9 Lempeng Total untuk sampel produk pangan. Pada sampel yang berupa air limbah dan air
bersih digunakan Analisis Kualitatif Standar untuk sampel air. Analisis Kualitatif Standar terdiri dari: 1 Uji penduga: penentuan nilai MPN Most Probable Number atau APM
Angka yang Paling Mungkin, 2 Uji konfirmasi dan 3 Uji lengkap. Adapun tahapan analisis dalam penelitian ini yaitu:
3.4.1 Preparasi Sampel
Sampel yang terdiri dari sampel padat dan sampel cair diambil dari coolbox. Kegiatan preparasi sampel dilakukan secara aseptis di dalam laminair flow. Sampel padat berupa
produk pangan seafood ditimbang sebanyak 10 g, dihaluskan dengan mortar, kemudian dimasukkan dalam botol kaca berisi 90 ml larutan NaCl 85 steril, divortex supaya homogen
selama 10 detik pengenceran 10
-1
. Sampel cair yang berupa air limbah dan air bersih masing-masing sebanyak 10 ml dimasukkan dalam botol kaca yang sudah berisi 90 ml
larutan NaCl 85 steril kemudian dihomogenkan selama 10 detik pengenceran 10
-1
. Sampel tersebut diletakkan dalam laminair flow untuk analisis lebih lanjut.
3.4.2 Analisis E. coli pada Produk Pangan Seafood
Sampel padat yang sudah disiapkan pada botol kaca dengan pengenceran 10
-1
dipipet 100µl dan diinokulasikan ke dalam petri yang berisi media padat EMBA Eosin-Methylene
Blue Agar. Dipipet lagi sebanyak 100 µl, dan inokulasikan ke petri yang berisi media padat PCA Plate Count Agar. Berikutnya dipipet 1 ml dari botol kaca, dimasukkan ke dalam
tabung reaksi yang berisi saline 9 ml, divortex sehingga diperoleh pengenceran 10
-2
. Sebanyak 100µl diinokulasikan ke dalam petri yang berisi media padat PCA. Dari tabung
pengenceran 10
-2
, dipipet 1 ml ke dalam tabung reaksi yang berisi saline 9 ml divortex diperoleh pengenceran 10
-3
. Dipipet 100µl dan inokulasikan ke dalam petri yang berisi media padat PCA. Selanjutnya semua petri diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam dan
dihitung jumlah koloni yang tumbuh. Sampel yang positif E.coli ditunjukkan dengan terbentuknya koloni berwarna hijau metalik berbintik hitam pada media selektif EMBA.
3.4.3 Analisis E. coli pada Sampel Air Limbah dan Air Bersih
- Tahap 1 : Uji Penduga: Penentuan Nilai MPN dari Bakteri Koliform
Sampel cair yang sudah disiapkan pada botol kaca dengan pengenceran 10
-1
dipipet sebanyak 1 ml dan dimasukkan dalam 9 ml larutan NaCl 85 steril diperoleh
pengenceran10
-2
, dihomogenkan. Kegiatan tersebut diulang sampai diperoleh pengenceran
10 10
-3
. Disiapkan 3 seri tabung MPN, masing-masing seri terdiri dari 3 tabung reaksi. Sebanyak 9 tabung MPN berisi tabung durham dan 9 ml Lactose Broth. Sebanyak masing-masing 1 ml
sampel pengenceran 10
-1
dimasukkan ke dalam tabung MPN seri I, sampel pengenceran 10
-2
ke dalam tabung MPN seri II, dan sampel pengenceran 10
-2
ke dalam tabung MPN seri III Ketiga seri tabung MPN kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Sampel yang
positif koliform ditunjukkan oleh warna media yang berubah keruh dan terbentuknya gas pada tabung durham. Nilai MPN ditentukan oleh jumlah tabung yang berisi gas dari masing-
masing seri, yang selanjutnya dicocokkan dengan tabel index MPN lampiran 2. Sampel yang positif koliform kemudian dilanjutkan dengan Uji Konfirmasi.
- Tahap 2 : Uji Konfirmasi
Sampel yang positif koliform kemudian dibuat goresan kuadrannya dalam media padat EMBA, dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Sampel yang positif E.coli
ditunjukkan dengan terbentuknya koloni berwarna hijau metalik dengan bintik hitam, dan kemudian dilanjutkan dengan Uji Lengkap.
- Tahap 3 : Uji Lengkap
Koloni tunggal E.coli yang tumbuh pada media padat EMBA diambil dengan menggunakan jarum ose kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi yang sudah berisi tabung
durham dan 9 ml Lactose Broth. Tabung diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam kemudian dilakukan pengamatan pembentukan gas. Jika terbentuk gas maka sampel dinyatakan positif
E.coli. Selanjutnya diambil koloni tunggal E.coli dengan jarum ose, kemudian dibuat goresannya pada media PDA miring, diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Koloni yang
tumbuh kemudian digoreskan pada kaca preparat dan dilakukan pengecatan Gram dan pengamatan morfologi. Indikasi Uji Lengkap positif E. coli diperoleh hasil berupa Gram-
negatif dengan morfologi berbentuk basil batang pendek.
3.4.4 Analisis Data
Data yang diperoleh dari hasil perhitungan E. Coli ditampilkan secara statistika deskriptif dengan tabulasi. Steel dan Torrie, 1980.
