2.7 Kromatografi
Kromatografi merupakan suatu proses migrasi diferensial, komponen- komponen senyawa yang dibawa oleh fasa gerak, dan ditahan secara selektif oleh
fasa diam. Peristiwa tersebut terjadi di dalam kolom kromatografi. Adanya peristiwa yang komplek pada metode kromatografi, menjadikan kromatografi
dapat digunakan untuk menganalisis senyawa sampai sedetail mungkin. Prinsip kromatografi adalah penggunaan dua fase yang berbeda yaitu fasa tetap dan fasa
bergerak. Proses pemisahan tergantung pada gerakan relatif dari dua fasa tersebut Al Baarri 2003. Penelitian ini menggunakan 4 teknik kromatografi, yaitu
kromatografi gel filtrasi, kromatografi penukar ion ion-exchange, kromatografi lapis tipis dan kromatografi cair kinerja tinggi.
2.7.1 Kromatografi gel filtrasi
Kromatografi gel filtrasiatau sering disebut filtrasi gel merupakan salah satu metode yang digunakan untuk memisahkan senyawa menurut ukuran dan bentuk.
Sampel kemudian dimasukan pada ujung atas kolom dan elusi dilakukan dengan memberikan larutan bufer melalui kolom. Larutan bufer ini memiliki prinsip tidak
boleh lebih polar dibandingkan dengan fase diam atau yang disebut juga kolom. Besar molekul akan terbagi menjadi 3 bagian yang ditunjukkan oleh berbagai
warna pada Gambar 7.
Gambar 7 Kromatografi gel filtrasi Koolman 2005. Molekul yang berukuran besar tidak mampu menembus matriks dari kolom
sehingga akan melewati kolom lebih dahulu. Bobot molekul menengah dan bobot
molekul kecil akan tertahan oleh kolom lebih lama Koolman 2005. Batas pemisahan dari sebuah ukuran merupakan indikasi bobot molekul untuk tipe
polimer Hagel 1998. Keuntungan dari metode ini adalah dapat memisahkan dengan baik molekul
besar dari molekul kecil serta dapat menggunakan berbagai pelarut tanpa harus mengganggu proses pemisahan. Penggunaan kromatografi gel filtrasi ini akan
didapatkan pemisahan yang baik, sensitifitas yang baik, dan waktu yang diperlukan untuk pemisahan cepat. Selain itu tidak ada sampel yang tertinggal
karena pelarut tidak berinteraksi dengan fase diam Skoog 2006. Namun Kehilangan molekul dapat terjadi selama proses pemurnian dengan menggunakan
teknik kromatografi gel filtrasi karena autolisis Scopes 1987. Prinsip dasar kromatografi gel filtrasi adalah partikel dengan ukuran yang
berbeda akan dielusi melalui fase stasioner pada tingkat yang berbeda. Hal ini menyebabkan pemisahan partikel berdasarkan ukuran. Setiap kolom memiliki
jangkauan berat molekul yang dapat dipisahkan. Molekul besar tidak dapat terjebak dalam matriks fase diam sehingga akan terlebih dahulu terlewati kolom.
Bobot molekul menengah dan kecil terjebak dalam matriks sehingga akan lebih lama untuk terlewati fase diam Skoog 2006.
2.7.2 Kromatografi ion-exchange
Kategori