Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap Kotrimoksazol dalam Sediaan Tablet

Lampiran 1. Gambar Hasil Daya Hambat Produk Uji terhadap Staphylococcus aureus

1. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 25:125 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

2. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 50:250 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

3. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 100:500 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

4. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 200:1000 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

5. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 300:1500 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

6. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 400:2000 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

7. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 500:2500 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

Lampiran 2. Gambar Hasil Daya Hambat Produk Uji terhadap Escherichia coli

1. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 25:125 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

2. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 50:250 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

3. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 100:500 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

4. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 200:1000 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

5.Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 300:1500 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

6. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 400:2000 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

7. Daya hambat produk uji dengan konsentrasi trimetoprim:sulfametoksazol 500:2500 µg/ml

Keterangan: A = produk A; B = produk B; C = Produk C; D = Produk D; E = Produk E

Lampiran 3 . Gambar Hasil Daya Hambat Kotrimoksazol Baku 1. Daya hambat terhadap Staphylococcus aureus

Lampiran 4. Gambar Hasil Daya Hambat Blanko (Metanol-air) 1. Daya Hambat terhadap Staphylococcus aureus

Keterangan :

A. Metanol:air (0,05:9,95) ml B. Metanol:air (0,10:9,90) ml C. Metanol:air (0,20:9,80) ml D. Metanol:air (0,40:9,60) ml E. Metanol:air (0,60:9,40) ml F. Metanol:air (0,80:9,20) ml G. Metanol:air (1,00:9,00) ml

2. Daya hambat terhadap Escherichia coli

Keterangan :

A. Metanol:air (0,05:9,95) ml B. Metanol:air (0,10:9,90) ml C. Metanol:air (0,20:9,80) ml D. Metanol:air (0,40:9,60) ml E. Metanol:air (0,60:9,40) ml F. Metanol:air (0,80:9,20) ml G. Metanol:air (1,00:9,00) ml

Lampiran 5. Diameter Zona Hambat ProdukKotrimoksazol A, B, C, D, E dan Kotrimoksazol Baku terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus

1. Produk Kotrimoksazol A Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 9,7 10,8 10,8 10,43

100:500 20,7 20,4 19,7 20,26

200:1000 21,4 21,3 20,6 21,10

300:1500 22,5 22,1 21,7 22,10

400:2000 24,5 24,6 23,8 24,30

500:2500 28,4 27,6 26,8 27,60

2. Produk Kotrimoksazol B Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,3 10,8 11,5 10,86

100:500 19,2 20,1 19,5 19,60

200:1000 20,3 20,6 19,4 20,10

300:1500 20,4 20,8 19,8 20,33

400:2000 25,1 24,6 24,8 24,83

3. Produk Kotrimoksazol C Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,4 11,7 10,5 10,86

100:500 18,6 19,2 18,8 18,86

200:1000 20,7 20,5 19,7 20,30

300:1500 21,4 20,8 21,2 21,13

400:2000 22,4 21,7 22,4 22,16

500:2500 26,6 25,6 25,8 26,00

4. Produk Kotrimoksazol D Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZl)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,7 10,5 11,6 10,93

100:500 20,2 19,7 19,4 19,76

200:1000 20,4 19,5 21,1 20,33

300:1500 21,1 20,8 20,7 20,86

400:2000 23,3 22,1 23,5 22,96

500:2500 25,6 24,7 25,8 25,36

5. Produk Kotrimoksazol E Tingkat

Konsentrasi TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,7 10,6 11,3 10,86

100:500 19,1 18,8 19,5 19,13

200:1000 20,4 20,1 19,8 20,10

300:1500 21,6 21,1 20,8 21,16

400:2000 22,5 22,6 21,8 22,30

6. Kotrimoksazol Baku Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 13,5 13,8 13,3 13,53

100:500 22,0 19,8 21,6 21,13

200:1000 26,5 24,7 22,7 24,63

300:1500 27,4 26,5 25,5 26,46

400:2000 28,0 27,7 27,0 27,56

500:2500 29,7 27,9 28,0 28,53

Keterangan: TMP = Trimetoprim STZ = Sulfametoksazol

Lampiran 6. Diameter Zona Hambat Produk Kotrimoksazol A, B, C, D, E, dan Kotrimoksazol Baku terhadap Pertumbuhan Escherichia coli

1. Produk kotrimoksazol A Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,6 9,7 11,8 10,7

100:500 20,1 19,7 20,6 20,13

200:1000 21,6 21,2 20,8 21,20

300:1500 22,3 20,8 21,1 21,40

400:2000 22,4 21,7 21,6 21,90

500:2500 24,4 24,1 23,7 24,06

2. Produk Kotrimoksazol B Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,7 9,6 11,8 10,70

100:500 18,8 19,2 18,4 18,80

200:1000 21,2 20,8 20,6 20,86

300:1500 21,5 21,2 20,8 21,16

400:2000 21,2 23,7 24,6 23,16

3. Produk Kotrimoksazol C Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata)

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 11,6 9,4 10,6 10,53

100:500 19,7 19,4 18,2 19,1

200:1000 20,1 19,8 19,6 19,83

300:1500 23,3 22,8 23,1 23,06

400:2000 23,8 22,4 23,8 23,22

500:2500 23,6 23,2 24,3 23,70

4. Produk Kotrimoksazol D Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 10,6 9,7 11,7 10,66

100:500 19,7 18,8 19,2 19,23

200:1000 21,1 20,8 20,5 20,80

300:1500 21,7 21,2 20,6 21,16

400:2000 22,3 21,7 22,1 20,03

500:2500 21,5 24,2 25,6 23,76

5. Produk Kotrimoksazol E Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat (mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 11,7 9,5 11,4 10,86

100:500 19,6 19,2 19,1 19,30

200:1000 20,6 19,8 20,3 20,23

300:1500 22,3 20,6 20,8 21,20

400:2000 21,5 21,1 21,7 21,43

6. Kotrimoksazol Baku Tingkat

Konsentrasi (TMP:STZ)

(µg/ml)

Diameter Zona Hambat(mm)

1 2 3 Rata-Rata

Blanko - - - -

25:125 - - - -

50:250 11,1 10,7 11,7 11,16

100:500 18,5 18,2 17,6 18,10

200:1000 20,1 19,1 19,7 19,63

300:1500 21,7 24,3 22,7 22,90

400:2000 24,7 23,6 23,8 24,03

500:2500 25,0 27,0 25,7 25,90

Keterangan: TMP = Trimetoprim STZ = Sulfametoksazol

Lampiran 7. Analisis Statistik Data Diameter Zona Hambat terhadap Staphylococcus aureus

Analisis Statistik Menggunakan Uji Kolmogorov – Smirnov Case Processing Summary

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent diameter daya

hambat (mm)

42 100.0

%

0 .0% 42 100.0

% Descriptives Statistic Std. Error diameter daya hambat (mm)

Mean 17.7660 1.34023

95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound 15.0593 Upper Bound 20.4726 5% Trimmed Mean 18.1821

Median 20.3300

Variance 75.441

Std. Deviation 8.68568

Minimum .00

Maximum 28.53

Range 28.53

Interquartile Range 13.43

Skewness -1.105 .365

Kurtosis .090 .717

Tests of Normality

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig. diameter daya

hambat (mm)

.264 42 .000 .826 42 .000

Analisis Statistik Menggunakan Uji Kruskal-Wallis Kruskal-Wallis Test

Ranks

nama sampel N

Mean Rank diameter daya hambat

(mm)

di me nsi on 1

produk A 7 22.07 produk B 7 19.79 produk C 7 19.79 produk D 7 20.29 produk E 7 19.93

Baku 7 27.14

Total 42

Test Statisticsa,b diameter daya hambat (mm)

Chi-square 1.960

df 5

Asymp. Sig.

.855 a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: nama sampel

Lampiran 8. Analisis Statistik Data Diameter Zona Hambat terhadap Escherichia coli

Analisis Statistik Menggunakan Uji Kolmogorov – Smirnov Case Processing Summary

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent diameter daya

hambat ()

42 100.0% 0 .0% 42 100.0

% Descriptives Statistic Std. Error diameter daya hambat ()

Mean 16.9848 1.256

17 95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound 14.4479 Upper Bound 19.5216

5% Trimmed Mean 17.4856

Median 20.5150

Variance 66.274

Std. Deviation 8.14090

Minimum .00

Maximum 25.90

Range 25.90

Interquartile Range 12.12

Skewness -1.249 .365

Kurtosis .224 .717

Tests of Normality

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig. diameter daya

hambat ()

.279 42 .000 .772 42 .000

Analisis Statistik Menggunakan Uji Kruskal-Wallis Kruskal-Wallis Test

Ranks

nama sampel N

Mean Rank diameter daya hambat

()

di me nsi on 1

produk A 7 22.50 produk B 7 21.36 produk C 7 21.50 produk D 7 20.43 produk E 7 20.43

Baku 7 22.79

Total 42 Test Statisticsa,b

diameter daya hambat ()

Chi-square .232

df 5

Asymp. Sig.

.999 a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: nama sampel

Lampiran 9. Perhitungan Jumlah Serbuk Sampel yang Ditimbang Produk A

Berat 10 tablet = 5899,9 mg

Ditimbang setara 50 mg trimetoprim Jumlah yang ditimbang = 50

10 � 80 � 5899,9 �� = 368,7437 ��

Produk B

Berat 10 tablet = 5894,6 mg

Ditimbang setara 50 mg trimetoprim Jumlah yang ditimbang = 50

10 � 80 � 5894,6 �� = 368,4125 ��

Produk C

Berat 10 tablet = 6455,5 mg

Ditimbang setara 50 mg trimetoprim Jumlah yang ditimbang = 50

10 � 80 � 6455,5 �� = 403,4687 ��

Produk D

Berat 10 tablet = 6469,9 mg

Ditimbang setara 50 mg trimetoprim Jumlah yang ditimbang = 50

10 � 80 � 6469,9 �� = 404,3687 ��

Produk E

Berat 10 tablet = 6309,1 mg

Ditimbang setara 50 mg trimetoprim Jumlah yang ditimbang = 50

Lampiran 10. Gambar Produk Uji dan Peralatan Pengujian

A

B

Keterangan: A. Gambar Produk Uji B. Peralatan Pengujian

DAFTAR PUSTAKA

Abdelhalim, K.A., dan Ibrahim, A.M. (2013). Evaluation of antimicrobial resistance of urinary tract isolated Esherichia coli from Omdurman Teaching Hospital in Sudan. Journal of Bacteriology Research. 5(6): 76-77.

Adejuwon, A.O., Ajayi, A.A., Akintunde, O.O., dan Olutiola, P.O. (2010). Atibiotics Resistance and Susceptibility Pattern of a Strain of Staphylococcus aureus Assocated with Acne. International Journal of Medicine and Medical Science. 2(9): 277-280.

