BAB III METODOLOGI PENELITIAN
3.1 RANCANGAN PENELITIAN Penelitian ini adalah penelitian deskriptif dengan studi cross sectional
3.2 LOKASI DAN WAKTU PENELITIAN Penelitian dilakukan di Divisi Bedah Onkologi dan Laboratorium Patologi Anatomi
FK USURSUP H.Adam Malik Medan dari bulan April-Juni 2010.
3.3 OBJEK PENELITIAN 3.3.1 Sampel
Penderita yang telah di diagnosis kanker payudara stadium III 3.3.2 Kriteria inklusi
Penderita kanker payudara dengan histopatologi infiltrating duct carcinoma Penderita yang bersedia ikut dalam penelitian
Universitas Sumatera Utara
3.3.3 Kriteria eksklusi Penderita kanker payudara dengan blok parafin yang tidak adekuat
Penderita kanker payudara dengan data tidak lengkap
3.4 PELAKSANAAN PENELITIAN 3.4.1 Cara Pengumpulan data
Data primer dikumpulkan setelah penderita ditegakkan diagnosis kanker payudara stadium III dengan hasil histopatologi infiltrating duct carcinoma dan grading
histopatologi, kemudian dari blok parafin tersebut dilakukan pemeriksaan immunohistokimia HER 2 di Laboratorium Patologi Anatomi RSUP H.Adam
Malik Medan. 3.4.2 Parameter yang dinilai
Ekspresi HER 2 dari jaringan kanker payudara Grading histopatologi jaringan kanker payudara
3.4.3 Cara kerja Dari block parafin dilakukan pemotongan yang diinginkan yang ideal 3 micron
dan ditiriskan supaya air turun selama 30-60 menit dan dibiarkan 1 malam,
Universitas Sumatera Utara
Blok parafin Slide yang akan diproses
diletakkan di hotplate sekitar 30-60 menit dan ditetesi xylol I,II,III 2-5 menit, bilas dengan alkohol 100 selama 2 menit, alkohol 96 selama 2 menit dan alkohol
70 selama 2 menit, dibilas dengan aquadest mengalir, dimasukkan ke staining berisi reagen TRS sampai tenggelam, kemudian dimasukkan ke microwave dengan
power level tinggi selama 5 menit sampai mendidih, set power level rendah 5 menit dan keluarkan dari microwave dibiarkan sampai dingin.
Slide di dalam staining berisi reagen TRS Dimasukkan dalam microwave
Kemudian direndam ke larutan PBS Phosfat Buffer saline selama 1-2 menit dibersihkan pakai kertas tissue. Lalu diletakkan di moist chamber satu persatu dan
dilingkari dengan DAKO pen, kemudian ditetesi dengan blocking endogen selama 5 menit, dibuang cairannya dan direndam kembali dalam PBS dan dibersihkan
dengan tissue.Kemudian ditetesi dengan Normal rabbit serum polyclonal 3 antibodi Dako, Glostrup, Denmark AO485 selama 30 menit, protein blocking
Universitas Sumatera Utara
dibuang dengan PBS langsung ditetesi dengan antibodi primer 30-60 menit dan dibiarkan 1 malam.
Slide dilingkari dengan DAKO pen Normal rabbit serum polyclonal antibodi DAKO,Glostrup,Denmark AO485
Slide ditetesi dengan larutan DAKO Slide dibiarkan dalam 1 malam
Setelah itu dicuci dengan larutan PBS dengan pipet mengalir, dan ditetesi dengan inversion sampai menutup jaringan selam 30 menit. Dipersiapkan DAB dan
ditetesi selama 2-5 menit kemudian dibersihkan dengan PBS, setelah itu tetesi dengan HE dan ditutup dengan entelan dan slide siap untuk dibaca.
Pewarnaan dengan HE Slide siap untuk dibaca
Universitas Sumatera Utara
Slide dibaca dengan mikroskop dan dilakukan penilaian dari pengikatan antibodi dengan menilai sel neoplasma dimana HER 2 - bila pewarnaan membran
lemah atau kurang dari 10 dari sel neoplasma, HER 2 +1 bila pewarnaan tidak komplit namun lebih dari 10, HER 2 +2 bila pewarnaan moderate dan komplit
lebih dari 10 sedangkan HER 2 +3 bila pewarnaan kuat dan komplit lebih dari 10 dari sel neoplasma.
HER 2 - HER 2 +1
HER 2 +2 HER 2 +3
Universitas Sumatera Utara
3.5 PENGOLAHAN DATA 3.5.1 Besar sampel
Menurut penelitian observasional pada populasi kanker payudara stadium III dengan menetapkan persentase estimasi proporsi yang dipastikan dengan HER 2 + adalah
20 dan jumlah populasi penderita kanker payudara stadium III yang berobat ke Klinik perbulannya sekitar 50 orang dengan program komputer sum size modifikasi
Prof.dr.Iskandar Z.Lubis SpAK, maka besar sampel adalah 40 orang.
Universitas Sumatera Utara
3.6 ALUR PENELITIAN DAN KERANGKA KONSEP 3.6.1 Alur Penelitian
Blok parafin kanker payudara stadium III
HER 2 Grading Histopatogi
++++++ - I II III
3.6.2 Kerangka Konsep HER 2 + Proliferasi DNA Grading
Universitas Sumatera Utara
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Kategori