4.5.3.2 Pengenceran Bahan Coba
Ekstrak kental batang Kemuning Murraya Paniculata ditimbang dengan timbangan kemudian dibuatkan ekstrak dengan konsentrasi 20 yang nantinya akan
dibuatkan ekstrak sesuai dengan yang ingin diujikan yaitu 7,5, 5 2,5 dan 1. Masing-masing ekstrak dibuat dalam 10ml dengan menambahkan DMSO 1ml dan
BHI. Penambahan BHI dimaksudkan agar ekstrak bahan dapat menyatu dengan bakteri yang ada di media dan memberikan reaksi yang akan diamati hasilnya.
Gambar 22. Ekestrak batang kemuning yang sudah dilakukan pengenceran
4.5.3.3. Pembuatan Media Bakteri
Sebelum spesimen dibiakkan, terlebih dahulu dibuat media BHI Agar, BHI sebanyak 14,8 gram dan Bacto Agar sebanyak 6 gram dilarutkan dalam 400 ml
akuades kemudian ditutup rapat dan diberi alumunium foil, setelah itu di masukkan ke dalam autoclaf selama 2 jam dalam suhu 27
o
C untuk menghindari kontaminasi dan menjaga agar tetap steril. Setelah itu lakukan penuangan media dalam petri. kemudian
media dimasukkan ke dalam inkubator selama 24 jam untuk melihat apakah ada kontaminasi bakteri atau tidak. Jika steril, media sudah dapat digunakan untuk
membiakkan spesimen.
Gambar 23. Media yang sudah siap
4.5.3.4 Pembiakan Spesimen
Fusobacterium nucleatum yang digunakan adalah spesimen stem sel Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 yang dibiakkan secara murni pada media
BHI dalam suasana anaerob hingga didapatkan pertumbuhan yang sehat yang berarti bahwa bakteri tumbuh subur. Ambil tabung yang sudah disterilkan kemudian
masukkan 10ml BHI Brot setelah itu 100µl bakteri kemudian divortex secara perlahan agar bakteri dapat menyatu dengan bahan. Tutup atas tabung dengan kapas
kemudian masukan tabung ke dalam wadah setelah itu isi wadah tersebut dengan gas CO
2
selama 1 menit dalam posisi wadah tertutup. Pengisian gas dimaksudkan untuk menciptakan suasana wadah menjadi anaerob agar bakteri dapat tumbuh. Setelah 1
menit hentikan pengisian gas yang diikuti dengan pencabutan selang dari wadah setelah itu tutup rapat wadah kemudian masukkan wadah kedalam inkubator.
4.5.3.5 Efek Antibakteri Ekstrak Bahan Dengan Metode Difusi
Kategori