akuadest dan 0,5 ml
Folin-Ciocalteu
• Kemudian dihomogenkan dengan alat
vortex selama 1
menit lalu didiamkan
• Ditambahkan 1,5 ml
natrium
karbonat
20 %
• Diukur serapan pada
panjang gelombang
400 – 800 nm
• Dimasukkan dalam
labu tentukur 10 ml
• Ditambahkn 7,5 ml
akuadest dan 0,5 ml
Folin-Ciocalteu
• Kemudian dihomogenkan dengan alat
vortex selama 1
menit lalu didiamkan
• Ditambahkan 1,5 ml
natrium
karbonat
20 %
• Diukur serapan pada
panjang gelombang
maksimum 775 nm
Serapan Maksimum
• Dipipet sebanyak 0,1 ml;
0,2 ml; 0,3 ml; 0,4 ml;
dan 0,5 ml LIAG kedalam labu tentukur
10 ml untuk mendapatkan
konsentrasi 10 µg/ml,
20 µg/ml, 30 µg/ml,
40 µg/ml dan 50 µg/ml.
• Ditambahkn
7,5
ml
akuadest dan
0,5 ml
Folin-Ciocalteu
• Kemudian dihomogenkan
dengan alat vortex selama
1 menit lalu didiamkan
• Ditambahkan 1,5 ml
natrium karbonat 20%
• Diukur serapan pada
panjang gelombang maksimum 775 nm
Waktu Kerja
Persamaan Regresi
46
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Bagan Alir Penentuan Kandungan Fenolik Total pada Pakkat
Sampel Pakkat (Segar, Rebus, dan Bakar)
Ditimbang seksama 50 mg
Dimasukkan kedalam labu 50 ml
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan dengan alat vortex selama
1 menit
Filtrat Larutan induk Pakat (segar, Rebus, dan Bakar)
konsentrasi 1000 µg/ml
Dipipet 0,5 ml larutan induk asam galat
(50 µg/ml)
Dimasukkan dalam labu tentukur 10 ml
Ditambahkan 7,5 ml akuadest dan 0,5 ml
Folin-Ciocalteu
Kemudian dihomogenkan dengan alat
vortex selama 1 menit lalu didiamkan
Ditambahkan 1,5 ml natrium karbonat 20%
Diukur serapan pada panjang gelombang
maksimum 775 nm
Hasil
47
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Hasil Pengukuran Waktu Kerja Larutan DPPH
Time
(Minute)
0.0000
1.0000
2.0000
3.0000
4.0000
5.0000
6.0000
7.0000
8.0000
9.0000
10.0000
11.0000
12.0000
13.0000
14.0000
15.0000
16.0000
17.0000
18.0000
19.0000
20.0000
21.0000
22.0000
23.0000
24.0000
25.0000
26.0000
27.0000
28.0000
29.0000
30.0000
31.0000
32.0000
33.0000
34.0000
35.0000
36.0000
37.0000
38.0000
39.0000
Raw
Data..
0.9002
0.8991
0.8979
0.8961
0.8950
0.8931
0.8912
0.8904
0.8900
0.8887
0.8873
0.8856
0.8844
0.8835
0.8831
0.8819
0.8798
0.8788
0.8782
0.8762
0.8751
0.8738
0.8724
0.8707
0.8700
0.8676
0.8661
0.8643
0.8624
0.8607
0.8594
0.8574
0.8557
0.8538
0.8516
0.8501
0.8501
0.8487
0.8479
0.8476
48
Universitas Sumatera Utara
40.0000
41.0000
42.0000
43.0000
44.0000
45.0000
46.0000
47.0000
48.0000
49.0000
50.0000
51.0000
52.0000
53.0000
54.0000
55.0000
56.0000
57.0000
58.0000
59.0000
60.0000
61.0000
62.0000
63.0000
64.0000
65.0000
66.0000
67.0000
68.0000
69.0000
70.0000
71.0000
72.0000
73.0000
74.0000
75.0000
76.0000
77.0000
78.0000
79.0000
80.0000
0.8471
0.8470
0.8463
0.8464
0.8463
0.8451
0.8438
0.8423
0.8412
0,8397
0.8383
0.8369
0.8355
0.8347
0.8328
0.8315
0.8298
0.8291
0.8275
0.8253
0.8253
0.8253
0.8253
0.8225
0.8210
0.8183
0.8164
0.8147
0.8131
0.8123
0.8114
0.8104
0.8095
0.8083
0.8075
0.8062
0.8050
0.8037
0.8027
0.8019
0.8002
49
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
50
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. Contoh Perhitungan Persen Pemerangkapan dan Perhitungan Nilai
IC50
15.1 Perhitungan Persen Pemerangkapan Pakkat Segar
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
1000
3
2000
4
3000
5
4000
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,8546
0,6633
0,5185
0,3882
0,2417
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 1000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,6633
x 100%
0,8546
= 22,46 %
2. Konsentrasi 2000µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,5185
x 100%
0,8546
= 39,39 %
3. Konsentrasi 3000µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,3882
x 100%
0,8546
= 54,62 %
4. Konsentrasi 4000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,2417
x 100%
0,8546
= 71,74 %
51
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Pakkat segar
X
Y
0
0
1000
22,45
2000
39,24
3000
56,36
4000
72,09
ΣX = 10000
ΣY = 190,14
Y = 38,028
X = 2000
XY
0
22450
78480
169080
288360
X2
0
1000000
4000000
9000000
16000000
ΣXY = 558370
ΣX2 = 30000000
X = Konsentrasi (μg/ml)
Keterangan:
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(558370) − (10000)(190,14) / 5
(30000000) − (10000) 2 / 5
=
178090
10000000
= 0,01789
b = Y − aX
= 38,028 – (0,01789)(2000)
= 2,41
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,01789x + 2,41
Nilai IC50 = Y = 0,01789x + 2,41
50 = 0,01789x +8,7398
X = 2672,24 µg/ml
IC50 = 2672,24 µg/ml
52
Universitas Sumatera Utara
15.2 Perhitungan Persen Pemerangkapan Pakkat Rebus
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
1000
3
2000
4
3000
5
4000
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,8927
0,7524
0,6900
0,5462
0,4167
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 1000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,7524
x 100%
0,8927
= 15,71 %
2. Konsentrasi 2000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,6900
x 100%
0,8927
= 22,70 %
3. Konsentrasi 3000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,5462
x 100%
0,8927
= 38,81 %
4. Konsentrasi 4000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,4167
x 100%
0,8927
= 53,32 %
53
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Pakkat Rebus
X
Y
0
0
1000
15,71
2000
22,68
3000
38,80
4000
53,31
ΣX = 10000
ΣY = 130,51
Y = 26,102
X = 2000
Keterangan:
XY
0
15710
45360
