transplantasi selanjutnya adalah menggunakan sel testikular yang di dalamnya mengandung sel stem spermatogonia spermatogonial tipe A.
Transplantasi sel testikular telah dilakukan pada ikan rainbow trout Okutsu et al. 2006 dan pada ikan nila Lacerda et al. 2006. Berdasarkan
penelitian Okutsu et al. 2006 bahwa sekitar 10.000 sel testikular ikan rainbow trout yang ditransplantasikan dapat terinkorporasi di dalam genital ridge resipien
dalam waktu 20 hari setelah transplantasi. Penelitian tersebut juga menyimpulkan bahwa sel testikular dapat berkolonisasi dalam gonad embrio dan dapat
berdiferensiasi menjadi sel germinal jantan atau betina.
2.4. Marka molekuler
Sel germinal donor yang terinkorporasi pada gonad resipien, diidentifikasi dengan suatu markapenanda. Pada awalnya, marka sebagai sistem visualisasi sel
germinal dikembangkan secara biokimia. Pada mamalia, PGC dapat dibedakan dari sel somatik menggunakan fosfat alkalin, sedangkan pada burung
menggunakan kandungan glycogen Eddy 1975, diacu dalam Yoshizaki et al. 2000. Akan tetapi, pada ikan, tidak ada indikator biokimia yang bisa
membedakan PGC. Awalnya, PGC ikan dapat dikenali dengan histologi berdasarkan karakter
morfologinya, seperti ukuran, rasio nukleositoplasmik, granular nuclear chromatin Patino Takashima 1995, diacu dalam Yoshizaki et al. 2000.
Berdasarkan penelitian Moore 1937, diacu dalam Yoshizaki et al. 2000 bahwa secara histologi, PGC ikan rainbow trout dapat diidentifikasi pada tahap
mesoderm ketika mendekati blastopore, sembilan hari setelah fertilisasi. Akan tetapi, tidak diketahui mekanisme molekuler yang mengatur penentuan dan
perkembangan PGC ikan tersebut, sehingga diperlukan analisa secara molekuler untuk mengidentifikasi sel germinal ikan.
Pengembangan marka molekuler untuk identifikasi sel germinal ikan diawali dengan penelitian kloning dan isolasi gen vasa RtVLG pada ikan
rainbow trout Yoshizaki et al. 2000. Penelitian tersebut menghasilkan RtVLG, yang dapat digunakan sebagai marka untuk PGC embrio ikan rainbow trout
karena ekspresi gen tersebut hanya pada sel germinal. Selanjutnya, Wolke et al. 2002, diacu dalam Takeuchi et al. 2002 menyimpulkan bahwa dengan
menggunakan gen GFP sebagai reporter, diketahui daerah pengatur ekspresi gen RtVLG. Pengatur ekspresi promoter gen yang terletak di ujung 5’ dan sekuens
ujung 3’ serta intron pertama gen RtVLG yang mengandung cis-element yang esensial bagi vasa disambungkan dengan gen GFP untuk mengetahui pola
ekspresinya pada PGC secara spesifik dan ikan rainbow trout hidup. Ekspresi RtVLG hanya dideteksi pada populasi selPGC yang mengandung gen GFP.
Gen GFP adalah gen yang mengkodekan protein berpendar hijau. Gen GFP dapat terekspresi apabila PGC diisolasi dari ikan transgenik. Takeuchi et al.
2002 menyimpulkan bahwa beberapa strain ikan rainbow trout transgenik yang membawa pvasa-GFP, dapat mengekspresikan sel sama baiknya dengan distribusi
mRNA RtVLG Yoshizaki et al. 2000; dan morfologi sel dengan pewarnaan antibodi spesifik GFP konsisten dengan PGC ikan rainbow trout transgenik.
Aplikasi GFP menggunakan ikan transgenik dapat memberi hasil yang cukup baik dalam perkembangan sistem transplantasi sel germinal ikan, akan
tetapi dikarenakan keterbatasan ikan transgenik, yakni tidak dapat dilepaskan secara bebas di alam, sehingga diperlukan visualisasi sel germinal menggunakan
ikan bukan transgenik. Dengan demikian, Yoshizaki et al. 2005 mengembangkan sistem visualisasi sel germinal menggunakan RNA GFP-vasa
dengan metode injeksi kimera mRNA. Metode visualisasi ini memiliki keuntungan yakni durasi waktu pendek dalam memproduksi benih melalui
teknologi induk “semang” Takeuchi et al. 2003. Namun demikian, sifat mRNA yang mudah terdegradasi sehingga injeksi kimera mRNA untuk melabeli PGC
bersifat sementara Yoshizaki et al. 2005. Baru-baru ini telah dikembangkan sistem identifikasi sel germinal
transplan gen tertentu menggunakan metode PCR dengan primer spesifik. Dari penelitian Okutsu et al. 2008 dilaporkan bahwa sel germinal donor ikan rainbow
trout dapat diidentifikasi menggunakan primer spesifik berdasarkan sekuen gen vasa, yang diamplifikasi dengan metode PCR, sehingga hanya DNA dari sel
germinal ikan rainbow trout saja yang dideteksi oleh primer tersebut.
