Alat Bahan Pembuatan Stok Kultur .1 Pembuatan stok kultur bakteri Propionibacterium acne Pembuatan Inokulum Bakteri .1 Pembuatan inokulum bakteri Propionibacterium acne Sterilisasi Alat dan bahan

28

BAB III METODE PENELITIAN

Metode Penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental, yang meliputi pengumpulan produk gel anti jerawat secara purposif, penyiapan sampel uji dan inokulum bakteri serta pengujian aktivitas bakteri terhadap produk tersebut secara mikrobiologi. Mikroba uji yang digunakan adalah bakteri Propionibacterium acne. Metode yang digunakan adalah metode difusi agar menggunakan pencadang kertas. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan.

3.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah laminar airflow cabinet Astec HLF 1200 L, oven Gallenkamp, autoklaf Fison, inkubator Memmert, lemari pendingin Toshiba, neraca analitik Mettler AE 200, spektrofotometer, kuvet, jarum ose, bunsen, mikro pipet Eppendorf, pipet tetes, aluminium foil, kertas perkamen, tissu, pencadang kertas, cawan petri, kapas steril, jangka sorong, spatula, batang pengaduk, vial dan peralatan gelas di laboratorium.

3.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 96, akuades, Propionibacterium acne ATCC 6919, media nutrient agar NA, Universitas Sumatera Utara 29 media nutrient broth NB. Sampel uji yang digunakan adalah sampel A, sampel B, sampel C, sampel D, sampel E dan sampel F.

3.3 Pengambilan Sampel

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah produk gel anti jerawat dari berbagai merek dagang. Pengambilan sampel dilakukan secara purposif. Produk gel anti jerawat yang diuji yaitu Acnes sealing jell ® sampel A, CleanClear ® sampel B, Wardah ® sampel C, Oriflame ® sampel D, La Tulipe ® sampel E dan Verile ® sampel F. Tempat pengambilan sampel yang dipilih adalah Carefour psr V Pd. Bulan Medan dan untuk merek Oriflame dibeli dari agen resmi Oriflame di Jl. A.H Nasution No. 14 – 18 Medan.

3.3.1 Komposisi sampel

1. Sampel A 9 gram Tiap 9 gram gel mengandung: aqua, alcohol, butylene glycol, glycerin, sulfur, salicylic acid, ammonium acryloyldimethyltaurateVP copolymer, triethanolamine, xanthan gum, tocopheryl acetate, cinchona succirubra bark extract, stearyl glycyrrhetinate, o-cymen-5-ol isopropyl methyl phenol, BHT, pyridoxine hydrochloride, disodium EDTA, methylparaben, propylparaben, fragrance. 2. Sampel B 10 gram Tiap 10 gram gel mengandung: water, alcohol denat, hamamelis virginia witch hazel water, glycerin, polyacrylamide, cyclopentasiloxane, C13- 14 isoparaffin, C12-15 alkyl lactate, salicylyc acid, capryloyl glycine, sarcosine, cinnamomum zeylanicum bark extract, portulaca oleracea extract, cedruss Universitas Sumatera Utara 30 atlantica bark extract, cocamidoprophyl PG dimonium chloride phosphate, alcohol, cetyl lactate, PPG-2 Isoceteth-20 acetate, laureth-7, polysorbate 20, phenethyl dimeticone, dehydroxanthan gum, butylene glicol, tetrasodium EDTA, ammonium hydroxide, propylene glicol, phenoxyethanol, benzalkonium chloride, fragrance. 3. Sampel C 15 ml Tiap 15 ml gel mengandung: aqua, butylene glicol, glycerin, polyacrilamide, C13-14 isoparaffin, salicylic acid, laureth-7, triclosan, aloe barbadensis aloe vera leaf extract, allantoin, beta-glucan, benzyl alcohol, methylchloroisothiazolinone, methylisothiazolinone. 4. Sampel D 150 ml 5.0 fl.oz. Tiap 150 ml gel mengandung: aqua, sodium laureth sulfate, glycerin, cocamidopropyl betaine, PEG-7 glyceryl, coco-glucoside, sodium lauroyl sarcosinate, glyceryl oleate, disodium cocoamphodiacetate, PEG-150 pentaerythrityl tetrastearate, sodium cocoamphoacetate, salicylic acid, sodium chloride, parfum, imidazolidinyl urea, PEG-6 capryliccapric glycerides, disodium EDTA, menthol, undecylenoyl glycine, sodium hydroxide. 5. Sampel E 0,88 oz25 gram Tiap 25 gram gel mengandung: purified water, soluble collagen, niacinamide, triethanolamine, carbomer, chamomilla chamomilla reticutita extract, sulfur, tocopheryl acetate, methylparaben, Cl 44090, Acid Green 50, Fragrance. Universitas Sumatera Utara 31 6. Sampel F 10 gram Tiap 10 gram gel mengandung: water purified, ethanol, niacinamide, ceteareth-12, triethanolamine, carbomer, salicylic acid, boric acid, triclosan, potassium dihydrogen phosphate, allantoin, sodium metabisulfite, methylparaben, fragrance.