116409
213268
X2
0
1000000
4000000
9000000
16000000
ΣXY = 390747
ΣX2 = 30000000
X = Konsentrasi (μg/ml)
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(390747) − (10000)(130,51) / 5
(30000000) − (10000) 2 / 5
=
129727
10000000
= 0,0129727
b = Y − aX
= 26,102 – (0,0129727)(2000)
= 0,162
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0129727x + 0,162
Nilai IC50 = Y = 0,0129727x + 0,162
50 = 0,0129727x + 0,162
X = 3841,76 µg/ml
IC50 = 3841,76 µg/ml
54
Universitas Sumatera Utara
15.3 Perhitungan Persen Pemerangkapan Pakkat Bakar
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
1000
3
2000
4
3000
5
4000
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,7888
0,3441
0,2312
0,1443
0,0302
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 1000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,3441
x 100%
0,7888
= 56,36 %
2. Konsentrasi 2000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,46085
x 100%
0,7888
= 70,68 %
3. Konsentrasi 3000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,1443
x 100%
0,7888
= 81,70 %
4. Konsentrasi 4000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,0302
x 100%
0,7888
= 96,16 %
55
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Pakkat Bakar
X
Y
0
0
1000
56,37
2000
70,66
3000
81,54
4000
95,90
ΣX = 10000
ΣY = 304,492
Y = 60,898
X = 2000
Keterangan:
XY
0
56377
141330
244626
383632
X2
0
1000000
4000000
9000000
16000000
ΣXY = 825965
ΣX2 = 30000000
X = Konsentrasi (μg/ml)
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(825965) − (10000)(304,492) / 5
(30000000) − (10000) 2 / 5
=
216981
10000000
= 0,0216981
b = Y − aX
= 60,898 – (0,216981)(2000)
= 17,5018
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0216981x + 17,5018
Nilai IC50 = Y = 0,0216981x + 17,5018
50 = 0,0216981x + 17,5018
X = 1497,744 µg/ml
IC50 = 1497,74 µg/ml
56
Universitas Sumatera Utara
15.4 Perhitungan Persen Pemerangkapan Vitamin C
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
2
3
4
4
6
5
8
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,7863
0,6843
0,4051
0,2629
0,1651
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 2 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,6843
x 100%
0,7863
= 12,97 %
2. Konsentrasi 4 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,4051
x 100%
0,7863
= 48,86 %
3. Konsentrasi 6 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,2629
x 100%
0,7863
= 66,52 %
4. Konsentrasi 8 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,1651
x 100%
0,7863
= 79,17 %
57
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Vitamin C
X
Y
0
0
2
12,97
4
48,35
6
66,54
8
79,18
ΣX = 20
ΣY = 207,058
Y = 41,4117
X = 4
XY
0
25,9566
193,4
399,2898
633,4536
X2
0
4
16
36
64
ΣXY = 1252,1
ΣX2 = 120
X = Konsentrasi (μg/ml)
Keterangan:
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(1252,1) − (20)(207,058) / 5
(120) − (20) 2 / 5
=
423,8668
40
= 10,5967
b = Y − aX
= 41,4117 – (10,5967)(4)
= - 0,9751
Jadi, persamaan garis regresi Y = 10,5967x – 0,9751
Nilai IC50 = Y = 10,5967x – 0,9751
50 = 10,5967x – 0,9751
X = 4,81 µg/ml
IC50 = 4,81 µg/ml
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 16. Hasil Pengukuran Waktu Kerja (Operating Time) Larutan Asam
Galat dengan Pereaksi Folin-Ciocalteu dan Natrium Karbonat.
Time
(Minute)
0.0000
1.0000
2.0000
3.0000
4.0000
5.0000
6.0000
7.0000
8.0000
9.0000
10.0000
11.0000
12.0000
13.0000
14.0000
15.0000
16.0000
17.0000
18.0000
19.0000
20.0000
21.0000
22.0000
23.0000
24.0000
25.0000
26.0000
27.0000
28.0000
29.0000
30.0000
31.0000
32.0000
33.0000
34.0000
35.0000
36.0000
37.0000
Raw
Data
0.3354
0.3626
0.3710
0.3744
0.3779
0.3801
0.3844
0.3858
0.3897
0.3921
0.3948
0.3974
0.4003
0.4026
0.4074
0.4080
0.4109
0.4135
0.4163
0.4188
0.4214
0.4240
0.4261
0.4289
0.4306
0.4333
0.4353
0.4377
0.4397
0.4417
0.4442
0.4456
0.4476
0.4495
0.4512
0.4529
0.4549
0.4563
59
Universitas Sumatera Utara
38.0000
39.0000
40.0000
41.0000
42.0000
43.0000
44.0000
45.0000
46.0000
47.0000
48.0000
49.0000
50.0000
51.0000
52.0000
53.0000
54.0000
55.0000
56.0000
57.0000
58.0000
59.0000
60.0000
61.0000
62.0000
63.0000
64.0000
65.0000
66.0000
67.0000
68.0000
69.0000
70.0000
71.0000
72.0000
73.0000
74.0000
75.0000
76.0000
77.0000
78.0000
79.0000
80.0000
0.4578
0.4597
0.4610
0.4625
0.4640
0.4655
0.4669
0.4677
0.4696
0.4708
0.4718
0.4730
0.4743
0.4757
0.4767
0.4776
0.4790
0.4801
0.4812
0.4820
0.4831
0.4840
0.4850
0.4861
0.4869
0.4878
0.4887
0.4896
0.4906
0.4913
0.4923
0.4931
0.4939
0.4947
0.4954
0.4963
0.4970
0.4980
0.4984
0.4996
0.5000
0.5008
0.5011
60
Universitas Sumatera Utara
81.0000
82.0000
83.0000
84.0000
85.0000
86.0000
87.0000
88.0000
89.0000
90.0000
91.0000
92.0000
93.0000
94.0000
95.0000
96.0000
97.0000
98.0000
99.0000
100.0000
101.0000
102.0000
103.0000
104.0000
105.0000
106.0000
107.0000
108.0000
109.0000
110.0000
111.0000
112.0000
113.0000
114.0000
115.0000
116.0000
117.0000
118.0000
119.0000
120.0000
0.5022
0.5030
0.5033
0.5042
0.5050
0.5055
0.5062
0.5072
0.5074
0.5074
0.5074
0.5076
0.5078
0.5080
0.5109
0.5135
0.5163
0.5188
0.5214
0.5240
0.5242
0.5246
0.5261
0.5289
0.5306
0.5333
0.5353
0.5377
0.5397
0.5417
0.5442
0.5456
0.5476
0.5495
0.5512
0.5529
0.5539
0.5543
0.5548
0.5557
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 17. Contoh Perhitungan Kandungan Total Fenolik Pakkat Segar,
Pakkat Rebus, dan Pakkat Bakar
17.1 Kurva Kalibrasi Standar Asam Galat
No.i
1.
