Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fitokimia, Laboratorium Mikrobiologi dan Virologi dan Laboratorium Farmasi Fisik Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara, Medan.
3.1 Alat
Alat-alat yang digunakan adalah: spektrofotometer Visibel Dynamica Halo Vis-10, laminar airflow cabinet Astec HLF 1200 L, oven
Gallenkamp, autoklaf Fison, inkubator Memmert, lemari pendingin Toshiba, neraca kasar Ohanus, neraca analitik Mettler AE 200,
mikroskop, pH meter Hanna Instruments, viskometer Brookfield, rotary evaporator
Haake D, mikroskop BOECO-Germany, blender, alat maserasi, alat penetapan kadar air, lemari pengering, jarum ose, bunsen, mikro pipet
Eppendorf, pipet tetes, alumunium foil, kertas perkamen, tissu, pencadang kertas, cawan petri, kapas steril, jangka sorong, mortir, stamfer, spatula dan
peralatan gelas di laboratorium.
3.2 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk simplisia daun bangun-bangun Plectranthus amboinicus Lour. Spreng,
etanol 80, air suling, aqupec HV-505, triethanolamin, propilenglikol, gliserin, metil paraben, bakteri uji: Propionibacterium acne ATCC 6919,
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, media nutrient agar NA, media
nutrient brooth NB, sediaan gel pembanding verile. Bahan kimia yang
digunakan berkualitas pro analisa, kecuali dinyatakan lain: alfa naftol, asam klorida pekat, asam asetat anhidrida, asam asetat glasial, asam nitrat pekat,
Universitas Sumatera Utara
asam sulfat pekat, benzen, besi III klorida, bismut III nitrat, etanol, etilasetat, n-heksan, iodium, isopropanol, kalium iodida, kloroform, metanol,
natrium hidroksida, natrium klorida, natrium sulfat anhidrat, raksa II klorida, serbuk magnesium, timbal II asetat, dan toluena.
3.3 Penyiapan Tumbuhan
3.3.1 Pengumpulan tumbuhan
Daun bangun-bangun Plectranthus amboinicus Lour. Spreng diperoleh di Jl. Pales V No. 57 Padang Bulan, Kecamatan Simpang Selayang
Medan, Provinsi Sumatera Utara. Pengambilan tumbuhan dilakukan secara purposif sengaja yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama
dari daerah lain. Umur bahan yang diambil antara 2-3 bulan. Bagian daun yang diambil adalah daun tua yang berwana hijau tua. Gambar tumbuhan dapat
dilihat pada lampiran 2, halaman 58.
3.3.2 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di “Herbarium Bogoriense” Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi LIPI Bogor.
3.3.3 Pengolahan tumbuhan
Daun bangun-bangun Plectranthus amboinicus Lour. Spreng yang telah dikumpulkan dicuci bersih dengan air mengalir. Daun ini diangin-
anginkan kemudian ditimbang sebagai berat basah 7.765 g, lalu dikeringkan di lemari pengering pada suhu 40 - 60ºC hingga kering, dimana jika simplisia
tersebut sudah kering jika simplisia diremas maka simplisia akan hancur untuk mengetahui simplisia telah kering dilakukan penetapan kadar air simplisia,
Universitas Sumatera Utara
kemudian ditimbang sebagai berat kering 870 g, selanjutnya simplisia diserbuk menggunakan blender, disimpan dalam wadah plastik yang tertutup
rapat, terlindung dari panas dan sinar matahari.
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari yang larut air, penetapan kadar sari
yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu total dan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan pada daun bangun-bangun Plectranthus amboinicus Lour. Spreng dengan mengamati morfologi luar
tumbuhan.
3.4.2 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode destilasi Azoetropi yang meliputi penjenuhan toluen dan penetapan kadar air simplisia WHO,
1992. a. Penjenuhan toluen
Toluen sebanyak 200 ml dimasukkan ke dalam labu alas bulat, lalu ditambahkan 2 ml air suling, kemudian alat dipasang dan dilakukan destilasi
selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama ± 30 menit, kemudian volume air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml.
Universitas Sumatera Utara
b. Penetapan kadar air simplisia Labu berisi toluen tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah
ditimbang seksama, dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan toluen diatur 2 tetes per detik sampai sebagian besar air
terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes per detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen.
Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca
dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kadar air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam
persen WHO, 1992.
3.4.3 Penetapan kadar sari larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform 2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter
dalam labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, kemudian disaring. Sejumlah 20 ml filtrat
pertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105
o
C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap
bahan yang telah dikeringkan Depkes RI, 1995.
3.4.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 96 dalam labu bersumbat sambil dikocok
sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, lalu
Universitas Sumatera Utara
disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah
dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96 dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan di udara Depkes RI, 1995.
3.4.5 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan ke dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Krus porselin dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 500`- 600ºC selama 3 jam kemudian didinginkan dan
ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan WHO, 1992.
3.4.6 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam
Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut asam
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring dan dipijar sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang dikeringkan WHO, 1992.
3.5 Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia
Skrining fitokimia serbuk simplisia daun bangun-bangun meliputi: pemeriksaan senyawa alkaloid, glikosida, saponin, flavonoid, tanin dan
steroidtriterpenoid.
Universitas Sumatera Utara
3.5.1 Pemeriksaan alkaloid
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia ditimbang, kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama
2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat dipakai untuk tes alkaloid. Sebanyak 3 tabung reaksi diambil, lalu ke dalam masing-masing tabung
reaksi dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada tabung: a.
Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat b.
Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff c.
Ditambahkan 2 tetes pereaksi Meyer Alkaloid disebut positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada paling
sedikit 2 tabung reaksi dari percobaan di atas Depkes RI, 1989.
3.5.2 Pemeriksaan glikosida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g kemudian disari dengan 30 ml campuran 7 bagian volume etanol 96 dan 3 bagian volume air suling
ditambah dengan 10 ml asam klorida 2N, direfluks selama 30 menit, didinginkan dan disaring, lalu diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air
suling dan 25 ml timbal II asetat 0,4M, kemudian dikocok selama 5 menit dan disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran 3 bagian kloroform dan 2
isopropanol dilakukan berulang sebanyak tiga kali. Kumpulan sari air diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 50ºC. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol.
Larutan sisa digunakan untuk percobaan berikut, yaitu 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, diuapkan di penangas air. Sisa
dilarutkan dalam 2 ml air suling dan 5 tetes pereaksi Molish, kemudian secara
Universitas Sumatera Utara
perlahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat. Glikosida positif jika terbentuk cincin ungu Ditjen POM, 1979.
3.5.3 Pemeriksaan saponin
Sebanyak 0,5 g sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat
selama 10 detik, timbul busa yang stabil tidak kurang dari 10 menit setinggi 1- 10 cm, ditambahkan 1 tetes larutan asam klorida 2N, bila buih tidak hilang
menunjukkan adanya saponin Ditjen POM, 1979.
3.5.4 Pemeriksaan flavonoid
Sebanyak 10 g sebuk simplisia kemudian ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat
yang diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok, dan dibiarkan
memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol Farnsworth, 1996.
3.5.5 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 0,5 g sampel disari dengan 10 ml air suling panas, disaring lalu filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna, diambil 2
ml larutan lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi III klorida. Tanin positif jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman Farnsworth, 1996.
3.5.6 Pemeriksaan steroidtriterpenoid
Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan n-heksan selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan 2 tetes
asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat. Steroid positif jika terjadi
Universitas Sumatera Utara
warna biru atau hijau dan triterpenoid positif jika terjadi timbul warna merah, pink atau ungu Farnsworth, 1996.
3.6 Pembuatan Ekstrak
Serbuk simplisia diekstraksi dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 80 Farnsworth, 1996. Cara kerja:
Sebanyak 600 g serbuk simplisia dimasukkan ke dalam wadah gelas berwarna gelap lalu dimaserasi dengan 4500 ml pelarut etanol 80 selama 5
hari terlindung dari cahaya matahari sambil sering diaduk, lalu diserkai, diperas dengan kain flannel, lalu ampas ditambahkan cairan penyari secukupnya
sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 6000 ml, kemudian didiamkan selama 2 hari dan dienaptuangkan. Maserat diuapkan dengan bantuan alat
penguap rotary evaporator pada temperatur tidak lebih dari 40ºC dan diuapkan sampai diperoleh ekstrak kental Ditjen POM, 1979.
3.7 Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak Daun Bangun-Bangun