Andrews, J.M. (2005). BSAC Standardized Disc Susceptibility Testing Method (Version 4). Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 56: 60-76.

Brock, T.D., dan Katherine, M.B. (1978). Basic Microbiology with Applications. Seven Edition. United State of America: Prentice-Hall. Inc. Hal. 116-121.

Brooks, G.F., Butel, J.S., dan Morse, S.A. (2005). Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta: Salemba Medika. Hal. 226, 240.

Chambers, H.F. (2001). Sulfonamides, Trimethoprim, and Quinolone dalam Buku Basic and Clinical Pharmacology. Eight Edition. Editor: Bertram G. Katzung. United States of America: McGraw-Hill Companies Inc. Hal. 796, 801.

Chatim, A. (1994). Mikrobiologi Kedokteran. Edisi Revisi. Jakarta: Bina Rupa Aksara. Hal. 42.

Chinekwu, O.N., dan Anthony, A. (2013). Comparison of Susceptibility Patterns of Escherichia coli isolated from Urinary Tract Infections in Two Health Institutions in South-South Nigeria to Commonly Used Antimicrobials. African of Journal of Microbiology Research. 7(24): 3066-3070.

Chowdhury, M.A., Hossain, M.N., Rahman, M.M., dan Ashrafuzzaman, M. (2013). Prevalence of Multidrug Resistance in Human Phatogenic Staphylococcus aureus and Their Sensitivity to Allamanda cathartica L. Leaf Extract. International Current Pharmaceutical Journal. 2(11): 185-188.

Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 769, 806, 896.

Dwidjoseputro. (1990). Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Penerbit Djambatan. Hal. 22, 40-46, 50, 61, 95, 118.

Dzen, S.M., Roekistiningsih., Santoso, S., dan Winarsih, S. (2003). Bakteriologi Medik. Malang: Bayumedia Publishing. Hal. 119-123. Ekundayo, E.O., dan Olorunshola, D.O. (2008). Evaluation of The Quality of

Locally Manufactured Antimicrobial Suspectibility Testing Discs Used in South Eastern Nigeria. African Journal of Clinical and Experimental Microbiology. 9(3): 122-128.

Fardiaz, S. (1993). Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Raja Grafindo Persada. Hal. 127.

George, D.F., Gbedema, S.Y., Agyane, C., Adu, F., Boamah, V.B., Tawiah, A.A., dan Saana, S.B. (2012). Antibiotic Resistace Patterns of Escherichia Coli Isolates from Hospitals in Kumasi, Ghana. International Scholarly Researche Network. 10(5402): 1-5.

Gibson, J.M. (1996). Mikrobiologi dan Patologi Modern untuk Perawat. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran ECG. Hal 22.

Gillespie, S. H., dan Bamford, K. B. (2009). At a Glance Mikrobiologi Medis dan Infeksi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 20-21.

Gobernado, M., Valdes, L., Alos, I.J., Garcia-Rey, C., Dal-Re, R., dan Garcia de Lomas, J. (2007). Antimicrobial Susceptibility of Clinical Escherichia coli Isolates from Uncomplicated Cystitis in Woman over a 1-year Period in Spain. Rey Esp Quimioterap, Enero. 20(1): 68-76. Gunawan, S.G. (2007). Farmakologi dan Terapi. Jakarta: Penerbit Gaya Baru.

Hal. 591.

Gupta, K., Scholes, D., dan Stamm, W.E. (1999). Increasing Prevalence of Antimicrobial Resistance among Urophatogens Causing Acute Uncomplicated Cystitis in Woman. Journal of the America Medical Association. 281: 736-8.

Houvinen, P. (2001). Resistance to Trimethoprim-Silfametoxazole. Editor: George, M. Antimicrobial Research Laboratory, National Public Health Institute, Turku, Finland. Hal. 1608-1613.

Kahlmeter, G. (2000). The ECO-SENS Project: a Prospective Multinational Multicenter Epidemiological Survey of The Prevalence and Antimicrobial Susceptibility of Urinary Tract Phatogens Interim Report. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 46: 15-22.

Kumala, S., Pasanema, D.A., dan Mardiastuti. (2010). Pola Resistensi Antibiotik terhadap Isolat Bakteri Sputum Penderita Tersangka Infeksi Saluran Nafas Bawah. Jurnal Farmasi Indonesia. 5(1): 24 -32.

Lambert, H., dan Coulthard M. (2003).The child with urinary tract infection. Edisi III. Oxford: Oxford University Press. Hal. 197 – 225.

Lay, B.W. (1994). Analisis Mikroba di Laboratorium. Edisi Pertama. Cetakan Pertama. Jakarta: PT. Raja Grafindo Persada. Hal. 34 - 67.

Lestari, E.S., Severin, J.A., Filius, P.M., Kuntamen, K., and Duerink, D.O. (2008). Antimicrobial Resistance among Commensal Isolates of Escherichia coli and Staphylococcus aureus in the Indonesian Population inside and outside Hospitals. European Journal Clinical Microbial Infection Disease. 27: 45-51.

Mycek, M.J., Harvey, R.A., dan Champe, P.C. (2001). Farmakologi. Edisi Kedua. Jakarta: Widya Medika. Hal. 297.

Odusanya, M.D. (2002). Antibiotic susceptibility of microorganism at a general hospital in Lagos, Nigeria. J. Natl. Med. Assoc. 94: 994-998. Olson, R.P., Harrell, L.J., dan Kaye, K.S. (2008). Antibiotic Resistance in

Urinary Isolates of Escherichia coli from College Women with Urinary Tract Infections. Journal of Antimicrobial Agent and Chemotherapy. 53(3): 1285–1286.

Osol, A. (1980). Remington's Pharmaceutical Sciences, l6th edition. Easton-Pensivania: Mack Publishing Company. Hal. 104-135, 244-262.

Oxoid. (2013). Nutrient Agar and Nutrient Browth. England: Oxoid LTD. Pelczar, M.J., dan Chan, E.C. (1986). Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta.

Universitas Indonesia Press. Hal. 46.

Prasetyo, A., Pendit, B.U., dan Priliono, T. (2007). Buku Ajar Patologi. Jakarta: Buku Kedokteran EGC. Hal. 351.

Pratiwi, S.T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 150-164, 171.

Rajaduraipandi, K., Mani, K.R., Panneerselvan, K., Mani, M., Bhashari, M., dan Manikandam, P. (2006). Prevalence and Antimicrobial Susceptibility Pattern of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus : Amulticenter Study. Indian Journal of Mediacal Microbiology. 24(1): 34-8.

Saggar, P. (2013). A Retrospevtive Analysis of Urine Culture and Its Antimicrobial Susceptibility Test Result. Research Journal of Pharmaceutical, Biology and Chemical. 4(2): 622-627.

Siahaan, J. (2007). Uji Daya Hambat Gentamisin Sulfat, Ampisilin Trihidrat dan Kombinasinya terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus secara In Vitro. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Hal. 5.

Sobel, J.D., dan Kaye, D.(2005). Urinary tract infection in Mandell, douglas and Bennett’s.Principles and Practice of Infections Diseases. 6th ed. Philadelphia: Elsevier.Hal. 881.

Soewandhi, S.N. (2006). Kristalografi Farmasi IV. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 99-101.

Sudoyo, A.W. (2006). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jilid II, Edisi Keempat. Jakarta: Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Hal. 564.

Sukandar, E. (2007). Infeksi saluran kemih pada pasien dewasa dalam Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Jilid I. Edisi IV. Jakarta : Balai Penerbit FKUI. Hal. 553.

Sumadio, H, dan Harahap, U. (1994). Biokimia dan Farmakologi Antibiotika. Medan: USU Press. Hal. 2-4, 28.

Tamher, S. (2008). Mikrobiologi untuk Mahasiswa Keperawatan. Jakarta: CV. Trans Info Media. Hal. 27-29.

Tessy, A., Ardayo, dan Suwanto. (2001). Infeksi salauran kemih dalam Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Jilid 3. Edisi 3. Jakarta : Balai Penerbit FKUI. Hal. 369.

Tjay, T.H., dan Rahardja, K. (2002). Obat-obat Penting. Edisi V. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Hal. 80-81.

Tjay, T.H., dan Rahardja, K. (2008). Obat-obat Penting. Edisi VI. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Hal. 143-144.

Travis, L.B., dan Brouhard, B.H.(1996).Infections of urinary tract. Edisi XX. Satnford Conn: Appleton & Lange. Hal. 1388 – 1392.

Umanu, G., Alao, F.O., dan Wemambu, I.I. (2013). Prevalence and Antibiogam of Penicillin-Producing Staphylococcus aureus among Nigerian Students. International Journal of Microbiological Research. 4(1): 64-68.

Vahdani, P., Mahnaz, S., Aslani, M.M., Asarian, A.A., dan Sharafi, K. (2004). Antibiotic Resistant Patterns in MRSA Isolates from Patients Admitted in ICU and Infectious Ward. National Research Institute of Tuberculosis and Lung Disease, Iran. 3(11): 37-44.

Waluyo, L. (2010). Teknik Metode Dasar Mikrobiologi. Cetakan Kedua. Malang: UMM Press. Hal. 210-211.

Wariso, K.T., Siminialayi, I.M., dan Odigie, J.O. (2010). Pattern and antibiogram of urinary tract infection at the University of Port Harcourt Teaching Hospital. Asian Pasific Journal Tropical Medicine. 1-5. Wattimena, J.R., Sugiarso, N.C., Widianto, M.B., Sukandar, E.Y., Soemardji,

A.A., dan Setiadi, A.R. (1991). Farmakodinamik dan Terapi Antibiotik. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Hal. 1.

Winarno, S., Ma’ruf, W.F., dan Dewi, E.N. (2012). Uji Bioaktivitas Ekstrak Gelidium sp. Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Jurnal Perikanan. 1(2): 1-9.

BAB III

METODE PENELITIAN

Penelitian ini dilakukan menggunakan metode eksperimental, yang meliputi pengumpulan produk kotrimoksazol dalam sediaan tablet, penyiapan larutan uji dan inokulum bakteri serta pengujian sensitivitas bakteri terhadap produk tersebut secara mikrobiologi. Pengujian sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap kotrimoksazol dalam sediaan tablet dan kotrimoksazol baku dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan.

3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah inkubator (Memmert), otoklaf (Fisons), oven (Fisher), Laminar Air Flow Cabinet (Astec HLF 1200L), lemari pendingin (Glacio), neraca digital (Mettler Toledo), penangas air, pinset, pipet mikro (Eppendorf), jangka sorong (Kenmaster), kamera digital (Sony), bunsen, jarum ose, dan peralatan gelas.