2.
3.
4.
5.
6.
n=6
Xi
0,0000
10,0000
20,0000
30,0000
40,0000
50,0000
Yi
0,00009
0,06180
0,13573
0,20044
0,26804
0,33528
XYi
0,0000
0,6180
2,7146
6,012
10,7216
16,764
ƩX = 150
ƩY = 1,00138
Y = 0,166897
ƩXY= 36,8320
X = 25
a=
∑ XY − (∑ X )(∑ Y ) n
2
∑ X 2 − (∑ Y ) n
a=
(36,8320) − (150)(1,00138)/6
(5500) − (150) 2 / 6
a=
11,7957
1750
X2
0,00000
100
400
900
1600
2500
Y2
0,0000000081
0,00381924
0,018422632
0,040176193
0,071845441
0,112412678
ƩX2 = 5500 ƩY2 = 0,246676134
a = 0,00674
b = Y − aX
b = 0,16687 – (0,016911085)(25)
b = - 0,0016
Jadi, persamaan garis regresi adalah
Y = aX + b
Y = 0,00674 X - 0,0016
62
Universitas Sumatera Utara
17.2 Koefisien Korelasi (r)
r=
∑ XY − (∑ X)(∑ Y) n
[(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 /n ][(∑ Y 2 ) − (∑ Y) 2 /n ]
(36,8302) − (150)(1,00138)/6
r=
[(5500) − (150) 2 / 6][(0,246676184) − (1,00138) 2 / 6
r=
11,7957
11,79877
= 0,99974
17.3 Kandungan Total Fenol Pakkat Segar
Rumus perhitungan:
Kadar total fenol =
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Konsentrasi (µg/ml) x Volume (ml)
x Faktor pengenceran
Berat Sampel (g)
Berat Sampel
(g)
0,0506
0,0506
0,0506
0,0506
0,0506
0,0506
Volume Larutan
Sampel (ml)
10
10
10
10
10
10
Faktor
pengenceran
-
Absorbansi
(A)
0,09949
0,09955
0,09959
0,09976
0,09959
0,09959
Pengulangan I:
− Absorbansi = 0,09949
0,09949
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 14,9995 µg/ml
63
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
14,9995 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2964,328 μg/g
= 2,9643mg GAE/g
Pengulangan II:
− Absorbansi = 0,09955
0,09955
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 15,0084 µg/ml
Kadar total fenol
=
15,0084 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2966,086 μg/g
= 2,9661 mg GAE/g
Pengulangan III:
− Absorbansi = 0,09959
0,09959
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 15,0143 µg/ml
Kadar total fenol
15,0143 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2967,252 μg/g
=
= 2,9673 mg GAE/g
Pengulangan IV:
− Absorbansi = 0,09976
0,09976
x
= 0,0067404 x - 0,001631
= 15,0396 µg/ml
64
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
15,0396 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2972,252 μg/g
= 2,9723 mg GAE/g
Pengulangan V:
− Absorbansi = 0,09959
0,09959
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 15,0143 µg/ml
Kadar total fenol
=
15,0143 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2967,252 μg/g
= 2,9673 mg GAE/g
Pengulangan VI:
− Absorbansi = 0,09959
0,09959
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 15,0143 µg/ml
Kadar total fenol
=
15,0143 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2967,252 μg/g
= 2,9673 mg GAE/g
2,9643 + 2,9661 + 2,9673 + 2,9723 + 2,9673 + 2,9673
6
= 2,96743 mg GAE/g
Rata-rata kadar total fenol =
Rata-rata % total fenol
=
2,96743 mg
x 100%
1000 mg
= 0,296743%
65
Universitas Sumatera Utara
17.4 Kandungan Total Fenol Pakkat Rebus
Rumus perhitungan:
Kadar total fenol =
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Konsentrasi (µg/ml) x Volume (ml)
x Faktor pengenceran
Berat Sampel (g)
Berat Sampel
(g)
0,0503
0,0503
0,0503
0,0503
0,0503
0,0503
Volume Larutan
Sampel (ml)
10
10
10
10
10
10
Faktor
pengenceran
-
Absorbansi
(A)
0,05855
0,05820
0,05873
0,05903
0,05890
0,05850
Pengulangan I:
− Absorbansi = 0,05855
0,05855
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 8,9420 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9420 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1777,733 μg/g
= 1,7777 mg GAE/g
Pengulangan II:
− Absorbansi = 0,05820
0,05820
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 8,8738 µg/ml
Kadar total fenol
8,8738 µg/ml x 10 ml
0,0503g
= 1764,174 μg/g
=
= 1,7642 mg GAE/g
66
Universitas Sumatera Utara
Pengulangan III:
− Absorbansi = 0,05873
0,05873
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 8,9524 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9524 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1779,801 μg/g
= 1,7798 mg GAE/g
Pengulangan IV:
− Absorbansi = 0,05903
0,05903
x
= 0,0067404 x - 0,001631
= 8,9969 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9969 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1788,648 μg/g
= 1,7886 mg GAE/g
Pengulangan V:
− Absorbansi = 0,05890
0,05890
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 8,9776 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9776 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1784,811 μg/g
= 1,7848 mg GAE/g
67
Universitas Sumatera Utara
Pengulangan VI:
− Absorbansi = 0,05850
0,05850
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 8,9183 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9183 µg/ml x 10 ml
0,0503g
= 1773,021 μg/g
= 1,7730 mg GAE/g
1,7777 + 1,7642 + 1,7798 + 1,7886 + 1,7848 + 1,7730
6
= 1,7780 mg GAE/g
Rata-rata kadar total fenol =
Rata-rata % total fenol
