Cuplikan dilarutkan dalam sedikit pelarut sebelum ditotolkan pada plat kromatografi lapis tipis preparatif. Pelarut yang baik adalah pelarut organik seperti n-
heksana , etil asetat, dan diklorometana. Cuplikan yang akan dipisahkan ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi dari plat lapisan besar dan dikembangkan secara
tegak lurus pada garisan cuplikan sehingga campuran akan terpisah menjadi beberapa pita. Pita penyerap tersebut diharapkan mengandung komponen campuran murni
kemudian dikerok dari plat kaca dengan spatula dan ditampung dengan logam tipis atau kertas lilin. Penyerap diletakkan dalam corong kaca memakai kertas saring lalu
dielusi beberapa kali dengan pelarut yang cocok Gritter, 1991.
2.3 Teknik Spektroskopi
Teknik spektroskopi adalah salah satu analisis kimia fisika yang mengamati tentang interaksi atom dan molekul dengan radiasi elektromagnetik. Ada dua macam
instrumen pada teknik spektroskopi yaitu spektrometer dan spektrofotometer. Instrumen yang memakai monokromator celah tetap pada bidang fokus disebut
sebagai spektometer. Apabila spektrometer tersebut dilengkapi dengan detektor yang bersifat fotoelektrik maka disebut spektrofotometer.
2.4.1 Spektrofotometri Ultraviolet-Visibel UV-Vis
Spektofotometer ultraviolet-visibel melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yang dianalisis. Suatu molekul yang sederhana apabila dikenakan
radiasi elektromagnetik akan mengabsopsi radiasi elektromagnetik yang energinya sesuai. Interaksi tersebut akan meningkatkan energi potensial elektron pada tingkat
keadaan eksitasi. Apabila pada molekul sederhana tersebut hanya terjadi transisi elektronik pada satu macam gugus maka akan terjadi suatu absorpsi yang merupakan
garis spektrum Muldja,1995.
Universitas Sumatera Utara
Spektrum ultraviolet terentang dari 100-400 nm. Absorpsi cahaya ultraviolet atau visible mengakibatkan transisi elektronik, yaitu promosi elektron-elektron dari
orbital keadaan dasar yang berenergi rendah ke orbital keadaan tereksitasi berenergi lebih tinggi.Absorpsi oleh suatu sampel kemudian diukur pada perbagai panjang
gelombang dan dialirkan oleh suatu perekam untuk menghasilkan spektrum Fessenden,1994.
Flavonoida mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi karena itu menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum ultraviolet dan spektrum tampak Harborne,
1987. Spektrum flavonoida biasanya ditentukan dalam larutan dengan pelarut metanol atau etanol. Spektrum khas terdiri atas dua maksima pada rentang 240-285
nm pita II dan 300-550 nm pita I. Kedudukan yang tepat dan kekuatan nisbi maksima tersebut memberikan informasi yang berharga mengenai sifat dan pola
oksigenasinya. Ciri khas spektrum adalah kekuatan nisbi yang rendah pada pita I dalam dhidroflavon, dihidroflavonol dan isoflavon serta kedudukan pita I pada
spektrum khalkon, auron dan antosianin yang terdapat pada panjang gelombang yang tinggi. Petunjuk mengenai rentang maksima utama yang diperkirakan untuk setiap
jenis flavonoida adalah sebagai berikut: Tabel 2.1 Rentang Serapan Spektrum UV-Tampak flavonoida
Pita II nm Pita I nm
Jenis flavonoida
250-280 250-280
250-280 245-275
275-295 230-270
kekuatan rendah 230-270
kekuatan rendah 270-280
310-350 330-360
350-385
310-330 bahu Kira-kira 320 puncak
300-330 bahu 340-390
380-430 465-560
Flavon Flavonol 3-OH tersubtitusi
Flavonol 3-OH bebas Isoflavon
Isoflavon 5-deoksi-6,7- dioksigenasi
Flavanon dan dihidroflavonol Khalkon
Auron Antosianidin dan antosianin
Markham, 1988.
Universitas Sumatera Utara
2.3.1 Spektrofotometri Inframerah FT-IR
