Jenis dan Rancangan Penelitian Bahan Penelitian
31
Hasil dan KKt 2A ini dapat juga digunakan unluk mengisolasi flavonoid dengan cara bercak yang sesuai digunting dari kromatogram, lalu
bercak yang sama digabungkan dan setelah digunting menjadi potongan kecil- kecil diekstraksi dengan pelarut yang sesuai digunakan metanol MeOH.
Bila diperlukan, hasil pemisahan KKt 1A dapat digabungkan dengan hasil pemisahan KKt 2A hasil replikasi agar diperoleh flavonoid murni Markham,
1988. 6.
Identifikasi Isolat Flavonoid dengan Spektrofotometri UV Isolat diperoleh dari pemotongan masrng-masing bercak pada kertas
kromatogram KKt 2 A yang telah dipisahkan. Kertas dipotong kecil-kecil kemudian direndam dalam 10 ml metanol PA selama 24 jam, kemudian disaring
dengan kertas saring sebagai isolat. Identifikasi dan penentuan struktur isolat flavonoid dengan
metode spetrofotometri UV berturut-turut dilakukan pemberian pereaksi geser yaitu NaOH, H
3
BO
3
, AlCl
3
, HCl dan NaOAc dengan tahap-tahap: a.
Tahap I Larutan isolat dalam metanol dimasukkan dalam kuvet sampel. Pada
kuvet blangko dimasukkan metanol. Kemudian dibaca serapannya bersama- sama pada gelombang 200-500 nm.
b. Tahap II
Larutan pada kuvet tahap 1 ditambahkan 3 tetes NaOH 2M dibaca serapannya pada panjang gelombang 200-500 nm. Setelah dibiarkan selama 5
menit kemudian dibaca serapannya kembali untuk mengetahui kemungkinan terjadinya dekomposisi flavonoid.
a. Tahap III
Larutan isolat flavonoid yang baru dalam kuvet sampel ditambah 3 tetes AlCl
3
kemudian dibaca serapannya pada panjang gelombang 200-500 nm.
b. Tahap IV
Larutan pada kuvet sampel tahap III ditambahkan 3 tetes pereksi HCl kemudian dibaca serapannya pada panjang gelombang 200-500 nm.
c. Tahap V
Larutan isolat flavonoid dalam kuvet sampel ditambah serbuk NaOAc anhidrat sebanyak kira-kira 2 mm dari dasar kuvet, digojog dan dibaca
serapannya pada panjang gelombang 200-500 nm. d.
Tahap VI Larutan pada kuvet sampel tahap V ditambahkan serbuk H
3
BO
3
dengan jumlah setengah dari jumlah penambahan NaOAc, digojog dan dibaca serapannya pada panjang gelombang 200-500 nm.