=
1,7780 mg
x 100%
1000 mg
= 0,17780 %
68
Universitas Sumatera Utara
17.5 Kandungan Total Fenol Pakkat Bakar
Rumus perhitungan:
Kadar total fenol =
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Konsentrasi (µg/ml) x Volume (ml)
x Faktor pengenceran
Berat Sampel (g)
Berat Sampel
(g)
0,0501
0,0501
0,0501
0,0501
0,0501
0,0501
Volume Larutan
Sampel (ml)
10
10
10
10
10
10
Faktor
pengenceran
-
Absorbansi
(A)
0,19975
0,19994
0,20010
0,20055
0,20107
0,20164
Pengulangan I:
− Absorbansi = 0,19975
0,19975
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 29,8740 µg/ml
Kadar total fenol
=
29,8740 µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 5962,874 μg/g
= 5,9629 mg GAE/g
Pengulangan II:
− Absorbansi = 0,19994
0,19994
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 29,9022 µg/ml
69
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
29,9022 µg/ml x 10 ml
0,0501g
= 5968,502 μg/g
= 5,9685 mg GAE/g
Pengulangan III:
− Absorbansi = 0,20010
0,20010
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 29,9259 µg/ml
Kadar total fenol
=
29,9259 µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 5973,235 μg/g
= 5,9732 mg GAE/g
Pengulangan IV:
− Absorbansi = 0,20055
0,20055
x
= 0,0067404 x - 0,001631
= 29,9927 µg/ml
Kadar total fenol
=
29,9927µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 5986,566 μg/g
= 5,9866 mg GAE/g
Pengulangan V:
− Absorbansi = 0,20107
0,20107
x
= 0,0067404 x + 0,001613
= 30,0698 µg/ml
70
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
30,0698µg/ml x 10 ml
0,05301 g
= 6001,956 μg/g
= 6,0019 mg GAE/g
Pengulangan VI:
− Absorbansi = 0,20164
0,20164
x
= 0,0067404 x + 0,001613
= 30,1544 µg/ml
Kadar total fenol
=
30,1544 µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 6018,842 μg/g
= 6,0188 mg GAE/g
5,9629 + 5,9685 + 5,9732 + 5,9866 + 6,0019 + 6.0188
6
= 5,98565 mg GAE/g
Rata-rata kadar total fenol =
Rata-rata % total fenol
=
5,98565 mg
x 100%
1000 mg
= 0,598565 %
71
Universitas Sumatera Utara
36
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Sampel yang digunakan
1. a
b
.
2. a
b
3. a
b
Keterangan Gambar :
1. a = Rotan muda segar
b = Pakkat segar
2. a = Rotan muda rebus
b = Pakkat rebus
3. a = Rotan muda bakar
b = Pakkat bakar
37
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Tumbuhan Rotan (Calamus caesius Blume.)
Rotan Muda
(Pakkat)
38
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Gambar Alat Spektrofotometer UV-Visibel (Shimadzu)
39
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Bagan Alir Persiapan pada Pakkar Segar
Rotan muda
Dikupas kulit luar
Diambil bagian dalam
Dicuci bersih
Ditiriskan airnya sampai kering
Ditimbang 100 gram
Dihaluskan dengan blender
Sampel pakkat segar
40
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Bagan Alir Persiapan pada Pakkat Rebus
Rotan muda
Dikupas kulit luar
Diambil bagian dalam
Dicuci bersih
Ditiriskan airnya sampai kering
Ditimbang 100 gram
Direbus air sebanyak 500 ml sampai
mendidih
Dimasukkan pakkat dibiarkan 15 menit
Didinginkan
Ditiriskan sampai kering
Dihaluskan dengan blender
Sampel pakkat rebus
41
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Bagan Alir Persiapan pada Pakkat Bakar
Rotan muda
Dibakar bersama kulit luarnya ± 15 menit
sampai kulit luarnya berwarna kehitaman
Didinginkan
Dikupas kulit luarnya
Diambil bagian dalam
Dicuci bersih
Ditiriskan sampai kering
Ditimbang sebanyak 100 gram
Dihaluskan dengan blender
Sampel pakkat bakar
42
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Bagan Alir Pembuatan Larutan Blanko DPPH 0,5 mM, Penentuan
Panjang Gelombang Maksimum, dan Waktu Kerja
8.1 Penentuan panjang geombang maksimum
9,8 mg Serbuk DPPH
Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml
Dilarutkan dengan metanol
Dicukupkan dengan methanol sampai garis
tanda
Larutan Blanko DPPH 0,5 mM
(C = 200 μg/ml)
Dipipet 5 ml
Dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml
Dicukupkan dengan methanol sampai garis
tanda ( C= 40 ppm)
Diukur pada serapan pada panjang gelombang
400-800 nm
Hasil Serapan Maksimum
8.2 Penentuan Waktu Kerja
Larutan Blanko DPPH 0,5 mM
(C = 200 μg/ml)
Dipipet 5 ml
Dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml
Dicukupkan dengan methanol sampai garis
tanda ( C= 40 ppm)
Diukur serapan pada λ 516 nm setiap menit
selama 80 menit
Hasil Waktu Kerja
43
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Bagan Alir Uji Aktivitas Antioksidan pada Pakkat
Sampel Pakkat (Segar, Rebus, dan Bakar)
Ditimbang seksama 5 gram
Dimasukkan kedalam labu 100 ml
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan dengan alat vortex selama
1 menit
Filtrat Larutan induk Pakat (segar, Rebus, dan Bakar)
konsentrasi 50000 µg/ml
Dipipet sebanyak 0,5 ml, 1 ml, 1,5 ml, dan
2 ml. untuk mendapatkan konsentrasi 50
µg/ml, 2000 µg/ml, 3000 µg/ml, dan 4000
µg/ml
Dimasukkan ke dalam masing-masing labu
tentukur 25 ml.
Ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM
(konsentrasi = 200 µg/ml).
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan kemudian Didiamkan
selama 60 menit
Diukur menggunakan alat spektrofotometer
UV-Visible dengan panjang gelombang 516
nm
Hasil
44
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Bagan Alir Uji Aktivitas Antioksidan pada Vitamin C
25 mg serbuk Vitamin C
Dimasukkan kedalam labu 25 ml
Dilarutkan dengan
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Filtrat Larutan induk Vitamin C
konsentrasi 1000 µg/ml
Dipipet sebanyak 0,05 ml; 0,1 ml; 0,15 ml;
dan 0,2 ml. untuk mendapatkan konsentrasi
2 µg/ml, 4 µg/ml, 6 µg/ml, dan 8 µg/ml
Dimasukkan ke dalam masing-masing labu
tentukur 25 ml.
Ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM
(konsentrasi = 200 µg/ml).
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan kemudian Didiamkan
selama 60 menit
Diukur menggunakan alat spektrofotometer
UV-Visible dengan panjang gelombang 516
nm
Hasil
45
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Bagan Alir Pembuatan Larutan Induk Asam Galat, Penentuan
Panjang Gelombang Maksimum, Waktu Kerja, Dan Standar
Kurva Kaibrasi Asam Galat
10 mg serbuk Asam Galat
Dimasukkan
kedalam
labu
tentukur 10 ml
Dilarutkan dengan metanol
Diaddkan sampai garis tanda
Larutan Induk Asam Galat
(LIAG) Konsentrasi 1000 µg/ml
• Dipipet 0,5 ml LIAG
• Dipipet 0,5 ml LIAG
• Dimasukkan dalam
labu tentukur 10 ml
• Ditambahkn 7,5 ml
akuadest dan 0,5 ml
Folin-Ciocalteu
• Kemudian dihomogenkan dengan alat
vortex selama 1
menit lalu didiamkan
• Ditambahkan 1,5 ml
natrium
karbonat
20 %
• Diukur serapan pada
panjang gelombang
400 – 800 nm
• Dimasukkan dalam
labu tentukur 10 ml
• Ditambahkn 7,5 ml
akuadest dan 0,5 ml
Folin-Ciocalteu
• Kemudian dihomogenkan dengan alat
vortex selama 1
menit lalu didiamkan
• Ditambahkan 1,5 ml
natrium
karbonat
20 %
• Diukur serapan pada
panjang gelombang
maksimum 775 nm
Serapan Maksimum
• Dipipet sebanyak 0,1 ml;
0,2 ml; 0,3 ml; 0,4 ml;
dan 0,5 ml LIAG kedalam labu tentukur
10 ml untuk mendapatkan
konsentrasi 10 µg/ml,
20 µg/ml, 30 µg/ml,
40 µg/ml dan 50 µg/ml.
• Ditambahkn
7,5
ml
akuadest dan
0,5 ml
Folin-Ciocalteu
• Kemudian dihomogenkan
dengan alat vortex selama
1 menit lalu didiamkan
• Ditambahkan 1,5 ml
natrium karbonat 20%
• Diukur serapan pada
panjang gelombang maksimum 775 nm
Waktu Kerja
Persamaan Regresi
46
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Bagan Alir Penentuan Kandungan Fenolik Total pada Pakkat
Sampel Pakkat (Segar, Rebus, dan Bakar)
Ditimbang seksama 50 mg
Dimasukkan kedalam labu 50 ml
Diaddkan dengan metanol sampai garis
tanda
Dihomogenkan dengan alat vortex selama
1 menit
Filtrat Larutan induk Pakat (segar, Rebus, dan Bakar)
konsentrasi 1000 µg/ml
Dipipet 0,5 ml larutan induk asam galat
(50 µg/ml)
Dimasukkan dalam labu tentukur 10 ml
Ditambahkan 7,5 ml akuadest dan 0,5 ml
Folin-Ciocalteu
Kemudian dihomogenkan dengan alat
vortex selama 1 menit lalu didiamkan
Ditambahkan 1,5 ml natrium karbonat 20%
Diukur serapan pada panjang gelombang
maksimum 775 nm
Hasil
47
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Hasil Pengukuran Waktu Kerja Larutan DPPH
Time
(Minute)
0.0000
1.0000
2.0000
3.0000
4.0000
5.0000
6.0000
7.0000
8.0000
9.0000
10.0000
11.0000
12.0000
13.0000
14.0000
15.0000
16.0000
17.0000
18.0000
19.0000
20.0000
21.0000
22.0000
23.0000
24.0000
25.0000
26.0000
27.0000
28.0000
29.0000
30.0000
31.0000
32.0000
33.0000
34.0000
35.0000
36.0000
37.0000
38.0000
39.0000
Raw
Data..
