sekitar 100 hari setelah penetasan Kobayashi et al. 2000. Ikan nila juga dapat dipijahkan dengan mudah secara buatan di wadah terkontrol, sehingga
mendukung kegiatan rekayasa genetik di masa mendatang Alimuddin et al. 2009. Selanjutnya, transplantasi sel germinal pada ikan nila telah dilakukan
dengan sel donor dari ikan sejenisnya Lacerda et al. 2006; Zaparta 2009. Identifikasi sel donor dalam individu ikan resipien umumnya dilakukan
dengan cara mengamati pendaran sel yang mengekspresikan gen GFP Green Fluorescent Protein menggunakan mikroskop fluoresen. Sel donor tersebut
diperoleh dari ikan transgenik Yoshizaki et al. 2000. Saat ini, ikan gurame transgenik yang memiliki sel germinal mengeksrepsikan gen GFP belum tersedia.
Karena waktu matang gonad ikan gurame secara alamiah cukup lama, maka waktu yang dibutuhkan untuk membuat ikan gurame transgenik juga panjang.
Selain itu, metode efektif untuk pembuatan ikan gurame transgenik juga belum diketahui. Ketersediaan mikroskop fluoresen yang masih terbatas di Indonesia
juga menjadi salah satu kendala penggunaan sel berpendar sebagai donor. Oleh karena itu, pada penelitian ini dikembangkan metode alternatif untuk identifikasi
sel donor menggunakan ikan gurame bukan transgenik. Sistem penanda sel germinal donor yang berasal dari ikan bukan transgenik telah dikembangkan
meggunakan PKH26. Sel donor akan berpendar merah bila terpapar dengan sinar UV, sehingga dapat dibedakan dengan sel endogenus ikan resipien Alimuddin et
al. 2009. PKH26 telah digunakan dalam penelitian transplantasi sel testikular ikan mulloway Argyrosomus hololepidotus pada ikan nibe Jepang
Nibea mitsukurii Yoshizaki et al. 2008. Seperti halnya pada sel donor mengekspresikan gen GFP, identifikasi sel donor yang ditandai dengan PKH26
juga membutuhkan mikroskop fluoresen. Dengan demikian, penggunaan PKH26 juga belum efisien diaplikasikan di Indonesia.
Pada penelitian ini dikembangkan metode alternatif yang lebih aplikatif yang didukung oleh ketersediaan fasilitas. Metode alternatif yang memungkinkan
diaplikasikan saat ini di Indonesia adalah marka molekuler DNA, yang dapat dideteksi dengan metode PCR Polymerase Chain Reaction menggunakan primer
spesifik bagi ikan donor. Mesin PCR sudah tersebar di seluruh Indonesia. Primer spesifik didisain dari sekuen gen target ikan donor. Pada ikan gurame, sekuen gen
yang tersedia adalah gen penyandi hormon pertumbuhan growth hormone, GH Nugroho et al. 2008 dan vasa Alimuddin et al. 2009. Pada penelitian ini kedua
gen tersebut dikembangkan sebagai marka molekuler pendeteksi sel gonad donor dalam individu resipien.
1.2. Perumusan masalah
Pertumbuhan dan waktu matang gonad yang lambat diduga menjadi suatu masalah dalam ketersedian benih ikan gurame yang tidak dapat mencukupi untuk
mendukung pencapaian target produksi nasional. Hingga saat ini, penelitian yang telah dilakukan dalam upaya peningkatan produksi ikan gurame terbatas pada
komposisi pakan yang memberi pertumbuhan tinggi. Rekayasa produksi benih ikan gurame melalui aplikasi metode teknologi surrogate broodstock atau
teknologi induk “semang” diduga dapat mendukung pengembangan budidaya ikan gurame untuk mencapai target produksi nasional di masa datang.
Aplikasi teknologi induk “semang” dilakukan dengan mentransplantasikan sel germinal ikan donor ikan gurame ke rongga perut larva resipien. Ikan yang
dapat matang gonad lebih cepat daripada ikan gurame menjadi salah satu pertimbangan pemilihan ikan resipien. Pada penelitian Takeuchi et al. 2004,
aplikasi teknologi induk “semang” ikan rainbow trout berhasil dilakukan pada ikan salmon masu. Sel donor yang digunakan berasal dari ikan rainbow trout
transgenik yang membawa gen berpendar GFP Green Fluorescent Protein. Pendaran GFP bergatung pada aktivitas promoter yang digunakan. GFP yang
dikendalikan oleh aktivitas gen vasa, hanya dapat mencapai puncak pendaran pada sel germinal ikan rainbow trout tahap meiosis Yano et al. 2008, pendaran
sangat kuat pada tahap spermatogonia A dan melemah pada tahap spermatogonia B. Berbeda dengan vasa, pendaran GFP y
ang dikendalikan oleh promoter β-aktin dapat mencapai puncak pendaran sampai pada tahap spermatozoa ikan nila
Zaparta 2009. Pendaran GFP dengan kedua promoter tersebut, vasa dan GFP dapat dilihat di bawah mikroskop fluoresen. Kerersediaan mikroskop fluoresen
masih sangat terbatas di Indonesia. Selain itu, metode efektif untuk membuat dan ketersediaan ikan gurame transgenik dengan sel germinal mengekspresikan gen
GFP juga menjadi penghambat dalam penyediaan sel donor yang berpendar.
Pada penelitian ini digunakan sel donor alami yang berasal dari ikan gurame bukan transgenik, dan menggunakan marka molekuler sebagai primer
spesifik untuk membedakan sel germinal ikan gurame dan ikan nila sebagai calon resipien. Marka molekuler dianalisis menggunakan metode PCR dengan primer
spesifik ikan donor. Pengembangan marka molekuler didukung oleh ketersediaan mesin PCR yang tersebar luas di Indonesia. Hingga saat ini, gen ikan gurame
yang sudah diketahui sekuennya adalah gen GH dan vasa. Oleh karena itu, kedua gen tersebut digunakan sebagai marka pembeda antara donor ikan gurame dan
resipien ikan nila. PCR dengan primer spesifik yang didisain berdasarkan marka GH dan vasa hanya akan menghasilkan produk amplifikasi pada ikan donor.
1.3. Tujuan dan manfaat
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengevaluasi cara alternatif pendeteksi sel gonad donor dalam individu semang pada proses transplantasi.
Pengembangan marka molekuler ini sangat bermanfaat untuk mendukung aplikasi teknologi transplantasi sel germinal donor pada individu semang dalam rangka
merekayasa produksi benih ikan-ikan budidaya di Indonesia, khususnya yang membutuhkan waktu relatif lama untuk mencapai matang gonad pertama kali.
