Cara Analisis β-karoten AOAC 2005

Lampiran 1. Metode analisis β-karoten dan karakteristik fisik dan kimia wortel organik dan wortel non-organik

1.1 Cara Analisis β-karoten AOAC 2005

Sampel dihaluskan, kemudian diambil 0,1-0,2 g lalu dimasukkan ke dalam erlenmeyer 100 ml. Berikutnya ditambah ± 10 ml aqua bidest digoyangkan dihomogenkan, ditambah 4 ml etanol 95, ditambah batu didih untuk memercepat pemanasan, erlenmeyer digoyang-goyang untuk memastikan semua bahan tercampur. Kemudian dilakukan penyabunan untuk memisahkan provitamin A dari protein dengan 10 ml KOH 50 yang dipipet kedalam erlenmeyer untuk dan dipanaskan di atas penangas air pada suhu 80 C. Lalu direfluk selama 40 menit dan digoyangkan tiap 10 menit. Kemudian erlenmeyer diangkat dari penagas dan didinginkan. Lalu asam asetat glasial 10 ml ditambahkan untuk menetralkan KOH. Selanjutnya larutan ini dipindahkan ke dalam labu ukur amber 100 ml. Kemudian larutan ditera dengan larutan campuran etanol dan Tetrahidrofuran THF dengan perbandingan 1:1. THF digunakan untuk melarutkan β-karoten yang terkandung dalam sampel tersebut. Lalu labu ukur di bolak- balikan dihomogenkan, dan disimpan selama 1 jam didalam lemari es. Setelah itu diinjeksikan pada HPLC merek PerkinElmer series 200 yang dilengkapi dengan detektor UV dengan panjang gelombang 450 nm,kolom C 18 Licrospher 100 RP-18e, flow rate 1,5 mlmenit dan volume injek 20 µl autosampler. Pada persiapan standar, standar β-karoten sigma 95 dimasukkan dalam labu takar amber 25 ml dan ditimbang sebanyak ± 0,002 g. Lalu dilarutkan dan ditera dengan kloroform amber 25 ml. Kemudian 0,1 ml larutan stok standar dipipet ke dalam erlenmeyer 100 ml bertutup asah dan ditambahkan 10 ml ethanol 95 dan 2,5 ml KOH 50 direfluk diatas penangas air suhu 80 selama 40 menit, didinginkan, ditambah 2,5 ml asam asetat glasial digoyangkan sampai tercampur. Lalu dimasukkan ke dalam labu ukur amber 10 ml dan ditera dengan larutan ethanol dan THF 1:1. Kemudian larutan dalam labu ukur dihomogenkan, selanjutnya dianlisis dengan HPLC bersamaan dengan sampel. Perhitungan Konsentrasi β-karoten pada contoh Csp = Asp-a x Vasp x Vi st --------- ------- -------- b W sp Vi sp Keterangan : Csp = konsentrasi contoh a = intercept b = slope Vasp = Volume akhir contoh Wsp = bobot contoh Vi st = volume inject standar Vi sp = volume injek contoh

1.2 Analisis warna Metode Hunter Hutching 1999