0.9002
0.8991
0.8979
0.8961
0.8950
0.8931
0.8912
0.8904
0.8900
0.8887
0.8873
0.8856
0.8844
0.8835
0.8831
0.8819
0.8798
0.8788
0.8782
0.8762
0.8751
0.8738
0.8724
0.8707
0.8700
0.8676
0.8661
0.8643
0.8624
0.8607
0.8594
0.8574
0.8557
0.8538
0.8516
0.8501
0.8501
0.8487
0.8479
0.8476
48
Universitas Sumatera Utara
40.0000
41.0000
42.0000
43.0000
44.0000
45.0000
46.0000
47.0000
48.0000
49.0000
50.0000
51.0000
52.0000
53.0000
54.0000
55.0000
56.0000
57.0000
58.0000
59.0000
60.0000
61.0000
62.0000
63.0000
64.0000
65.0000
66.0000
67.0000
68.0000
69.0000
70.0000
71.0000
72.0000
73.0000
74.0000
75.0000
76.0000
77.0000
78.0000
79.0000
80.0000
0.8471
0.8470
0.8463
0.8464
0.8463
0.8451
0.8438
0.8423
0.8412
0,8397
0.8383
0.8369
0.8355
0.8347
0.8328
0.8315
0.8298
0.8291
0.8275
0.8253
0.8253
0.8253
0.8253
0.8225
0.8210
0.8183
0.8164
0.8147
0.8131
0.8123
0.8114
0.8104
0.8095
0.8083
0.8075
0.8062
0.8050
0.8037
0.8027
0.8019
0.8002
49
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
50
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 15. Contoh Perhitungan Persen Pemerangkapan dan Perhitungan Nilai
IC50
15.1 Perhitungan Persen Pemerangkapan Pakkat Segar
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
1000
3
2000
4
3000
5
4000
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,8546
0,6633
0,5185
0,3882
0,2417
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 1000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,6633
x 100%
0,8546
= 22,46 %
2. Konsentrasi 2000µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,5185
x 100%
0,8546
= 39,39 %
3. Konsentrasi 3000µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,3882
x 100%
0,8546
= 54,62 %
4. Konsentrasi 4000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8546 - 0,2417
x 100%
0,8546
= 71,74 %
51
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Pakkat segar
X
Y
0
0
1000
22,45
2000
39,24
3000
56,36
4000
72,09
ΣX = 10000
ΣY = 190,14
Y = 38,028
X = 2000
XY
0
22450
78480
169080
288360
X2
0
1000000
4000000
9000000
16000000
ΣXY = 558370
ΣX2 = 30000000
X = Konsentrasi (μg/ml)
Keterangan:
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(558370) − (10000)(190,14) / 5
(30000000) − (10000) 2 / 5
=
178090
10000000
= 0,01789
b = Y − aX
= 38,028 – (0,01789)(2000)
= 2,41
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,01789x + 2,41
Nilai IC50 = Y = 0,01789x + 2,41
50 = 0,01789x +8,7398
X = 2672,24 µg/ml
IC50 = 2672,24 µg/ml
52
Universitas Sumatera Utara
15.2 Perhitungan Persen Pemerangkapan Pakkat Rebus
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
1000
3
2000
4
3000
5
4000
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,8927
0,7524
0,6900
0,5462
0,4167
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 1000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,7524
x 100%
0,8927
= 15,71 %
2. Konsentrasi 2000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,6900
x 100%
0,8927
= 22,70 %
3. Konsentrasi 3000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,5462
x 100%
0,8927
= 38,81 %
4. Konsentrasi 4000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,8927 - 0,4167
x 100%
0,8927
= 53,32 %
53
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Pakkat Rebus
X
Y
0
0
1000
15,71
2000
22,68
3000
38,80
4000
53,31
ΣX = 10000
ΣY = 130,51
Y = 26,102
X = 2000
Keterangan:
XY
0
15710
45360
116409
213268
X2
0
1000000
4000000
9000000
16000000
ΣXY = 390747
ΣX2 = 30000000
X = Konsentrasi (μg/ml)
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(390747) − (10000)(130,51) / 5
(30000000) − (10000) 2 / 5
=
129727
10000000
= 0,0129727
b = Y − aX
= 26,102 – (0,0129727)(2000)
= 0,162
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0129727x + 0,162
Nilai IC50 = Y = 0,0129727x + 0,162
50 = 0,0129727x + 0,162
X = 3841,76 µg/ml
IC50 = 3841,76 µg/ml
54
Universitas Sumatera Utara
15.3 Perhitungan Persen Pemerangkapan Pakkat Bakar
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
1000
3
2000
4
3000
5
4000
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,7888
0,3441
0,2312
0,1443
0,0302
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 1000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,3441
x 100%
0,7888
= 56,36 %
2. Konsentrasi 2000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,46085
x 100%
0,7888
= 70,68 %
3. Konsentrasi 3000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,1443
x 100%
0,7888
= 81,70 %
4. Konsentrasi 4000 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7888 - 0,0302
x 100%
0,7888
= 96,16 %
55
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Pakkat Bakar
X
Y
0
0
1000
56,37
2000
70,66
3000
81,54
4000
95,90
ΣX = 10000
ΣY = 304,492
Y = 60,898
X = 2000
Keterangan:
XY
0
56377
141330
244626
383632
X2
0
1000000
4000000
9000000
16000000
ΣXY = 825965
ΣX2 = 30000000
X = Konsentrasi (μg/ml)
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(825965) − (10000)(304,492) / 5
(30000000) − (10000) 2 / 5
=
216981
10000000
= 0,0216981
b = Y − aX
= 60,898 – (0,216981)(2000)
= 17,5018
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,0216981x + 17,5018
Nilai IC50 = Y = 0,0216981x + 17,5018
50 = 0,0216981x + 17,5018
X = 1497,744 µg/ml
IC50 = 1497,74 µg/ml
56
Universitas Sumatera Utara
15.4 Perhitungan Persen Pemerangkapan Vitamin C
Tabel data absorbansi DPPH
No.
Konsentrasi Larutan Uji (μg/ml)
1
0
2
2
3
4
4
6
5
8
Aktivitas pemerangkapan (%) =
Absorbansi
0,7863
0,6843
0,4051
0,2629
0,1651
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Keterangan: Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel
Asampel = Absorbansi sampel
•
Perhitungan Persen Pemerangkapan
1. Konsentrasi 2 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,6843
x 100%
0,7863
= 12,97 %
2. Konsentrasi 4 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,4051
x 100%
0,7863
= 48,86 %
3. Konsentrasi 6 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,2629
x 100%
0,7863
= 66,52 %
4. Konsentrasi 8 µg/ml
Aktivitas pemerangkapan (%) =
0,7863 - 0,1651
x 100%
0,7863
= 79,17 %
57
Universitas Sumatera Utara
•
Perhitungan nilai IC50
Tabel IC50 dari Vitamin C
X
Y
0
0
2
12,97
4
48,35
6
66,54
8
79,18
ΣX = 20
ΣY = 207,058
Y = 41,4117
X = 4
XY
0
25,9566
193,4
399,2898
633,4536
X2
0
4
16
36
64
ΣXY = 1252,1
ΣX2 = 120
X = Konsentrasi (μg/ml)
Keterangan:
Y = % Pemerangkapan
a =
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 / n
=
(1252,1) − (20)(207,058) / 5
(120) − (20) 2 / 5
=
423,8668
40
= 10,5967
b = Y − aX
= 41,4117 – (10,5967)(4)
= - 0,9751
Jadi, persamaan garis regresi Y = 10,5967x – 0,9751
Nilai IC50 = Y = 10,5967x – 0,9751
50 = 10,5967x – 0,9751
X = 4,81 µg/ml
IC50 = 4,81 µg/ml
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 16. Hasil Pengukuran Waktu Kerja (Operating Time) Larutan Asam
Galat dengan Pereaksi Folin-Ciocalteu dan Natrium Karbonat.