3.1.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah kotrimoksazol dalam sediaan tablet dari 4 produk yang bermerek dan 1 produk tidak bermerek, kotrimoksazol baku (PT. Dexa Medica), nutrient agar (Oxoid), nutrient broth

(Oxoid), barium klorida, asam sulfat dan metanol (Merck) dan air suling. Bahan kimia yang digunakan berkualitas pro analisa, kecuali dinyatakan lain. 3.1.3 Mikroba Uji

Mikroba yang digunakan dalam penelitian ini adalah bakteri Escherichia coli strain American Type Culture Collection (ATCC) 8939, Staphylococcus aureus strain Korean Culture Center of Microorganisms (KCCM) 11764.

3.2 Pengambilan Sampel

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah kotrimoksazol tablet yang mengandung trimetoprim 80 mg dan sulfametoksazol 400 mg. Produk kotrimoksazol yang tidak bermerek diberi tanda A sedangkan kotrimoksazol yang bermerek masing-masing diberi tanda B, C, D, dan E. Pengambilan sampel dilakukan secara purposif dari beberapa apotek di Kota Medan.

3.3 Prosedur Penelitian

3.3.1 Pembuatan media nutrient agar

Media nutrient agar (NA) mengandung bahan-bahan sebagai berikut: Lab-Lemco powder 1,0 g

Yeast exstract 2,0 g Peptone 5,0 g Sodium chloride 5,0 g

Agar 15,0 g Cara pembuatan:

Sebanyak 28 g nutrient agar dilarutkan dalam air suling steril ad 1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di otoklaf pada suhu121°C selama 15 menit (Oxoid, 2013).

3.3.2 Pembuatan media nutrient broth

Media nutrient broth (NB) mengandung bahan-bahan sebagai berikut: Lab-Lamco powder 1,0 g

Yeast extract 2,0 g Bacto peptone 5,0 g Sodium chloride 5,0 g Cara pembuatan:

Sebanyak 13 g nutrient broth dilarutkan dalam air suling steril ad 1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit (Oxoid, 2013).

3.3.3 Pembuatan media agar miring

Sepuluh mililiter media NA dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tabung kemudian diletakkan dengan kemiringan 30-45°C dan dibiarkan pada suhu kamar hingga media memadat. Media disimpan dalam lemari pendingin (Lay, 1994).

3.3.4 Pembuatan suspensi standar McFarland 0,5

Suspensi Mc Farland 0,5 mengandung bahan-bahan sebagai berikut: Larutan barium klorida 1,175% b/v 0,5 ml

Larutan asam sulfat 1% v/v 99,5 ml Cara pembuatan:

Larutan barium klorida 1,175% b/v dan asam sulfat 1% dicampurkan dalam tabung reaksi steril, dikocok sampai homogen dan ditutup. Suspensi campuran tersebut memiliki densitas (kekeruhan) 1,5 x 108 CFU/ml (Vandepitte, 1991).

3.3.5 Pembuatan stok kultur bakteri

Sebanyak satu ose dari masing-masing biakan murni bakteri Staphylococcus aureus (KCCM 11764) dan Escherichia coli (ATCC 8939) diinokulasi pada permukaan agar miring. Biakan diinkubasi pada suhu 37°C selama 18-24 jam (Ditjen POM, 1995).

3.3.6 Pembuatan inokulum

Biakan dari stok kultur bakteri masing-masing disuspensikan ke dalam 10 ml NB steril. Suspensi diinkubasi pada suhu 370C selama 1-2 jam hingga diperoleh kekeruhan yang sama dengan suspensi standar McFarland. Sebanyak 1 ml suspensi bakteri diencerkan ke dalam 9 ml NB dan dikocok hingga homogen. Pengenceran dilanjutkan secara bertingkat hingga diperoleh suspensi bakteri dengan kekeruhan 1,5 x 106 CFU/ml (Ditjen POM, 1995).

3.3.7Pembuatan sampel uji

Sejumlah serbuk halus tablet yang setara dengan 50 mg trimetoprim dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml. Delapan mililiter metanol ditambahkan ke dalam labu, dipanaskan di atas penangas air selama 5 menit sambil dikocok. Setelah dingin, diencerkan dengan metanol sampai garis tanda, kemudian disaring menggunakan kertas saring steril. Sebanyak 0,05; 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0.8, dan 1 ml filtrat masing-masing dipindahkan ke dalam labu tentukur 10 ml dan diencerkan dengan air suling steril hingga garis tanda. Larutan uji yang disiapkan mengandung trimetoprim : sulfametoksazol dengan konsentrasi 25:125, 50:250, 100:500, 200:1000, 300:1500, 400:2000, dan 500:2500 µg/ml.

3.3.8 Pembuatan larutan baku

Sebanyak 50 mg trimetoprim dan 250 mg sulfametoksazol ditimbang, dicampurkan hingga homogeny dan dimasukkan ke labu tentukur 10 ml. Delapan mililiter metanol ditambahkan ke dalam labu, sambil dikocok. Kemudian diencerkan dengan metanol sampai garis tanda. Sebanyak 0,05; 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8, dan 1 ml larutan masing-masing dipindahkan ke dalam labu tentukur 10 ml dan diencerkan dengan air suling steril hingga garis tanda. Larutan uji yang disiapkan mengandung trimetoprim:sulfametoksazol dengan konsentrasi 25:125, 50:250, 100:500, 200:1000, 300:1500, 400:2000, dan 500:2500 µg/ml.

3.3.9Pengujian sensitivitas bakteri

Sebanyak 0,1 ml suspensi inokulum bakteri S. aureus (1,5x106 CFU/ml) dimasukkan ke dalam cawan petri steril. Sebanyak 15 milliliter media NA cair dituangkan ke dalam cawan, lalu dihomogenkan dan didiamkan pada suhu kamar hingga media memadat. Cakram kertas yang telah dicelupkan dalam laruan uji diletakkan pada permukaan media sedangkan cakram yang dicelupkan ke dalam metanol-air suling steril dengan berbagai perbandingan dan digunakan sebagai kontrol. Cawan didiamkan pada suhu kamar selama 10-15 menit kemudian diinkubasi pada suhu 36°C selama 18-24 jam. Setelah diinkubasi diameter zona hambat di sekitar cakram diukur dengan menggunakan jangka sorong. Pengujian dilakukan dengan tiga kali pengulangan (triplo). Perlakuan yang sama dilakukan terhadap inokulum bakteri E. coli (Siahaan, 2007).

3.3.10 Analisis statistika

Data-data pengujian sensitivitas bakteri S. aureus dan E. coli terhadap kotrimoksazol dari sediaan tablet disajikan sebagai rata-rata ± simpangan baku. Data tersebut dianalisis secara statistika dengan uji Kolmogorov-Smirnov dan Kruskal-Wallis menggunakan software Statistical Product and Service Solution (SPSS).

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Pengaruh campuran metanol-air terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

Campuran metanol-air digunakan untuk melarutkan sulfametoksazol dan trimetoprim dari sediaan tablet yang diuji. Tabel 4.1 menunjukkan bahwa campuran metanol-air dengan perbandingan (0,05 : 9,95 – 1,00 : 9,00) ml tidak menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli.

Tabel 4.1 Diameter zona hambat campuran metanol-air terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

Campuran metanol : air (ml)

Diameter zona hambat (mm)

Staphylococcus aureus Escherichia coli

0,05 : 9,95 0 0

0,10 : 9,90 0 0

0,20 : 9,80 0 0

0,40 : 9,60 0 0

0,60 : 9,40 0 0

0,80 : 9,20 0 0

1,00 : 9,00 0 0

Winarno, dkk. (2012) juga melaporkan bahwa metanol tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli. Penelitian yang dilakukan

oleh Siahaan (2007) menunjukkan bahwa, pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli tidak dihambat oleh air. Menurut Pramesti (1998), uji sensitivitas bakteri uji terhadap pelarut (uji kontrol negatif) bertujuan untuk memastikan ada tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan bakteri uji tersebut. Suatu faktor koreksi diperlukan jika pelarut menghambat pertumbuhan bakteri uji. Dengan demikian pengujian sensitivitas S. aureus dan E. coli terhadap produk tablet kotrimoksazol yang dilakukan dalam penelitian ini tidak memerlukan suatu faktor koreksi.

4.2 Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus terhadap Kotrimoksazol

Sensitivitas S. aureus terhadap kotrimoksazol diukur berdasarkan diameter zona hambat produk kotrimoksazol tablet terhadap pertumbuhan bakteri uji. Tabel 4.2 menunjukkan bahwa pada konsentrasi uji 25 : 125 µg/ml, kelima produk kotrimoksazol yang diuji dan kotrimoksazol baku tidak menghambat pertumbuhan S. aureus.

Penelitian yang dilakukan oleh Adejuwon, et al. (2010) dan Ekundayo (2008) juga menunjukkan bahwa pertumbuhan bakteri S. aureus tidak dihambat oleh kotrimoksazol pada kosentrasi 25 µg/ml. Menurut Andrews (2005), bakteri S. aureus sensitif terhadap kotrimoksazol jika pada pemberian dosis 25 µg/ml menghasilkan diameter zona hambat ≥ 17 mm dan resisten jika diameter zona hambat ≤ 16 mm. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa bakteri S.aureus telah resisten terhadap kotrimoksazol baik kotrimoksazol dalam sediaan tablet maupun kotrimoksazol baku, namun pemberian

kotrimoksazol pada konsentrasi 100 µg/ml efektif menghambat pertumbuhan S. aureus dengan diameter zona hambat 18,86 – 21,13 mm.

Resistensi S.aureus terhadap kotrimoksazol juga ditemukan pada penelitian Umanu, et al. (2013). Lebih dari 64% dari 80 isolat S. aureus yang diperoleh dari spesimen pelajar di Nigeria telah resisten terhadap kotrimoksazol pada konsentrasi 25 µg/ml. Penelitian terhadap spesimen isolat bakteri S. aureus yang diperoleh dari pasien penderita infeksi kulit, infeksi saluran kemih, dan endokarditis di Bangladesh menunjukkan bahwa 9 dari 25 isolat dikategorikan resisten dengan diameter zona hambat ≤ 17 mm.

Menurut penelitian Saggar (2013), 84% dari 190 kultur bakteri Staphylococcus yang diisolasi dari penderita infeksi saluran kemih resisten terhadap kotrimoksazol, bahkan strain bakteri Staphylococcus aureus resisten metisilin (MRSA) juga resisten terhadap kotrimoksazol (Rajaduraipandi, et al., 2006). Berdasarkan penelitian Lestari, et al. (2008), dari 361 isolat klinis S. aureus yang diperoleh dari pasien di rumah sakit Semarang dan Surabaya, sebanyak 6,6% diantaranya telah resisten terhadap kotrimoksazol.

