i. Validasi metode uji aktivitas antioksidan, hasil dari prosedur 4h 1 dan 2 divalidasi akurasi recovery, presisi CV, spesifisitas spectra
kontrol dan linieritas nilai r. recovery =
jumlah analit terukur jumlah analit teoritis
x 100 1 Harmita, 2004.
CV =
s rata-rata
x 100 2 Harmita, 2004.
j. Estimasi aktivitas antioksidan, hasil dari prosedur 4h 1 dan 2 dihitung nilai IC dan IC
50
untuk kapsaisin dan ekstrak etanol buah cabai rawit hijau.
5. Penetapan kadar kapsaisin
a. Pembuatan fase gerak, fase gerak yang digunakan pada penelitian ini yaitu campuran toluen - kloroform - aseton 45:25:30
v v
. Fase gerak dituang dalam bejana kromatografi kemudian kertas saring dimasukkan dalam
bejana yang berisi fase gerak. Bejana ditutup rapat dan dibiarkan hingga seluruh kertas saring terbasahi oleh fase gerak.
b. Pembuatan larutan stok kapsaisin, baku kapsaisin ditimbang seksama sebanyak 1,0 mg dan dimasukkan dalam labu takar 10 mL, kemudian
dilarutkan dengan metanol sampai tanda batas sehingga diperoleh larutan stok kapsaisin 0,1 mgmL.
c. Pembuatan larutan seri baku kapsaisin, larutan stok kapsaisin ditotolkan dengan volume 1,25; 2,5; 5; dan 10 µl pada lempeng silika gel 60 F
254
sehingga diperoleh seri baku kapsaisin 0,125; 0,25; 0,5; dan 1,0 µg.
d. Pembuatan larutan uji, sejumlah 50,0 mg ekstrak etanol buah cabai rawit hijau ditimbang seksama kemudian dilarutkan dengan metanol sebanyak
500 µl. Larutan tersebut divortex selama 10 menit dengan pemanasan diatas waterbath pada suhu 60ºC. kemudian larutan disentrifugasi selama
2 menit dan disaring dengan ayakan mesh 60. Larutan uji dibuat replikasi sebanyak 3 kali.
e. Penetapan kadar kapsaisin ekstrak etanol buah cabai rawit hijau, sebanyak 1
0 L larutan uji ditotolkan pada lempeng silika gel F
254
, kemudian dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhkan dengan
fase gerak toluene - kloroform - aseton 45:25:30
v v
. Pengembangan dilakukan setinggi 10 cm, lempeng silika kemudian dikeluarkan dan
ditunggu hingga kering. Bercak diamati di bawah lampu UV 254 nm kemudian dianalisis dengan densitometer pada panjang gelombang
maksimum. Bercak seri baku kapsaisin diukur AUC-nya dengan densitometer pada panjang gelombang yang telah diperoleh. Puncak
kromatogram dan nilai AUC yang muncul diamati. Dengan metode regresi linier, nilai seri kadar µgmL diplotkan terhadap nilai AUC masing-
masing seri larutan baku sehingga diperoleh persamaan y = bx + a dimana y merupakan nilai respon AUC, x merupakan konsentrasi senyawa baku,
a adalah intersep dan b adalah slope. Kadar kapsaisin dalam sampel ditentukan berdasarkan persamaan kurva baku yang paling baik.
F. Analisis hasil