3.3.2 Kandungan zat aktif sampel

No Sampel Zat Aktif 1 A Isopropil metil fenol, sulfur, asam salisilat 2 B Asam salisilat 3 C Triklosan, asaim salisilat 4 D Asam salisilat 5 E Sulfur 6 F Triklosan, asam salisilat 3.4 Pembuatan Media Untuk Bakteri Uji 3.4.1 Pembuatan media nutrient agar Media nutrient agar NA mengandung bahan-bahan sebagai berikut: Lab-Lemco powder 1,0 gram Yeast exstract 2,0 gram Peptone 5,0 gram Sodium chloride 5,0 gram Agar 15,0 gram Cara pembuatan: Sebanyak 28 gram nutrient agar dilarutkan dalam air suling steril ad 1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan Universitas Sumatera Utara 32 tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer, lalu disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit Oxoid, 1998.

3.4.2 Pembuatan media nutrient broth

Media nutrient broth NB mengandung bahan-bahan sebagai berikut: Lab-Lamco powder 1,0 gram Yeast extract 2,0 gram Peptone 5,0 gram Sodium chloride 5,0 gram Cara pembuatan: Sebanyak 13 gram nutrient broth dilarutkan dalam air suling steril ad 1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit Oxoid, 1998.

3.4.3 Pembuatan media agar miring

Sepuluh mililiter media nutrient agar NA dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tabung kemudian diletakkan dengan kemiringan 30 – 45° dan dibiarkan pada suhu kamar hingga media memadat. Media agar miring disimpan dalam lemari pendingin Lay, 1994. 3.5 Pembuatan Stok Kultur 3.5.1 Pembuatan stok kultur bakteri Propionibacterium acne Cara kerja: Satu koloni bakteri Propionibacterium acne diambil dengan jarum ose steril, lalu diinokulasikan pada permukaan media nutrient agar miring dengan Universitas Sumatera Utara 33 cara menggores, kemudian diinkubasikan pada suhu 35 ± 2°C selama 24 jam Ditjen POM, 1995. 3.6 Pembuatan Inokulum Bakteri 3.6.1 Pembuatan inokulum bakteri Propionibacterium acne Cara kerja: Koloni bakteri Propionibacterium acne diambil dari stok kultur dengan menggunakan jarum ose steril, kemudian disuspensikan ke dalam 10 ml larutan nutrient broth NB steril lalu diinkubasikan pada suhu 35 ± 2°C selama 2 - 3 jam sampai didapat kekeruhan dengan transmittan 25 menggunakan alat spektrofotometer visible panjang gelombang 580 nm Ditjen POM, 1995.

3.7 Sterilisasi Alat dan bahan

Alat-alat dan bahan-bahan untuk pemeriksaan mikrobiologi harus disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan di oven pada suhu 160 – 170°C selama 2 - 3 jam. Bahan-bahan medium disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit, jarum ose dibakar dengan melewatkannya pada nyala api Dwidjoseputro, 1978.

3.8 Pembuatan Sampel Uji dengan Berbagai Konsentrasi Gel