Tabel 4.2 Diameter zona hambat produk kotrimoksazol terhadap bakteri Staphylococcus aureus

Keterangan: (-) tidak memberikan daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri uji

TMP = Trimetoprim STZ = Sulfametoksazol

Konsentrasi (TMP : STZ)

(µg/ml)

Diameter zona hambat kotrimoksazol (mm)

Produk A Produk B Produk C Produk D Produk E Baku

25 : 125 - - - -

50 : 250

10.43 ± 0,63 10.86 ± 0,60 10.86 ± 0,72 10.93 ± 0,58 10.86 ± 0,37 13,53 ± 0,25

100 : 500

20.26 ± 0,51 19,60 ± 0,45 18,86 ± 0,30 19.76 ± 0,40 19.13 ± 0,35 21,13 ± 1,17

200 : 1000

21.10 ± 0,43 20.10 ± 0,62 20.30 ± 0,52 20.33 ± 0,80 20.10 ± 0,30 24,63 ± 1,90

300 : 1500

22.10 ± 0,40 20,33 ± 0,50 21,13 ± 0,30 20.86 ± 0,20 21.16 ± ,40 24,46 ± 0,95

400 : 2000

24.30 ± 0,43 24,83 ± 0,25 22,16 ± 0,40 22.96 ± 0,75 22.30 ± 0,43 27,56 ± 0,51

500 : 2500

27.60 ± 0,80 25,76 ± 0,30 26,00 ± 0,52 25.36 ± 0,58 26.0 ± 0,43 28,53 ± 1,01

4.3 Uji Sensitivitas Escherichia coli terhadap Kotrimoksazol

Sensitivitas E.coli terhadap produk kotrimoksazol tablet ditunjukkan pada Tabel 4.3. Pada konsentrasi uji 25 : 125 µg/ml, kelima produk uji dan kotrimoksazol baku tidak menghambat pertumbuhan E. coli. Penelitian Ekundayo (2008) juga menunjukkan hasil yang sama dengan penelitian ini.

Bakteri E. coli dikatakan sensitif terhadap kotrimoksazol jika pada pemberian dosis 25 µg/ml menghasilkan diameter zona hambat ≥ 16 mm dan resisten jika diameter zona hambat ≤ 15 mm (Andrews, 2005). Oleh karena itu, hasil penelitian ini mengindikasikan bahwa bakteri E. coli juga telah resisten terhadap kotrimoksazol, namun produk kotrimoksazol tablet dan baku masih tetap efektif menghambat pertumbuhan E.coli pada konsentrasi 100 µg/ml dengan diameter zona hambat 18,10 – 20,13 mm.

Berdasarkan penelitian George, et al. (2012), 78,4% dari 150 isolat klinis E. coli dari beberapa rumah sakit di Kumasi, Ghana telah resisten terhadap kotrimoksazol. Olson, et al. (2008) melaporkan bahwa 29,6% dari 176 isolat klinis E. coli dari pasien dengan infeksi saluran kemih di Bagian Tenggara Amerika Serikat telah resisten terhadap kotrimoksazol. Resistensi kotrimoksazol muncul dan cenderung meningkat setelah digunakan secara klinis. Menurut Kahlmeter (2000), resistensi bakteri E. coli < 1% pada tahun 1970an, kemudian meningkat secara bertahap di dunia hingga melebihi 60%. Resistensi E. coli terhadap kotrimoksazol mencapai 15,7% di 16 kota di Eropa, 34,8% di Portugal dan Spanyol. Gupta (1999) melaporkan bahwa di Amerika Serikat sebanyak 18% E. coli resisten terhadap kotrimoksazol.

Menurut Gobernado, et al. (2007), 25,9% dari 2292 isolat klinis E. coli dari pasien dengan infeksi saluran kemih di Spanyol telah resisten terhadap kotrimoksazol. Chinekwu dan Antony (2013) melaporkan bahwa dari 1797 isolat klinis E. coli yang diperoleh di Nigeria Selatan, tingkat sensitivitasnya yang paling rendah adalah terhadap kotrimoksazol yaitu hanya 13,9%. Menurut penelitian Wariso, et al. (2013), di Nigeria Selatan sensitivitas E. coli terhadap kotrimoksazol hanya 7,1%, dan di Daerah Barat Nigeria 8,8 – 11,9% (Odusannya, et al., 2000).

Berdasarkan penelitian Lestari, et al. (2008), dari 3284 isolat klinis E.coli yang diperoleh dari pasien di rumah sakit Semarang dan Surabaya, 35% telah resisten terhadap kotrimoksazol. Komara (2009) melaporkan bahwa dari 567 isolat klinis E. coli dari pasien dengan infeksi saluran kemih di Indonesia pada tahun 2001-2005 sensitivitasnya terhadap kotrimoksazol hanya sekitar 34% dan cenderung resisten. Menurut penelitian Kumala, dkk. (2010) sebanyak 7 isolat E. coli yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia seluruhnya telah resisten terhadap kotrimoksazol.

Bakteri menjadi resisten terhadap antibiotik karena terjadi mutasi kromosom, perubahan ekspresi gen yang disebabkan oleh perubahan materi genetik, baik secara transduksi, transformasi maupun konjugasi dari plasmid. Resistensi dapat terjadi terhadap beberapa jenis antibiotik yang dipengaruhi oleh penggunaan obat yang tidak tepat (Abdelhalim dan Ibrahim, 2013). Resistensi pada E.coli terjadi karena produksi dehidrofolat reduktase yang

berlebih, dan substisusi asam amino tunggal dalam gen dehidrofolat reduktase sehingga mengubah kromosom yang telah dikodekan. Hal ini juga yang terjadi pada S.aureus sehingga menjadi resisten terhadap kotrimoksazol (Houvinen, 2001).

4.4 Analisis Perbandingan Produk dan Kotrimoksazol Baku

Analisis statistika dengan uji Kolmogorov-Smirnov menunjukkan bahwa data diameter zona hambat produk tablet kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku terhadap mikroba uji tidak homogen (p < 0,05). Oleh karena itu, analisis statistika selanjutnya dilakukan menggunakan uji Kruskal-Wallis. Uji Kruskal Wallis menunjukkan bahwa produk-produk tablet

kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku pada konsentrasi 25 : 125 – 500 : 2500 µg/ml memiliki efektivitas yang sama terhadap bakteri S.

aureus dan E. coli (p > 0,05). Dengan demikian dapat dinyatakan bahwa produk-produk kotrimksazol dalam bentuk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku memiliki mutu yang sama secara mikrobiologi. Hasil analisis statistika dapat dilihat pada Lampiran 7 dan 8.

Tabel 4.3 Diameter zona hambat produk kotrimoksazol terhadap bakteri Escherichia coli

Keterangan: (-) tidak memberikan daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri uji.

TMP = Trimetoprim STZ = Sulfametoksazol

Konsentrasi (TMP : STZ)

(µg/ml)

Diameter zona hambat kotrimoksazol (mm)

Produk A Produk B Produk C Produk D Produk E Baku

25 : 125 - - - -

50 : 250

10.70 ± 1,05 10.70 ± 1,10 10.53 ± 1,10 10.66 ± 1,00 10.86 ± 1,19 11,16 ± 0,50

100 : 500

20.13 ± 0,45 18.80 ± 0,40 19.10 ± 0,79 19.23 ± 0,45 19.30 ± 0,26 18,10 ± 0,45

200 : 1000

21.20 ± 0,40 20,86 ± 0,25 19,83 ± 0,30 20.80 ± 0,30 20.23 ± 0,40 19,63 ± 0,50

300 : 1500

21.40 ± 0,79 21,16 ± 0,35 23,06 ± 0,25 21.16 ± 0,55 21.20 ± 0,87 22,90 ± 1,31

400 : 2000

21.90 ± 0,43 23.16 ± 1,76 23.33 ± 0,50 22.03 ± 0,30 21.43 ± 0,30 24,03 ± 0,58

500 : 2500

24.06 ± 0,35 24,10 ± 0,30 23,70 ± 0,55 23.76 ± 2,08 23.26 ± 1,06 25,90 ± 1,01

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

1. Produk tablet kotrimoksazol A, B, C, D, da E dan kotrimoksazol baku efektif terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli pada konsentrasi 100 µg/ml dengan diameter zona hambat masing-masing 18,86 – 21,13 mm dan 18,10 – 20,13 mm.

2. Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli resisten terhadap seluruh produk tablet kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku pada konsentrasi 25 µg/ml.

3. Produk kotrimoksazol A, B, C, D, E dan kotrimoksazol baku memiliki mutu yang sama secara mikrobiologi.

5.2 Saran

Kepada peneliti selanjutnya untuk menguji sensitivitas isolat klinis bakteri Staphyloccocus aureus dan Escherichia coli terhadap kotrimoksazol.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Infeksi

Penyakit dapat timbul dengan beberapa penyebab, salah satunya adalah mikroba patogen seperti bakteri, jamur, virus, dan lain-lain. Penyakit yang disebabkan oleh mikroba patogen ini disebut dengan penyakit infeksi. Infeksi terjadi apabila mikroorganisme yang masuk ke dalam tubuh menyebabkana berbagai gangguan fisiologis normal tubuh, sehingga timbul penyakit infeksi. Penyakit infeksi memiliki kemampuan menular kepada orang lain yang sehat sehingga populasi penderita dapat meluas, karena penyebab penyakit ini adalah mikroorganisme yang hidup dan berkembang dengan berbagai cara. Salah satu penyakit infeksi yang banyak terjadi di Indonesia adalah infeksi saluran kemih. (Wattimena, dkk., 1991).

2.1.1 Infeksi saluran kemih

Infeksi Saluran Kemih (ISK) merupakan istilah umum yang dipakai untuk menunjukkan keberadaan mikroorganisme di dalam urin. Adanya bakteri di dalam urin disebut bakteriuria. Bakteriauria menunjukkan pertumbuhan mikroorganisme murni lebih dari 105 colony forming units pada biakan urin (Sukandar, 2007).

Menurut Sukandar (2007), umumnya ISK disebabkan oleh mikroorganisme tunggal seperti:

- Escherichia coli, merupakan mikroorganisme yang paling sering diisolasi dari pasien ISK,

- mikroorganisme lain yang juga sering ditemukan adalah Proteus spp, Klebsiella spp, dan Staphylococcus,

- infeksi yang disebabkan oleh Pseudomonas jarang ditemukan kecuali pasca katerisasi.

Perempuan mengidap ISK 10 kali lebih sering dibandingkan dengan laki-laki, karena jarak antara kandung kemih dan uretra adalah 5 cm, sedangkan pada laki-laki adalah 20 cm (Prasetyo, dkk., 2007).

Penyakit ISK merupakan masalah kesehatan masyarakat di Indonesia yang perlu mendapatkan perhatian yang serius. Diperkirakan 8% anak wanita dan 2% anak laki-laki pernah mengalami ISK pada masa kanak-kanaknya (Travis dan Brouhard, 1996). Insiden ISK belum diketahui dengan pasti. Swedia melaporkan pada tahun 1999 didapatkan 2,2% pada anak laki-laki dan 2,1% pada anak wanita pada usia 2 tahun, dan pada usia 6 tahun menjadi 2,5% pada anak laki-laki dan 8,0% pada anak wanita.Sedangkan di Inggris utara insiden ISK pada anak usia 16 tahun adalah 3,6% pada anak laki-laki dan 11,3% pada anak wanita (Lambert dan Coulthard, 2003). Pada pengobatan pasien ISK perlu dilakukan terapi dengan antibiotik. Beberapa antibiotik pilihan utama yang digunakan adalah nitrofurantoin, trimetoprim dan kotrimoksazol selama 3-5 hari berturut-turut (Tjay, 2008).

