Variabel yang Diamati METODE PENELITIAN 3.1 Metode Sampling
10 10
-3
. Disiapkan 3 seri tabung MPN, masing-masing seri terdiri dari 3 tabung reaksi. Sebanyak 9 tabung MPN berisi tabung durham dan 9 ml Lactose Broth. Sebanyak masing-masing 1 ml
sampel pengenceran 10
-1
dimasukkan ke dalam tabung MPN seri I, sampel pengenceran 10
-2
ke dalam tabung MPN seri II, dan sampel pengenceran 10
-2
ke dalam tabung MPN seri III Ketiga seri tabung MPN kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Sampel yang
positif koliform ditunjukkan oleh warna media yang berubah keruh dan terbentuknya gas pada tabung durham. Nilai MPN ditentukan oleh jumlah tabung yang berisi gas dari masing-
masing seri, yang selanjutnya dicocokkan dengan tabel index MPN lampiran 2. Sampel yang positif koliform kemudian dilanjutkan dengan Uji Konfirmasi.
- Tahap 2 : Uji Konfirmasi
Sampel yang positif koliform kemudian dibuat goresan kuadrannya dalam media padat EMBA, dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Sampel yang positif E.coli
ditunjukkan dengan terbentuknya koloni berwarna hijau metalik dengan bintik hitam, dan kemudian dilanjutkan dengan Uji Lengkap.
- Tahap 3 : Uji Lengkap
Koloni tunggal E.coli yang tumbuh pada media padat EMBA diambil dengan menggunakan jarum ose kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi yang sudah berisi tabung
durham dan 9 ml Lactose Broth. Tabung diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam kemudian dilakukan pengamatan pembentukan gas. Jika terbentuk gas maka sampel dinyatakan positif
E.coli. Selanjutnya diambil koloni tunggal E.coli dengan jarum ose, kemudian dibuat goresannya pada media PDA miring, diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Koloni yang
tumbuh kemudian digoreskan pada kaca preparat dan dilakukan pengecatan Gram dan pengamatan morfologi. Indikasi Uji Lengkap positif E. coli diperoleh hasil berupa Gram-
negatif dengan morfologi berbentuk basil batang pendek.