menjadi positif. Lalu ujung jarum diletakkna diatas kaca obyek, piston didorong dan aspiat diletakkan diatas kaca obyek, dibuat
sediaan apus dan difiksasi dengan alkohol. 6.
Dalam membuat sediaan apus, tekanan pada tangan tidak boleh terlalu pelan, karena akan menghasilkan sediaan apus yang
terlalu tebal sehingga sulit untuk diwarnai. Tekanan juga tidak boleh terlalu kuat karena akan menyebabkan sebagian besar dari
populasi sel mengalami distorsi dan sulit diinterprestasikan.
3.10.4. Prosedur Pewarnaan Sitologi dengan Diff-Quik Stain
1. Celupkan sediaan ke dalam larutan fiksatif selama 5
detik5 kali celup masing-masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir.
2. Celupkan sediaan kedalam larutan I selama 5 detik 5 kali celup masing-masing 1 detik. Kelebihannya biarkan mengalir.
3. Celupkan sediaan kedalam larutan II selama 5 detik 5 kalai celup masing masing satu detik. Kelebihannya biarkan
mengalir. 4. Cuci sediaan dengan air destilasi atau air diionisasi.
5. Keringkan dan siap untuk dibaca.
Universitas Sumatera Utara
3.10.5. Prosedur Pewarnaan Immunositokimia ab905 pada Sediaan Hapus
1. Buat sediaan hapus, fiksasi dalam metanol absolut. 2. Cuci dalam air mengalir selama 5 menit.
3. Bloking endogen peroksida metanol + H2O2 selama 30 menit 4. Cuci dalam air mengalir selama 5 menit.
5. Cuci dalam PBS pH 7,4 sebanyak 3x, masing-masing selama 5 menit.
6. Tandai populasi sel dengan Pap pen. 7. Teteskan antibodi primer ab905 dengan pengenceran 1: 500,
diamkan selama 1 jam. 8.
Cuci dengan PBS pH 7,4 selama 5 menit atau sampai bersih. 9. Teteskan envision plus, diamkan selama 30-40 menit.
10. Cuci dengan PBs pH 7,4 + Twin 20 menit atau sampai bersih.
11. Teteskan kromogen DAB, diamkan selama 10 menit.
12. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit.
13. Counterstain dengan Hematoxylin Mayers selama 5-10 menit.
14. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit.
15. Masukan ke dalam larutan litium karbonat jenuh 5 dalam
akuades. 16.
Birukan dalam air mengalir. 17.
Dehidrasi alkohol 80, alkohol 96, alkohol absolut, alkohol absolut masing-masing selama 5 menit.
Universitas Sumatera Utara
18. Clearing xylol I, xylol II, xylol III masing-masing selama 5
menit. 19.
Mounting, tutup dengan entelan. 20. Sediaan siap untuk di baca.
3.11. Alat dan Bahan Penelitian 3.11.1. Alat-alat Penelitian
Alat-alat yng diperluakan untuk penelitian ini adalah staining jar, rak object glass, rak inkubasi, pap pen, pipet mikro, timbangan
bahan kimia, kertas saring, pengukur waktu, gelas Erlemeyer, gelas beker, tabung sentrufuge 15 ml, microwave, spin master, object
glass, kaca penutup, entelan dan mikroskop cahaya.
3.11.2. Bahan Penelitian
• Diff-Quik Stain Larutan Diff-Quik Stain.
Larutan fiksatif -
Tryarylmethane dye, 100 PDC -
Methyl alcohol, dalam konsentrasi 0,002 gliter Larutan I
- Xanthene dye, 100 PDC
- Buffer
- Sodium azide, dalam konsentrasi 1,25 gliter
Universitas Sumatera Utara