2.2 Antibiotik

2.2.1 Mekanisme kerja antibiotik

Antibiotik dapat diklasifikasikan berdasarkan spektrum atau kisaran kerja dan mekanisme aksinya. Berdasarkan spektrum atau kisaran kerjanya, antibiotik dapat dibedakan menjadi antibiotik berspektrum sempit (narrow spectrum) yang hanya mampu menghambat segologan bakteri saja, bakteri Gram negatif atau bakteri Gram positif saja, dan antibiotik berspektrum luas (broad spectrum) yang dapat menghambat atau membunuh bakteri dari golongan Gram positif maupun Gram negatif. Berdasarkan mekanisme aksinya, antibiotik dibedakan atas:

1. Antibiotik dengan menghambat sintesis dinding sel

Antibiotik ini adalah antibiotik yang merusak lapisan peptidoglikan yang menyusun dinding sel bakteri, contohnya penisilin. Penisilin mengandung stuktur yang mengandung inti berupa cincin laktam. Penisilin diproduksi secara alami maupun semisintetik. Mekanisme kerjanya adalah dengan mencegah ikatan silang peptidoglikan pada tahap akhir sintesis dinding sel, yaitu dengan menghambat protein pengikat penisilin (penicillin binding protein). Contoh antibiotik yang memiliki mekanisme menghambat sintesis dinding sel adalah monobaktam, sefalosporin, karbapenem, basitrasin, vankomisin dan isoniazid (INH) (Pratiwi, 2008).

2. Antibiotik yang merusak membran plasma

Antibiotik yang bersifat merusak membran plasma umum terdapat pada antibiotik golongan polipeptida yang bekerja dengan mengubah permeabilitas

membran plasma sel bakteri. Contohnya adalah polimiksin B yang melekat pada fosfolipid membran, amfoterisin B, mikonazol, dan ketokonazol yang ketiganya merupakan antifungi yang bekerja dengan cara berkombinasi dengan sterol pada membran plasma fungi (Pratiwi, 2008).

3. Antibiotik yang menghambat sintesis protein

Kloramfenikol, tertrasiklin, aminoglikosida eritromisin, dan linkomisin dapat menghambat sintesis protein pada bakteri, namun mekanisme yang tepat belum diketahui seluruhnya (Brooks et al., 2005).

4. Antibiotik yang menghambat sintesis asam nukleat (DNA/RNA)

Penghambatan pada sintesis asam nukleat berupa penghambatan terhadap transkripsi dan replikasi mikroorganisme. Antibiotik penghambat sintesis asam nukleat ini adalah golongan kuinolon dan rifampin (Pratiwi, 2008).

5. Antibiotik yang menghambat sintesis metabolit esensial

Penghambatan terhadap sintesis metabolit esensial antara lain dengan adanya kompetitor berupa antimetabolit, yaitu substansi yang secara kompetitif menghambat metabolit mikroorganisme, karena memiliki struktur yang mirip dengan substrat normal bagi enzim metabolisme. Contohnya adalah antimetabolit sulfanilamid dan para amino benzoic acid (PABA). PABA merupakan substrat untuk reaksi enzimatik sintesis asam folat. Struktur sulfa mirip dengan PABA sehingga sulfa merupakan inhibitor kompetitif PABA dalam hal berikatan dengan enzim. Dengan demikian, jika sulfa berikatan dengan enzim, maka tidak akan terbentuk kompleks enzim-substrat dan tidak

akan terbentuk produk berupa asam folat. Antibiotik yang saat ini sering digunakan adalah kombinasi antara trimetoprim dengan sulfametoksazol (TMP-SMZ) yang berspektrum luas kecuali pada Pseudomonas. Kombinasi ini bertujuan untuk mengurangi efek resistensi bakteri (Pratiwi, 2008).

2.2.2 Kombinasi antibiotik

Menurut Brooks et al. (2005), penggunakan dua atau lebih antibiotik secara bersamaan dapat disebabkan oleh beberapa alasan seperti:

- untuk memberi pengobatan yang tepat bagi pasien yang mempunyai infeksi mikroba serius, kemudian dibuat dugaan terbaik terhadap dua atau lebih mikroba patogen yang paling mungkin, dan obat yang ditujukan untuk organisme tersebut;

- untuk menunda munculnya mutan mikroba yang resisten terhadap satu obat dalam infeksi dilakukan dengan menggunakan dua atau tiga obat yang tidak memiliki reaksi silang;

- untuk mengobati infeksi campuran, terutama akibat trauma yang luas atau yang merusak struktur vaskular;

- untuk mencapai efek sinergisme bakterisidal atau untuk memberikan efek bakterisidal. Penggunakan dua obat secara bersamaan dapat menurunkan dosis secara signifikan, sehingga menghindari toksisitas obat, namun efek antimikroba masih tetap baik.

2.2.3 Resistensi mikroba terhadap antibiotik

Secara umum resistensi dapat diartikan sebagai suatu keadaan dimana organisme secara normal mempunyai kemampuan untuk menentang

agen-agen di sekitarnya yang dapat mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangannya secara alamiah. Dalam hal ini termasuklah racun, iritan dan mungkin juga mikroorganisme patogen lainnya (Sumadio dan Harahap, 1995). Timbulnya resistensi mikroba terhadap antibiotik pada dasarnya merupakan usaha mikroba supaya dapat tetap bertahan hidup. Menurut Gillespie dan Bamford (2008) ada beberapa mekanisme yang menyebabkan suatu populasi bakteri menjadi resisten terhadap antibiotik :

- mikroba memproduksi enzim yang merusak antibiotik, contohnya Staphylococcus memproduksi enzim β-laktamase yang memecah cincin β-laktam dari penisilin;

- mikroba mengubah permeabilitas membran selnya, contohnya Pseudomonas sp., bersifat impermeabel terhadap beberapa antibiotik β-laktam;

- mikroba mengubah stuktur target terhadap antibiotik, contohnya resistensi bakteri terhadap aminoglikosida dan eritromisin karena terjadi perubahan pada struktur ribosom;

- mikroba mengembangkan jalan metabolisme baru, bakteri membuat suatu jalur alternatif untuk menghindari blokade metabolisme akibat atibiotik; - mikroba mengembangkan enzim yang tetap berfungsi untuk

metabolismenya, tetapi tidak dipengaruhi oleh antibiotik, contonya resistensi terhadap trimetoprim;

2.3 Kotrimoksazol

Kotrimoksazol merupakan kombinasi sulfametoksazol dan trimetoprim dalam perbandingan 5:1.

2.3.1 Sulfametoksazol

Menurut Ditjen POM (1995), karakteristik sulfametoksazol adalah: rumus struktur

nama kimia : N1 – (5-metil-3-isoksazolil)sulfanilamide rumus molekul : C10H11N3O3S

berat molekul : 253,28

pemerian : Serbuk hablur, putih sampai hampir putih, praktis tidak berbau

kelarutan : Praktis tidak larut dalam air, dalam eter dan dalam kloroform, mudah larut dalam aseton dan dalam larutan natrium hidroksida encer, agak sukar larut dalam etanol.

Sulfonamida mempunyai struktur kimia yang analog dengan asam paraaminobenzoat (PABA), suatu bahan biokimia yang sangat penting untuk sintesis tertrahidrofolat. Sulfonamida secara kompetitif menghambat penggunaan PABA oleh bakteri untuk membentuk asam dihidropteroat, yang

digunakan sebagai prekursor asam pteroilglutamat (PGA) (Sumadio dan Harahap, 1995).

2.3.2 Trimetoprim

Menurut Ditjen POM (1995), karakteristik trimetoprim adalah: rumus struktur

nama kimia : 2,4-Diamino-5-(3,4,5-trimetoksibenzil)pirimidina rumus molekul : C14H18N4O3

berat molekul : 290,36

pemerian : Hablur atau serbuk hablur,putih sampai krem, tidak berbau

kelarutan : Sangat sukar larut dalam air, larut dalam benzilalkohol, agak sukar larut dalam kloroform dan dalam metanol, sangat sukar larut dalam etanol dan dalam aseton, praktis tidak larut dalam eter dan dalam karbon tetraklorida.

Trimetoprim adalah suatu diaminopirimidin yang kuat menghambat enzim hidrofolat reduktase bakteri, yang mereduksi dihidrofolat menjadi tetrahidrofolat. Tetrahidrofolat sangat penting untuk mentransfer satu fragmen

karbon yang dibutuhkan untuk biosintesis purin, pirimidin dan beberapa asam amino dalam sel bakteri (Sumadio dan Harahap, 1995).

2.3.3 Farmakokinetik

Trimetoprim diabsorpsi dengan baik di usus dan didistribusikan secara luas dalam caian dan jaringan tubuh, termasuk cairan serebrospinal. Trimetoprim lebih larut dalam lemak dibandingkan sulfametoksazol, maka volume distribusi trimetoprim lebih banyak dibandingkan sulfametoksazol. Jika satu bagian trimetorim diberikan dengan lima bagian sulfametoksazol, maka konsentrasi plasma puncaknya adalah pada rasio 1:20 yang merupakan konsentrasi optimal. Sulfametoksazol lebih banyak terikat pada protein plasma dibandingkan dengan trimetoprim (Chambers, 2001).

2.3.4 Kegunaan

Kombinasi sulfametoksazol dan trimetoprim menjadi terapi efektif untuk infeksi, meliputi infeksi saluran kemih, pneumonia akibat Pneumocystis jiroveci, shigelosis, infeksi salmonella sistemik, dan beberapa infeksi Mycobacterium non tuberculosis. Kotrimoksazol merupakan pengobatan yang efektif untuk infeksi-infeksi saluran kemih dengan komplikasi, alat kelamin (prostatitis) dan saluran cerna (Chambers, 2001).

2.3.5 Efek samping

Efek samping penggunaan kotrimoksazol dapat berupa gangguan kulit dan gangguan lambung-usus, dan stomatitis. Pada dosis tinggi efek sampingnya juga berupa demam dan gagguan fungsi hati dan kelainan pada darah (neutropenia, trombositopenia). Penggunaan lebih dari dua minggu

hendaknya disertai dengan pengawasan darah. Risiko kristaluria dapat dihindari dengan meminum lebih dari 1,5 liter air sehari (Tjay, 2002).