Time
(Minute)
0.0000
1.0000
2.0000
3.0000
4.0000
5.0000
6.0000
7.0000
8.0000
9.0000
10.0000
11.0000
12.0000
13.0000
14.0000
15.0000
16.0000
17.0000
18.0000
19.0000
20.0000
21.0000
22.0000
23.0000
24.0000
25.0000
26.0000
27.0000
28.0000
29.0000
30.0000
31.0000
32.0000
33.0000
34.0000
35.0000
36.0000
37.0000
Raw
Data
0.3354
0.3626
0.3710
0.3744
0.3779
0.3801
0.3844
0.3858
0.3897
0.3921
0.3948
0.3974
0.4003
0.4026
0.4074
0.4080
0.4109
0.4135
0.4163
0.4188
0.4214
0.4240
0.4261
0.4289
0.4306
0.4333
0.4353
0.4377
0.4397
0.4417
0.4442
0.4456
0.4476
0.4495
0.4512
0.4529
0.4549
0.4563
59
Universitas Sumatera Utara
38.0000
39.0000
40.0000
41.0000
42.0000
43.0000
44.0000
45.0000
46.0000
47.0000
48.0000
49.0000
50.0000
51.0000
52.0000
53.0000
54.0000
55.0000
56.0000
57.0000
58.0000
59.0000
60.0000
61.0000
62.0000
63.0000
64.0000
65.0000
66.0000
67.0000
68.0000
69.0000
70.0000
71.0000
72.0000
73.0000
74.0000
75.0000
76.0000
77.0000
78.0000
79.0000
80.0000
0.4578
0.4597
0.4610
0.4625
0.4640
0.4655
0.4669
0.4677
0.4696
0.4708
0.4718
0.4730
0.4743
0.4757
0.4767
0.4776
0.4790
0.4801
0.4812
0.4820
0.4831
0.4840
0.4850
0.4861
0.4869
0.4878
0.4887
0.4896
0.4906
0.4913
0.4923
0.4931
0.4939
0.4947
0.4954
0.4963
0.4970
0.4980
0.4984
0.4996
0.5000
0.5008
0.5011
60
Universitas Sumatera Utara
81.0000
82.0000
83.0000
84.0000
85.0000
86.0000
87.0000
88.0000
89.0000
90.0000
91.0000
92.0000
93.0000
94.0000
95.0000
96.0000
97.0000
98.0000
99.0000
100.0000
101.0000
102.0000
103.0000
104.0000
105.0000
106.0000
107.0000
108.0000
109.0000
110.0000
111.0000
112.0000
113.0000
114.0000
115.0000
116.0000
117.0000
118.0000
119.0000
120.0000
0.5022
0.5030
0.5033
0.5042
0.5050
0.5055
0.5062
0.5072
0.5074
0.5074
0.5074
0.5076
0.5078
0.5080
0.5109
0.5135
0.5163
0.5188
0.5214
0.5240
0.5242
0.5246
0.5261
0.5289
0.5306
0.5333
0.5353
0.5377
0.5397
0.5417
0.5442
0.5456
0.5476
0.5495
0.5512
0.5529
0.5539
0.5543
0.5548
0.5557
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 17. Contoh Perhitungan Kandungan Total Fenolik Pakkat Segar,
Pakkat Rebus, dan Pakkat Bakar
17.1 Kurva Kalibrasi Standar Asam Galat
No.i
1.
2.
3.
4.
5.
6.
n=6
Xi
0,0000
10,0000
20,0000
30,0000
40,0000
50,0000
Yi
0,00009
0,06180
0,13573
0,20044
0,26804
0,33528
XYi
0,0000
0,6180
2,7146
6,012
10,7216
16,764
ƩX = 150
ƩY = 1,00138
Y = 0,166897
ƩXY= 36,8320
X = 25
a=
∑ XY − (∑ X )(∑ Y ) n
2
∑ X 2 − (∑ Y ) n
a=
(36,8320) − (150)(1,00138)/6
(5500) − (150) 2 / 6
a=
11,7957
1750
X2
0,00000
100
400
900
1600
2500
Y2
0,0000000081
0,00381924
0,018422632
0,040176193
0,071845441
0,112412678
ƩX2 = 5500 ƩY2 = 0,246676134
a = 0,00674
b = Y − aX
b = 0,16687 – (0,016911085)(25)
b = - 0,0016
Jadi, persamaan garis regresi adalah
Y = aX + b
Y = 0,00674 X - 0,0016
62
Universitas Sumatera Utara
17.2 Koefisien Korelasi (r)
r=
∑ XY − (∑ X)(∑ Y) n
[(∑ X 2 ) − (∑ X) 2 /n ][(∑ Y 2 ) − (∑ Y) 2 /n ]
(36,8302) − (150)(1,00138)/6
r=
[(5500) − (150) 2 / 6][(0,246676184) − (1,00138) 2 / 6
r=
11,7957
11,79877
= 0,99974
17.3 Kandungan Total Fenol Pakkat Segar
Rumus perhitungan:
Kadar total fenol =
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Konsentrasi (µg/ml) x Volume (ml)
x Faktor pengenceran
Berat Sampel (g)
Berat Sampel
(g)
0,0506
0,0506
0,0506
0,0506
0,0506
0,0506
Volume Larutan
Sampel (ml)
10
10
10
10
10
10
Faktor
pengenceran
-
Absorbansi
(A)
0,09949
0,09955
0,09959
0,09976
0,09959
0,09959
Pengulangan I:
− Absorbansi = 0,09949
0,09949
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 14,9995 µg/ml
63
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
14,9995 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2964,328 μg/g
= 2,9643mg GAE/g
Pengulangan II:
− Absorbansi = 0,09955
0,09955
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 15,0084 µg/ml
Kadar total fenol
=
15,0084 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2966,086 μg/g
= 2,9661 mg GAE/g
Pengulangan III:
− Absorbansi = 0,09959
0,09959
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 15,0143 µg/ml
Kadar total fenol
15,0143 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2967,252 μg/g
=
= 2,9673 mg GAE/g
Pengulangan IV:
− Absorbansi = 0,09976
0,09976
x
= 0,0067404 x - 0,001631
= 15,0396 µg/ml
64
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
15,0396 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2972,252 μg/g
= 2,9723 mg GAE/g
Pengulangan V:
− Absorbansi = 0,09959
0,09959
