4.2.1 Penentuan perbandingan fase gerak
Untuk mengetahui perbandingan fase gerak, waktu tambat dan tekanan kolom pada kondisi yang optimum, maka terlebih dahulu dilakukan orientasi
perbandingan fase gerak. Orientasi dilakukan dengan cara menyuntikkan larutan 125 mcgml Kloramfenikol baku pembanding ke dalam sistem KCKT dengan
variasi perbandingan fase gerak buffer Gifford pH 6-Metanol-Asam asetat glasial dengan perbandingan 55 : 45 : 0,1, 45 : 55 : 0,1 dan 65 : 35 : 0,1, dideteksi
pada panjang gelombang 280 nm, dengan laju alir 1 mlmenit dan 1,5 mlmenit. Dicatat waktu tambat, theoritical plate dan tailing factor. Hasil orientasi dapat
dilihat pada tabel 1 dan gambar pada lampiran 4.
Tabel 1. Hasil optimasi fase gerak dengan parameter data waktu tambat, theoretical plat dan tailing factor
NO Perbandingan FaseGerak
buffer Gifford pH 6- Metanol-Asam asetat glasial
Laju alir mlmenit
Waktu tambat
menit Theoritical
plate Tailing
Factor
1. 55 : 45 : 0,1
1 1,5
9,370 8,316
1155,314 1265,485
3,396 3,141
2. 45 : 55 : 0,1
1 1,5
5,776 3,848
1153,342 1033,729
3,510 3,231
3. 65 : 35 : 0,1
1 1,5
17,129 11,492
1152,596 1176,452
3,494 3,246
Dari tabel diatas dapat dilihat perbandingan fase gerak yang terbaik adalah 55 : 45 : 0,1 dengan laju alir 1,5 mlmenit, meskipun waktu tambat yang diberikan
relatif lebih lama 8,316 tetapi memberikan theoritical plate yang lebih besar dan tailing faktor yang relatif kecil.
Selanjutnya kondisi kromatogram terpilih ini digunakan untuk identifikasi dan kuantitatif.
Universitas Sumatera Utara
4.2.2 Uji Kualitatif Kloramfenikol menggunakan KCKT
Hasil uji kualitatif kloramfenikol BPFI pada penyuntikan dengan konsentrasi 125 mcgml diperoleh kromatogram dengan waktu tambat
kloramfenikol 8,316 menit dapat dilihat pada gambar 4. Waktu tambat yang diperoleh dari pengujian BPFI dibandingkan dengan waktu tambat yang diperoleh
sampel yang akan di analisa.
Gambar 4. Kromatogram hasil penyuntikan larutan kloramfenikol BPFI dengan
konsentrasi 125 mcgml, fase gerak buffer Gifford pH 6-Metanol- Asam asetat glasial 55 : 45 : 0,1.
Hasil pengujian untuk sampel diperoleh waktu tambat yang hampir sama dengan Kloramfenikol BPFI. Waktu tambat rata-rata kapsul Kloramfenikol PT.
Indofarma 8,429 menit, Kloramfenikol PT. Kimia farma 8,411 menit, Kloramfenikol PT. Universal 8,328 menit, Kloramfenikol PT. Kalbe farma
8,362 menit dan Kloramfenikol PT. Sanbe farma 8,529 menit. Dapat diambil kesimpulan bahwa sampel mengandung kloramfenikol.
Universitas Sumatera Utara
4.2.3 Penentuan linieritas kurva kalibrasi
Kategori