2.3.6 Bentuk sediaan

Kotrimoksazol tersedia dalam bentuk tablet oral yang mengandung 400 mg sulfametoksazol dan 80 mg trimetoprim atau 800 mg sulfametoksazol dan 160 mg trimetoprim. Untuk anak-anak tersedia dalam bentuk suspensi oral yang mengandung 200 mg sulfametoksazol dan 40 mg trimetoprim per 5 ml, serta tablet pediatrik yang mengandung 100 mg sulfametoksazol dan 20 mg trimetoprim. Untuk pemberian intravena tersedia sediaan infus yang mengandung 400 mg sulfametoksazol dan 80 mg trimetoprim per 5 ml (Gunawan, 2007).

2.3.7 Dosis

Pemberian secara oral: 80 mg trimetoprim dan 400 mg sulfametoksazol, untuk dosis dewasa 160 mg trimetoprim dan 800 mg sulfametoksazol. Dalam sediaan suspensi 40 mg trimetoprim dan 200 mg sulfametoksazol per 5 ml. Pemberian secara parenteral: 80 mg trimetoprim dan 400 mg sulfametoksazol per 5 ml ( Chambers, 2001).

2.3.8 Mekanisme kerja

Sulfametoksazol-trimetoprim bekerja sinergis dengan cara menghambat sintesis prekursor DNA, RNA, dan protein yaitu asam folat pada tahap yang berbeda. Sulfametoksazol yang merupakan sulfonamid yang memiliki struktur analog PABA secara kompetitif menghambat sintesis asam dihidrofolat dari PABA. Selanjutnya trimetoprim yang secara struktural analog dengan asam

dihidrofolat secara kompetitif menghambat sintesis asam tetrahidrofolat (Pratiwi, 2008).

2.3.9 Resistensi terhadap sulfonamida dan trimetoprim

Sulfonamida dan trimetoprim menghambat reaksi yang berbeda pada jalur metabolisme yang memproduksi asam tetrahidrofolat (tetrahydrofolic acid), yang merupakan kofaktor esensial dalam sintesis asam nukleat. Resistensi terhadap sufonamid dan trimetoprim disebabkan oleh mutasi pada gen pengkode enzim yang terlibat dalam jalur metabolisme sintesis asam tetrahidrofolat. Enzim berubah berfungsi secara normal namun tidak dihambat oleh sulfonamida dan trimetoprim. Pencegahan resistensi dapat dilakukan dengan menggunakan penakaran obat yang relatif tinggi, melebihi dosis efektif minimal, dan digunakan dalam waktu yang singkat. Cara pencegahan yang lain adalah dengan pembatasan pemberian antibiotik hanya untuk penyakit infeksi yang parah dan penggunaan dosis yang benar dan sesuai aturan (Pratiwi, 2008).

2.4 Bakteri

Bakteri adalah sel prokariotik yang khas, uniseluler dan tidak mengandung struktur yang dibatasi membran dalam sitoplasmanya. Reproduksi terutama secara aseksual yaitu dengan pembelahan biner sederhana. Beberapa dapat tumbuh pada suhu 00C, ada yang tumbuh dengan baik pada sumber air panas yang suhunya 900C atau lebih (Pelczar dan Chan 1986).

2.4.1 Klasifikasi bakteri

Berdasarkan bentuk morfologinya, bakteri dapat dibagi atas tiga golongan (Dwidjoseputro, 1990) yaitu:

a. Golongan Basil

Berbentuk seperti tongkat pendek, silindris dan dapat dibedakan atas : - Streptobasil, yaitu basil yang bergandeng-gandengan panjang. - Diplobasil, yaitu basil yang bergandengan dua-dua

b. Golongan Kokus

Bakteri yang bentuknya serupa bola-bola kecil. Bentuk kokus ini dapat dibedakan atas:

- Streptokokus, yaitu kokus yang bergandengan panjang serupa rantai. - Diplokokus, yaitu kokus yang bergandengan dua-dua.

- Tetrakokus, yaitu kokus yang mengelompok berempat.

- Stafilokokus, yaitu kokus yang mengelompok berupa suatu untaian. - Sarsina, yaitu kokus yang mengelompok serupa kubus.

c. Golongan Spiril

Spiril adalah bakteri yang berbengkok-bengkok serupa spiral. Bakteri yang berbentuk spiral ini tidak banyak dan merupakan golongan yang paling kecil dibandingkan golongan kokus dan basil.

2.4.2 Pengaruh lingkungan terhadap pertumbuhan bakteri

Kondisi lingkungan yang mendukung dapat memacu pertumbuhan dan reproduksi bakteri. Faktor-faktor lingkungan yang berpengaruh terhadap pertumbuhan dan reproduksi bakteri (Tamher, 2008) antara lain:

a.Suhu

Seperti halnya makhluk hidup tingkat tinggi, untuk pertumbuhannya bakteri memerlukan suhu tertentu. Berdasarkan suhu yang diperlukan untuk tumbuh, bakteri dapat dibagi menjadi :

- bakteri psikrofil, yaitu bakteri yang tumbuh pada suhu antara 0-200C, dengan suhu optimal 250C;

- bakteri mesofil, yaitu bakteri yang tumbuh pada suhu antara 25-400C, dengan suhu optimal 370C;

- bakteri termofiL, yaitu bakteri yang tumbuh antara suhu 50-600C. b. pH

Bakteri juga memerlukan pH tertentu untuk pertumbuhannya. Umumnya bakteri memiliki jarak pH yang sempit, yaitu sekitar 6,5-7,5 atau pada pH netral. Beberapa bakteri ada yang dapat hidup pada pH 4, dan ada juga yang dapat hidup pada pH alkalis.

c. Kelembaban

Bakteri pada umumnya memerlukan lingkungan dengan kelembaban yang cukup tinggi untuk hidup, yaitu 80%. Pengurangan kadar air dari protoplasmanya menyebabkan kegiatan metabolisme terhenti, misalnya pada proses pembekuan dan pengeringan.

d. Cahaya

Cahaya sangat berpengaruh pada proses pertumbuhan bakteri. Umumnya cahaya merusak sel mikroorganisme yang tidak berklorofil. Sinar ultraviolet dapat menyebabkan terjadinya ionisasi komponen sel yang

berakibat menghambat pertumbuhan atau menyebabkan kematian. Pengaruh cahaya terhadap bakteri dapat digunakan sebagai dasar proses sterilisasi atau pengawetan bahan makanan.

e. Pengaruh oksigen

Mikroorganisme sering dibagi menjadi 4 kelompok berdasarkan kebutuhannya akan oksigen (Lay,1994) yaitu:

- aerob obligat , yaitu mikroorganisme yang memerlukan oksigen untuk hidupnya;

- anaerob obligat, yaitu mikroorganisme yang tidak dapat hidup bila ada oksigen;

- anaerob fakultatif, yaitu mikroorganisme yang mampu tumbuh dalam lingkungan dengan atapun tanpa oksigen;

- mikroaerofil, yaitu mikroorganisme yang memerlukan oksigen, namun hanya dapat tumbuh bila kadar oksigen diturunkan menjadi 15% atau kurang.

2.5 Bakteri Uji

2.5.1 Bakteri Escherichia coli

Bakteri ini termasuk bakteri Gram negatif, berbentuk batang, bersifat anaerob fakultatif. Batas-batas suhu untuk pertumbuhannya ialah 8-460C, sedangkan tumbuh sangat baik pada suhu 370C (Chatim, 1994; Dwidjoseputro, 1990). Bakteri Escherichia coli merupakan flora normal di dalam intestin, dapat menyebabkan infeksi saluran kemih yang merupakan

infeksi terbanyak (80%); gastroenteritis dan meningitis pada bayi, peritonitis, infeksi luka dan lainnya (Gibson, 1996).

2.5.2 Bakteri Staphylococcus aureus

Bakteri ini termasuk bakteri Gram positif , berbentuk kokus, bersifat anaerob fakultatif. Batas-batas suhu untuk pertumbuhannya ialah 150C sampai 400C, sedangkan suhu pertumbuhan optimum ialah 35-370C (Chatim, 1994; Dwidjoseputro, 1990).

Staphylococcus aureus adalah suatu bakteri penyebab keracunan yang memproduksi enterotoksin. Bakteri ini sering ditemukan pada makanan-makanan yang mengandung protein tinggi. Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif berbentuk kokus dengan diameter 0.7 – 0.9 µm. Staphylococcus aureus tahan garam dan tumbuh dengan baik pada medium yang mengandung 7.5% NaCl, serta dapat memfermentasi manitol (Fardiaz, 1993).

2.6 Uji Sensitivitas Bakteri terhadap Antibiotik

Uji sensitivitas bakteri terhadap antibiotik bertujuan untuk mengetahui apakah antibiotik yang digunakan masih dapat mengatasi infeksi yang disebabkan oleh bakteri. Uji sensitivitas bakteri terhadap antibiotik pada dasarnya dapat dilakukan dengan beberapa cara antara lain :

a. Metode Dilusi

Metode dilusi digunakan untuk menentukan KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) dan KBM (Konsentrasi Bunuh Minimum) dari antibiotik.

Pengujian dilakukan menggunakan tabung reaksi yang diisi media cair dan sejumlah tertentu sel mikroba. Masing-masing tabung kemudian diisi dengan obat pada rentang konsentrasi tertentu. Selanjutnya tabung diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam dan diamati terjadinya kekeruhan pada tabung. Konsentrasi terendah obat pada tabung yang ditunjukkan dengan hasil biakan yang mulai tampak jernih (tidak ada pertumbuhan mikroba) adalah KHM. Biakan dari semua tabung jernih diinokulasikan pada media padat, diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam dan diamati ada tidaknya koloni mikroba yang tumbuh. Konsentrasi terendah obat pada biakan padat yang ditunjukkan dengan tidak adanya pertumbuhan mikroba adalah KBM (Dzen dkk., 2003). b. Metode Difusi

Pada metode difusi obat dijenuhkan ke dalam cakram kertas. Cakram kertas diletakkan di atas permukaan media padat yang telah dicampur dengan mikroba, dan diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam. Zona hambat disekitar cakram kertas yang menunjukkan daya hambat antibiotik terhadap pertumbuhan mikroba. Sensitivitas bakteri terhadap antibiotik dapat dievaluasi menggunakan metode Kirby-Bauer dan Joan-Stokes (Dzen dkk., 2003).

Metode Kirby Bauer, sensitivitas bakteri ditentukan dengan membandingkan diameter zona hambat disekitar cakram dengan tabel standar yang dibuat oleh masing-masing negara.