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 15,0143 µg/ml
Kadar total fenol
=
15,0143 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2967,252 μg/g
= 2,9673 mg GAE/g
Pengulangan VI:
− Absorbansi = 0,09959
0,09959
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 15,0143 µg/ml
Kadar total fenol
=
15,0143 µg/ml x 10 ml
0,0506 g
= 2967,252 μg/g
= 2,9673 mg GAE/g
2,9643 + 2,9661 + 2,9673 + 2,9723 + 2,9673 + 2,9673
6
= 2,96743 mg GAE/g
Rata-rata kadar total fenol =
Rata-rata % total fenol
=
2,96743 mg
x 100%
1000 mg
= 0,296743%
65
Universitas Sumatera Utara
17.4 Kandungan Total Fenol Pakkat Rebus
Rumus perhitungan:
Kadar total fenol =
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Konsentrasi (µg/ml) x Volume (ml)
x Faktor pengenceran
Berat Sampel (g)
Berat Sampel
(g)
0,0503
0,0503
0,0503
0,0503
0,0503
0,0503
Volume Larutan
Sampel (ml)
10
10
10
10
10
10
Faktor
pengenceran
-
Absorbansi
(A)
0,05855
0,05820
0,05873
0,05903
0,05890
0,05850
Pengulangan I:
− Absorbansi = 0,05855
0,05855
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 8,9420 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9420 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1777,733 μg/g
= 1,7777 mg GAE/g
Pengulangan II:
− Absorbansi = 0,05820
0,05820
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 8,8738 µg/ml
Kadar total fenol
8,8738 µg/ml x 10 ml
0,0503g
= 1764,174 μg/g
=
= 1,7642 mg GAE/g
66
Universitas Sumatera Utara
Pengulangan III:
− Absorbansi = 0,05873
0,05873
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 8,9524 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9524 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1779,801 μg/g
= 1,7798 mg GAE/g
Pengulangan IV:
− Absorbansi = 0,05903
0,05903
x
= 0,0067404 x - 0,001631
= 8,9969 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9969 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1788,648 μg/g
= 1,7886 mg GAE/g
Pengulangan V:
− Absorbansi = 0,05890
0,05890
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 8,9776 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9776 µg/ml x 10 ml
0,0503 g
= 1784,811 μg/g
= 1,7848 mg GAE/g
67
Universitas Sumatera Utara
Pengulangan VI:
− Absorbansi = 0,05850
0,05850
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 8,9183 µg/ml
Kadar total fenol
=
8,9183 µg/ml x 10 ml
0,0503g
= 1773,021 μg/g
= 1,7730 mg GAE/g
1,7777 + 1,7642 + 1,7798 + 1,7886 + 1,7848 + 1,7730
6
= 1,7780 mg GAE/g
Rata-rata kadar total fenol =
Rata-rata % total fenol
=
1,7780 mg
x 100%
1000 mg
= 0,17780 %
68
Universitas Sumatera Utara
17.5 Kandungan Total Fenol Pakkat Bakar
Rumus perhitungan:
Kadar total fenol =
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Konsentrasi (µg/ml) x Volume (ml)
x Faktor pengenceran
Berat Sampel (g)
Berat Sampel
(g)
0,0501
0,0501
0,0501
0,0501
0,0501
0,0501
Volume Larutan
Sampel (ml)
10
10
10
10
10
10
Faktor
pengenceran
-
Absorbansi
(A)
0,19975
0,19994
0,20010
0,20055
0,20107
0,20164
Pengulangan I:
− Absorbansi = 0,19975
0,19975
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 29,8740 µg/ml
Kadar total fenol
=
29,8740 µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 5962,874 μg/g
= 5,9629 mg GAE/g
Pengulangan II:
− Absorbansi = 0,19994
0,19994
x
= 0,0067404x - 0,001613
= 29,9022 µg/ml
69
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
29,9022 µg/ml x 10 ml
0,0501g
= 5968,502 μg/g
= 5,9685 mg GAE/g
Pengulangan III:
− Absorbansi = 0,20010
0,20010
x
= 0,0067404 x - 0,001613
= 29,9259 µg/ml
Kadar total fenol
=
29,9259 µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 5973,235 μg/g
= 5,9732 mg GAE/g
Pengulangan IV:
− Absorbansi = 0,20055
0,20055
x
= 0,0067404 x - 0,001631
= 29,9927 µg/ml
Kadar total fenol
=
29,9927µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 5986,566 μg/g
= 5,9866 mg GAE/g
Pengulangan V:
− Absorbansi = 0,20107
0,20107
x
= 0,0067404 x + 0,001613
= 30,0698 µg/ml
70
Universitas Sumatera Utara
Kadar total fenol
=
30,0698µg/ml x 10 ml
0,05301 g
= 6001,956 μg/g
= 6,0019 mg GAE/g
Pengulangan VI:
− Absorbansi = 0,20164
0,20164
x
= 0,0067404 x + 0,001613
= 30,1544 µg/ml
Kadar total fenol
=
30,1544 µg/ml x 10 ml
0,0501 g
= 6018,842 μg/g
= 6,0188 mg GAE/g
5,9629 + 5,9685 + 5,9732 + 5,9866 + 6,0019 + 6.0188
6
= 5,98565 mg GAE/g
Rata-rata kadar total fenol =
Rata-rata % total fenol
=
5,98565 mg
x 100%
1000 mg
= 0,598565 %
71
Universitas Sumatera Utara