 Metode Joan-Stokes, sensitivitas bakteri ditentukan dengan membandingkan radius zona hambatan yang terjadi antara bakteri kontrol

yang sudah diketahui kepekaannya terhadap obat tersebut dengan isolat bakteri yang diuji.

c. Metode E-test

Metode E-test digunakan untuk mengestimasi KHM. Pada metode ini digunakan strip plastik yang mengandung antibiotik dari konsentrasi terendah hingga tertinggi dan diletakkan pada permukaan media agar yang telah ditanami bakteri.pengamatan dilakukan pada daerah jernih yang menunjukkan konsentrasi antibiotik yang menghambat pertumbuhan bakteri. Prinsip metode ini juga berdasarkan metode difusi (Pratiwi, 2008).

d. Metode Cup-plate

Metode ini pada prinsipnya juga menggunakan metode difusi, dilakukan dengan membuat sumur sedemikian rupa pada media agar yang telah ditanami bakteri. Antibiotik dengan berbagai konsentrasi dimasukkan ke dalam sumur tersebut, dan diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam, kemudian diamati diameter zona hambat disekitar sumur (Pratiwi, 2008).

BAB I PENDAHULUAN

1.1Latar Belakang

Penyakit infeksi adalah penyakit yang disebabkan oleh mikroba patogen dan bersifat sangat dinamis. Pada negara-negara berkembang seperti halnya Indonesia penyakit infeksi merupakan penyebab utama tingginya angka kesakitan (mordibity) dan angka kematian (mortality). Salah satu penyakit infeksi yang banyak terjadi di Indonesia adalah infeksi saluran kemih (ISK). Kasus infeksi saluran kemih di Indonesia masih cukup tinggi. Keadaan ini tidak terlepas dari tingkat kesehatan masyarakat Indonesia yang mayoritas masih jauh dari standar. Tingkat kehidupan sosial ekonomi yang tidak merata juga berpengaruh pada perkembangan kasus infeksi saluran kemih di Indonesia. Secara epidemiologi, sekitar 25–35% perempuan dewasa mengalami ISK selama hidupnya (Sudoyo, 2006). Penyakit infeksi saluran kemih terutama disebabkan oleh bakteri Gram negatif seperti Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, bakteri Gram positif seperti Staphylococcus aureus dan beberapa fungi serta virus (Tessy, dkk., 2001; Sobel, 2005).

Pengobatan medis untuk penyakit infeksi secara umum menggunakan antibiotik. Antibiotik adalah senyawa kimia yang dihasilkan oleh mikroba secara alami, yang dalam konsentrasi tertentu mampu menghambat pertumbuhan mikroba lain (Sumadio dan Harahap, 1994). Antibiotik ada yang

sintetik dan semisintetik. Antibiotik sintetik dibuat secara kimiawi di laboratorium, sedangkan antibiotik semisintetik diperoleh melalui modifikasi kimia dari senyawa alami yang dihasilkan mikroorganisme (Dzen, dkk., 2003)

Antibiotik sering digunakan dalam bentuk kombinasi untuk pengobatan penyakit infeksi tertentu. Hal ini dapat mempengaruhi kerja masing-masing antibiotik. Kombinasi antibiotik dapat bersifat sinergis yaitu menyebabkan timbulnya efek terapetik yang lebih besar dibandingkan bila antibiotik tersebut digunakan secara tunggal. Sinergisme antara dua macam antibiotik dapat bersifat adisi (sumasi), dimana efek kombinasi merupakan penjumlahan dari aktivitas masing-masing antibiotik. Efek sinergisme dapat pula bersifat potensiasi, yaitu aktivitas salah satu antibiotik diperkuat oleh antibiotik lainnya. Kombinasi antibiotik dapat pula bersifat antagonis, dimana antibiotik yang satu bersifat mengurangi atau meniadakan khasiat antibiotik kedua (Pratiwi, 2008).

Salah satu contoh kombinasi antibiotik yang digunakan dalam terapi pengobatan infeksi adalah sulfametoksazol dan trimetoprim (kotrimoksazol). Kotrimoksazol merupakan kombinasi sulfametoksazol dan trimetoprim dalam perbandingan 5:1. Kombinasi ini bersifat bakterisid dengan spektrum kerja lebih luas dibandingkan dengan sulfonamida. Trimetoprim dan sulfametoksazol menghambat reaksi enzimatik obligat bakteri pada dua tahap secara berurutan sehingga memberikan efek sinergistik (Mycek, 1995).

Kotrimoksazol merupakan salah satu antibiotik pilihan untuk infeksi saluran kemih. Kotrimoksazol juga digunakan secara oral dan parenteral

sebagai antibakteri untuk mengobati berbagai penyakit infeksi lain seperti penyakit infeksi alat kelamin (prostatitis), saluran cerna (salmonellosis), dan saluran pernafasan (bronchitis). Kotrimoksazol dalam dosis tinggi juga digunakan untuk pengobatan dan pencegahan radang paru pada penderita AIDS. Obat ini juga aktif terhadap Proteus dan Chlamyda (Tjay, 2008).

Sensitivitas mikroba terhadap antibiotik perlu diketahui untuk menunjang terapi pengobatan yang rasional kepada pasien. Tingkat sensitivitas bakteri terhadap antibiotik sangat bervariasi. Bakteri Gram positif biasanya lebih sensitif terhadap kebanyakan antibiotik dibandingkan dengan bakteri Gram negatif. Namun beberapa antibiotik hanya sensitif terhadap bakteri Gram negatif saja atau ada juga sensitif terhadap keduanya (Brock, et al., 1987).

Sensitivitas bakteri patogen terhadap suatu antibiotik harus diuji untuk mengetahui apakah bakteri tersebut sensitif atau resisten. Uji sensitivitas berguna untuk menentukan pengobatan yang tepat terhadap bakteri patogen penyebab penyakit infeksi (Dzen, dkk., 2003). Resistensi dapat menyebabkan pengobatan penyakit menjadi lebih sulit, lamanya sakit menjadi lebih panjang dan dapat meningkatkan risiko timbulnya komplikasi atau bahkan kematian (Tjay, 2008).

Berdasarkan hal tersebut peneliti ingin menguji sensitivitas bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap kotrimoksazol.

1.2Perumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, perumusan masalah dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:

1. apakah bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli sensitif terhadap kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku?

2. apakah kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku secara mikrobiologi memiliki mutu yang sama?

1.3Hipotesis

Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis penelitian ini adalah:

1. bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli sensitif terhadap kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku;

2. kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku secara mikrobiologi memiliki mutu yang sama.

1.4Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk :

1. menentukan diameter zona hambat kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli;

2. menentukan sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku menggunakan metode Kirby-Bauer;

3. membandingkan mutu kotrimoksazol dalam beberapa produk sediaan tablet dan kotrimoksazol baku secara mikrobiologi.

1.5Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap kotrimoksazol dari beberapa produk sediaan tablet.

1.6Kerangka Pikir Penelitian

Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter

Konsentrasi kotrimoksazol

Diameter zona hambat

Sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap kotrimoksazol

UJI SENSITIVITAS Staphylococcus aureus DAN

Escherichia coli TERHADAP KOTRIMOKSAZOL DALAM

SEDIAAN TABLET

ABSTRAK

Kotrimoksazol merupakan kombinasi sulfametoksazol dan trimetoprim dengan perbandingan 5 : 1. Spektrum kerja kotrimoksazol lebih luas dibandingkan sulfonamida. Produk tablet kotrimoksazol tersedia dalam berbagai nama dagang dari produsen yang berbeda. Efektivitas kotrimoksazol terhadap bakteri dapat berubah selama distribusi dan penyimpanan, sehingga perlu dievaluasi melalui pengujian secara mikrobiologi. Penelitian ini dilakukan untuk menguji sensitivitas bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap beberapa produk tablet kotrimoksazol.

Penelitian ini dilakukan terhadap lima produk tablet kotrimoksazol yang diambil secara purposif. Sampel terdiri dari satu produk tidak bermerek yang diberi kode A dan empat produk bermerek dengan kode masing-masing B, C, D, dan E. Kelima produk tersebut dibuat dengan berbagai konsentrasi dengan perbandingan trimetoprim : sulfametoksazol 25:125, 50:250, 100:500, 200:1000, 300:1500, 400:2000, 500:2500 µg/ml. Pengujian sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap produk kotrimoksazol dilakukan menggunakan metode Kirby-Bauer.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli tidak sensitif (resisten) terhadap kelima produk kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku pada konsentrasi 25:125 µg/ml. Namun pada konsentrasi 100:500 µg/ml, seluruh produk kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku efektif menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus

dan Escherichia coli dengan diameter zona hambat masing-masing 18,86 – 21,13 mm dan 18,10 - 20,13 mm. Analisis secara statistika menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov dan Kruskal-Wallis menununjukkan bahwa produk kotrimoksazol A, B, C, D, dan E serta kotrimoksazol baku memiliki mutu yang sama secara mikrobiologi (p>0,05).

Kata Kunci: Uji sensitivitas, kotrimoksazol, sulfametoksazol, trimetoprim, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

SUSCEPTIBILITY TEST OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli TO COTRIMOXAZOLE TABLET

ABSTRACT

Cotrimoxazole is a sulfamethoxazole and trimethoprim combination in ratio of 1:5. The work spectrum of cotrimoxazole is broader than sulfanilamide. Cotrimoxazole tablet is available in several branded names from different manufacturers. The effectivity of cotrimoxazole againts bacteria can be changed during distribution and storage, so it needs to be evaluated by microbiological testing. This study was carried out to investigate the susceptibility of Staphylococcus aureus and Escherichia coli to cotrimoxazole tablets.

This study was conducted by collecting 5 cotrimoxazole tablet products purposively. The samples consisted of an unbranded product which was labelled as A and 4 branded products that were labelled as B, C, D, and E, respectively. All of products were prepared by diluting cotrimoxazole at the different concentrations of trimethoprim : sufametoxazole in ratio of 25:125,

50:250, 100:500, 200:1000, 300:1500, 400:2000, and 500:2500 μg/ml,

respectively. Susceptibility testing of Staphylococcus aureus and Escherichia coli to cotrimoxazole products was evaluated using Kirby-Bauer method.

The results showed that Staphylococcus aureus and Escherichia coli resistant to all of cotrimoxazole tablets and standard cotrimoxazole at the

concentration of 25:125 μg/ml. However, at the concentration of 100:500 μg/ml, cotrimoxazole tablets and standard cotrimoxazole effectively inhibited

the growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli with the diameter of inhibition zone were 18.86 – 21.13 mm and 18.10 – 20.13 mm, respectively. Statistical analysis using Kolmogorov-Smirnov and Kruskal-Wallis tests indicated that the cotrimoxazole tablets A, B, C, D, E and standard cotrimoxazole had microbiologically equal quality (p >0.05).

Keywords: Susceptibility test, cotrimoxazole, sulfamethoxazole, trimethoprim, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

UJI SENSITIVITAS Staphylococcus aureus DAN

Escherichia coli TERHADAP KOTRIMOKSAZOL

DALAM SEDIAAN TABLET

SKRIPSI

OLEH:

PRIMA SISKA DAMANIK

NIM 101501074

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

UJI SENSITIVITAS Staphylococcus aureus DAN

Escherichia coli TERHADAP KOTRIMOKSAZOL

DALAM SEDIAAN TABLET

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi

Universitas SumateraUtara

OLEH:

PRIMA SISKA DAMANIK

NIM 101501074

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

PENGESAHAN SKRIPSI

UJI SENSITIVITAS Staphylococcus aureus DAN

Escherichia coli TERHADAP KOTRIMOKSAZOL

DALAM SEDIAAN TABLET

OLEH:

PRIMA SISKA DAMANIK NIM 101501074

Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara

Pada Tanggal 15 Juli 2014 Pembimbing I,

Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt. NIP 195006121980032001

Pembimbing II,

Popi Patilaya, S.Si., M.Sc., Apt. NIP 197812052010121004

Panitia Penguji,

Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt. NIP 195709091985112001

Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt. NIP 195006121980032001

NIP 195304031983032001

NIP 195112231980032002

Medan, 15 Juli 2014 Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara Dekan,

Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. NIP 195311281983031002

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan kasih, rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang berjudul “Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap Kotrimoksazol dalam Sediaan Tablet”. Skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Penulis menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Bapak Dekan Fakultas Farmasi Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., yang telah memberikan fasilitas kepada penulis sehingga dapat menyelesaikan pendidikan. Kepada Ibu Dra. Erly Sitompul, M.Si., Apt., dan Bapak Popi Patilaya, S.Si., M.Sc., Apt yang telah membimbing penulis dengan sabar sehingga penulisan skripsi ini dapat diselesaikan. Kepada Bapak Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt. selaku penasihat akademik yang telah memberikan nasihat dan arahan kepada penulis selama masa perkuliahan dan Bapak/Ibu Pembantu Dekan, Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU atas ilmu yang telah diberikan. Kepada Ibu Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt., Ibu Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Herawaty Ginting, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan saran, arahan, kritik dan masukan kepada penulis dalam penyelesaian skripsi ini.

Penulis juga menyampaikan terima kasih serta penghargaan yang tulus dan tak terhingga kepada Ayahanda dan Ibunda tercinta, Jandris F. Damanik dan Mintauli Girsang, atas doa dan dukungan baik moril maupun materil, abang dan adik tersayang Albeto Putra Damanik, Erik Alfako Damanik, Yessy Kartika Damanik dan Maresa Damanik, serta kerabat-kerabat, dan teman-teman semua atas motivasi dan segala bantuan dalam penyelesaian skripsi ini.

Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna, untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak demi kesempurnaan skripsi ini. Harapan penulis semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang Farmasi.

Medan, 15 Juli 2014 Penulis,

Prima Siska Damanik NIM 101501074

UJI SENSITIVITAS Staphylococcus aureus DAN

Escherichia coli TERHADAP KOTRIMOKSAZOL DALAM

SEDIAAN TABLET

ABSTRAK

Kotrimoksazol merupakan kombinasi sulfametoksazol dan trimetoprim dengan perbandingan 5 : 1. Spektrum kerja kotrimoksazol lebih luas dibandingkan sulfonamida. Produk tablet kotrimoksazol tersedia dalam berbagai nama dagang dari produsen yang berbeda. Efektivitas kotrimoksazol terhadap bakteri dapat berubah selama distribusi dan penyimpanan, sehingga perlu dievaluasi melalui pengujian secara mikrobiologi. Penelitian ini dilakukan untuk menguji sensitivitas bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap beberapa produk tablet kotrimoksazol.

Penelitian ini dilakukan terhadap lima produk tablet kotrimoksazol yang diambil secara purposif. Sampel terdiri dari satu produk tidak bermerek yang diberi kode A dan empat produk bermerek dengan kode masing-masing B, C, D, dan E. Kelima produk tersebut dibuat dengan berbagai konsentrasi dengan perbandingan trimetoprim : sulfametoksazol 25:125, 50:250, 100:500, 200:1000, 300:1500, 400:2000, 500:2500 µg/ml. Pengujian sensitivitas Staphylococcus aureus dan Escherichia coli terhadap produk kotrimoksazol dilakukan menggunakan metode Kirby-Bauer.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli tidak sensitif (resisten) terhadap kelima produk kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku pada konsentrasi 25:125 µg/ml. Namun pada konsentrasi 100:500 µg/ml, seluruh produk kotrimoksazol dan kotrimoksazol baku efektif menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus

dan Escherichia coli dengan diameter zona hambat masing-masing 18,86 – 21,13 mm dan 18,10 - 20,13 mm. Analisis secara statistika menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov dan Kruskal-Wallis menununjukkan bahwa produk kotrimoksazol A, B, C, D, dan E serta kotrimoksazol baku memiliki mutu yang sama secara mikrobiologi (p>0,05).

Kata Kunci: Uji sensitivitas, kotrimoksazol, sulfametoksazol, trimetoprim, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

SUSCEPTIBILITY TEST OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli TO COTRIMOXAZOLE TABLET

ABSTRACT

Cotrimoxazole is a sulfamethoxazole and trimethoprim combination in ratio of 1:5. The work spectrum of cotrimoxazole is broader than sulfanilamide. Cotrimoxazole tablet is available in several branded names from different manufacturers. The effectivity of cotrimoxazole againts bacteria can be changed during distribution and storage, so it needs to be evaluated by microbiological testing. This study was carried out to investigate the susceptibility of Staphylococcus aureus and Escherichia coli to cotrimoxazole tablets.

This study was conducted by collecting 5 cotrimoxazole tablet products purposively. The samples consisted of an unbranded product which was labelled as A and 4 branded products that were labelled as B, C, D, and E, respectively. All of products were prepared by diluting cotrimoxazole at the different concentrations of trimethoprim : sufametoxazole in ratio of 25:125,

50:250, 100:500, 200:1000, 300:1500, 400:2000, and 500:2500 μg/ml,

respectively. Susceptibility testing of Staphylococcus aureus and Escherichia coli to cotrimoxazole products was evaluated using Kirby-Bauer method.

The results showed that Staphylococcus aureus and Escherichia coli resistant to all of cotrimoxazole tablets and standard cotrimoxazole at the

concentration of 25:125 μg/ml. However, at the concentration of 100:500 μg/ml, cotrimoxazole tablets and standard cotrimoxazole effectively inhibited

the growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli with the diameter of inhibition zone were 18.86 – 21.13 mm and 18.10 – 20.13 mm, respectively. Statistical analysis using Kolmogorov-Smirnov and Kruskal-Wallis tests indicated that the cotrimoxazole tablets A, B, C, D, E and standard cotrimoxazole had microbiologically equal quality (p >0.05).

Keywords: Susceptibility test, cotrimoxazole, sulfamethoxazole, trimethoprim, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ... i

HALAMAN JUDUL ... ii

PENGESAHAN SKRIPSI ... iii

KATA PENGANTAR ... iv

ABSTRAK ... vi

ABSTRACT ... vii

DAFTAR ISI ... viii

DAFTAR TABEL ... xi

DAFTAR LAMPIRAN ... xii

BAB I PENDAHULUAN ... 1

1.1 Latar Belakang ... 1

1.2 Perumusan Masalah ... 4

1.3 Hipotesis ... 4

1.4 Tujuan Penelitian ... 4

1.5 Manfaat Penelitian ... 5

1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Infeksi ... 6

2.1.1 Infeksi Saluran Kemih ... 6

2.2 Antibiotik ... 8

2.2.1 Mekanisme kerja antibiotik ... 8

2.2.3 Resistensi mikroba terhadap antibiotik ... 10

2.3 Kotrimoksazol ... 12

2.3.1 Sulfametoksazol ... 12

2.3.2 Trimetoprim ... 13

2.3.3 Farmakokinetik ... 14

2.3.4 Kegunaan ... 14

2.3.5 Efek samping ... 14

2.3.6 Bentuk sediaan ... 15

2.3.7 Dosis ... 15

2.3.8 Mekanisme kerja ... 15

2.3.9. Resistensi terhadap sulfonamida dan trimetoprim . 16 2.4 Bakteri ... 16

2.4.1 Klasifikasi bakteri ... 17

2.4.2 Pengaruh lingkungan terhadap pertumbuhan bakteri 17 2.5 Bakteri Uji ... 19

2.5.1 Bakteri Escherichia coli ... 19

2.5.2 Bakteri Staphylococcus aureus ... 20

2.6 Uji Sensitivitas Bakteri terhadap Antibiotik ... 20

BAB III METODE PENELITIAN ... 23

3.1 Alat dan Bahan ... 23

3.1.1 Alat ... 23

3.1.2 Bahan ... 23

3.1.3 Mikroba uji ... 24

3.3 Prosedur Penelitian ... 24

3.3.1 Pembuatan media nutrient agar ... 24

3.3.2 Pembuatan media nutrient broth ... 25

3.3.3 Pembuatan media agar miring ... 25

3.3.4 Pembuatan suspensi standar McFarland 0,5 ... 26

3.3.5 Pembuatan stok kultur bakteri ... 26

3.3.6 Pembuatan inokulum ... 26

3.3.7 Pembuatan sampel uji ... 27

3.3.8 Pembuatan larutan baku ... 27

3.3.9 Pengujian sensitivitas bakteri ... 28

3.3.10 Analisis statistika ... 28

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 29

4.1 Pengaruh Campuran Metanol-Air terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ... 29

4.2 Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus terhadap Kotrimoksazol ... 30

4.3 Uji Sensitivitas Escherichia coli terhadap Kotrimoksazol ... 33

4.4 Analisis Perbandingan Produk dan Kotrimoksazol Baku .. 35

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 37

5.1 Kesimpulan ... 37

5.2 Saran ... 36

DAFTAR PUSTAKA ... 38

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman 4.1 Diameter Zona Hambat Campuran Metanol-Air terhadap

Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia

coli ... 29 4.2 Diameter Zona Hambat Produk Kotrimoksazol terhadap Bakteri

Staphylococcus aureus ... 32 4.3 Diameter Zona Hambat Produk Kotrimoksazol terhadap Bakteri

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Gambar Hasil Daya Hambat Produk Uji terhadap

Staphylococcus aureus ... 43

2. Gambar Hasil Daya Hambat Produk Uji terhadap Escherichia coli ... 47

3. Gambar Hasil Daya Hambat Kotrimoksazol Baku ... 51

4. Gambar Hasil Daya Hambat Blanko ... 53

5. Diameter Zona Hambat Produk dan Kotrimoksazol Baku terhadap Staphylococcus aureus ... 55

6. Diameter Zona Hambat Produk dan Kotrimoksazol Baku terhadap Escherichia coli ... 58

7. Analisis Statistika Data Diameter Zona Hambat terhadap Staphylococcus aureus ... 61

8. Analisis Statistik Data Diameter Zona Hambat terhadap Escherichia coli ... 63

9. Perhitungan Jumlah Serbuk Sampel yang Ditimbang ... 65

10. Gambar Produk Uji dan Peralatan Pengujian ... 66

11. Sertifikat Analisis Trimetoprim Baku ... 67